新生兒耳聾基因聯合聽力篩查結果分析*

李 卉,高唐鑫子,吳 丹,江雨霏,宋婕萍,王維鵬,戴 翔

(湖北省婦幼保健院:1.檢驗科；2.耳鼻喉科；3.保健部，湖北武漢 430070；4.華中科技大學同濟醫學院附屬武漢兒童醫院優生遺傳實驗室，湖北武漢 430016)

先天性耳聾是常見的出生缺陷，是導致兒童殘疾的重要原因之一。我國新生兒耳聾的發生率約為1‰[1]。常規的新生兒聽力篩查通常采用耳聲發射(OAE)等電生理學技術篩查新生兒聽力損失情況，該方法存在一定的局限性，不僅受環境因素影響較大，且對遲發型、有藥物性致聾風險的患兒檢出率較低，這部分漏檢患兒可能錯過1～3歲兒童語言發育的關鍵時期而因聾致啞。導致耳聾的危險因素眾多，其中約65%的患者與遺傳因素有關[2]，70%的遺傳性耳聾屬于非綜合征型，其根本原因是基因突變，可由單一基因突變或不同基因復合突變引起。GJB2、SLC26A4、線粒體12S rRNA基因突變是我國人群最常見的耳聾致病因素。在成熟的新生兒聽力篩查的基礎上，融入耳聾基因熱點突變位點的篩查，可以從分子水平上早期發現和診斷先天性遺傳性耳聾、藥物性耳聾，對遲發性耳聾進行預警，早期進行日常聽力保健和安全用藥指導，減少聽障兒童的出現，為兒童聽力保健提供了一種新的模式。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2016年1月至2017年12月于武漢市出生，經監護人知情同意后同時接受常規聽力篩查與耳聾基因篩查的11 231例足月新生兒為研究對象，對其結果進行比較分析。

1.2聽力篩查 采用耳聲發射法于新生兒出生后48～72 h，在自然睡眠、安靜環境下進行聽力篩查，測試前用電耳鏡檢查并清理外耳道殘留物。初篩未通過者于生后42 d進行聽力復篩。2次聽力篩查均未通過者在6月齡時進行診斷性聽力檢查，采用AABR法檢測，>20 dBnHL判定為不通過。

1.3耳聾基因篩查 新生兒于出生后48～72 h采集足跟血制成血片，送武漢市衛計委公開招標的第三方檢測公司檢測。采用實時熒光定量PCR法對中國人群中最常見的3個耳聾基因的4個位點進行篩查，包括GJB2 c.235delC、SLC26A4 c.919-2A>G及線粒體DNA 12S rRNA m.1555A>G、m.1494C>T[3]。基因突變陽性或聽力確診未通過的病例采用一代測序法進行驗證。

1.4統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件，對未發現耳聾基因突變和攜帶耳聾基因突變患兒的聽力篩查結果進行比較，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1新生兒聽力篩查 11 231例新生兒中，男女比例為1.08∶1。其中59例(占0.53%)未通過6月齡聽力確診。

2.2新生兒耳聾基因篩查 11 231例新生兒中，346例患兒被檢出攜帶耳聾基因突變，陽性檢出率為3.08%。檢出以下位點：GJB2基因c.235delC雜合突變195例、純合突變4例，c.176del16雜合突變1例、純合突變1例，c.427C>T雜合突變1例，c.235delC/c.257C>G復雜雜合突變1例，c.235delC/c.299delAT復雜雜合突變2例，c.235delC/c.427C>T復雜雜合突變1例。SLC26A4基因 c.919-2A>G雜合突變109例、純合突變4例。線粒體12S rRNA m.1555A>G均質性突變18例、異質性突變2例；m.1494C>T均質性突變1例。GJB2 c.235delC雜合突變合并SLC26A4 c.919-2A>G雜合突變1例，GJB2 c.299delAT雜合突變合并SLC26A4 c.919-2A>G雜合突變1例，GJB2 c.235delC雜合突變合并線粒體12S rRNA m.1555A>G均質性突變1例，GJB2 c.235delC雜合突變合并線粒體12S rRNA m.1494C>T均質性突變2例，GJB2 c.299delAT雜合突變合并線粒體12S rRNA m.1555A>G均質性突變1例，見表1。

表1 11 231例新生兒耳聾基因常見突變攜帶及不同類型耳聾基因突變患兒聽力篩查情況(n)

續表1 11 231例新生兒耳聾基因常見突變攜帶及不同類型耳聾基因突變患兒聽力篩查情況(n)

2.3耳聾基因與聽力聯合篩查結果 11 231例足月新生兒中， 96.92%(10885/11 231)通過耳聾基因篩查，96.59%(10848/11 231)同時通過聽力篩查， 0.33%(37/11 231)通過基因篩查而未通過聽力篩查；未通過耳聾基因篩查而通過了聽力篩查的新生兒有占2.71%(324/11 231)，未通過聽力篩查的占0.43%(22/11 231)。耳聾基因突變的新生兒中聽力篩查未通過率為6.36%(22/346)明顯高于耳聾基因篩查通過的新生兒[0.34%(37/10 885)],差異有統計學意義(χ2=221.07，P<0.01),見表2。

表2 耳聾基因與聽力聯合篩查分析(n)

GJB2 235delC突變的新生兒聽力篩查未通過率為2.01%(4/199)，176del16雜合突變1例及427C>T 雜合突變各檢出1例，均未通過聽力篩查；SLC26A4 919-2A>G突變新生兒聽力篩查未通過率為6.19%(7/113)；21例線粒體12S rRNA突變中，僅有2例m.1555A>G均質性突變新生兒未通過聽力篩查。本研究中，攜帶GJB2 c.235delC、c.176del16位點純合突變；SLC26A4 919-2A>G位點純合突變；及GJB2基因復合雜合突變的新生兒均未通過聽力檢測。攜帶雙基因雜合突變的新生兒個體，絕大多數通過聽力檢測，僅有1例GJB2 c.235delC雜合突變合并線粒體m.1555A>G均質性突變患兒表現為聽力受損，見表1。

3 討論

耳聾是我國最常見的致殘病種之一，我國耳聾的人群總體發病率約為0.1%～0.3%，不同民族、地區之間有明顯差異。遺傳因素與耳聾密切相關，其根本原因是基因突變，可由單一基因突變或不同基因復合突變引起。GJB2、SLC26A4、線粒體12SrRNA是我國最常見耳聾易感基因[4]。本研究中共檢出346例攜帶耳聾基因突變，陽性檢出率為3.08%，略低于其他研究報道[5]，可能與本研究選擇的檢測位點較少有關。

GJB2基因是我國耳聾人群中最常見的易感基因，主要表現為常染色體隱性遺傳，其突變引起的耳聾約占遺傳性耳聾的50%[6]。GJB2基因突變可導致蛋白翻譯過程中的移碼突變，使其編碼的縫隙連接蛋白26功能喪失，從而改變縫隙連接通道的正常結構，導致鉀離子回流障礙引起鉀中毒，損傷耳蝸細胞導致感音神經性耳聾。GJB2基因突變者出生時聽力損失有一定的非外顯率[7]，縫隙連接蛋白的缺陷能夠影響耳蝸放大功能，從而導致遲發性、進行性聽力損失的發生[8-9]。本研究發現本地區GJB2基因突變具有較高的人群攜帶率，為1.89%，與其他報道相比略低[10-12]，可能與檢測位點較少有關。提示新生兒GJB2基因突變占有相當的比例。本研究中發現的4例GJB2基因c.235delC位點純合突變患兒均未通過聽力篩查，而195例雜合突變患兒中僅有1例未通過聽力篩查。本研究發現GJB2基因c.235delC純合突變、c.176del16基因突變、c.427C>T 雜合突變以及GJB2基因復合雜合突變的新生兒在出生時就可表現出聽力損失，因此應對其進行早期干預才能有效減少聽力障礙的發生，避免因聾致啞。對GJB2基因突變攜帶的患兒應監測并隨訪聽力，避免遲發性、進行性聽力損失引起的聾啞情況。

SLC26A4基因突變可導致前庭水管擴大，患者常因顱內壓增高受外力因素影響而導致后天性耳聾，是僅次于GJB2基因突變引起遺傳性耳聾的第二大遺傳因素，其中c.919-2A>G突變是中國人群最常見的突變方式[13]，表現為常染色體隱性遺傳。本研究中，SLC26A4 基因c.919-2A>G雜合突變的攜帶率為1.02%，僅次于GJB2基因。檢出的109例雜合攜帶者中106例通過聽力篩查，僅3例未例通過聽力篩查，而4例純合突變者早期即表現為聽力受損。盡早檢出SLC26A4基因突變，可以對患兒及家屬進行生活指導，避免激烈運動、顱腦損傷等外界環境因素導致的耳聾發生。

線粒體12SrRNA基因又被稱為藥物敏感性耳聾基因，其突變可以改變線粒體DNA空間結構，形成與氨基糖甙類抗生素作用的結合位點而導致對此類藥物敏感，使用此類藥物可引起毛細胞損傷從而導致永久性不可逆的耳聾[14]。攜帶線粒體基因m.1494C>T、m.1555A>G突變的個體，僅使用正常劑量或微量的氨基糖甙類藥物就可在極短時間內引發聽力損失，因此一旦檢出，患者應嚴格終身禁用氨基糖甙類抗菌藥物。因線粒體病遵循母系遺傳規律，還應對患者家族中未發病的母系成員提供預防性用藥指導及生育指導、產前診斷、干預措施等，從而減少藥物性耳聾的發生。

耳聲發射為目前新生兒聽力篩查的主要手段之一，但易受到環境噪聲、受檢者年齡、配合程度、外耳道分泌物殘留等影響，且部分早期通過常規聽力篩查的新生兒，后期仍會表現出聽力障礙[15]，單純進行常規聽力篩查無法識別遲發性、漸進性、藥物敏感性耳聾；單純進行耳聾基因篩查無法檢出檢測位點范圍之外的突變，均會漏篩一部分耳聾高危兒童。本研究在通過聽力篩查的11 172例新生兒中，檢出了346例攜帶耳聾基因突變，表明新生兒耳聾基因篩查可從分子水平提早明確耳聾遺傳因素，對提早發現先天性耳聾、遲發型耳聾、藥物性耳聾等高危人群具有優勢。但耳聾易感基因眾多，本研究中檢測的熱點基因位點較少，仍然存在一定局限性。本研究中59例未通過聽力篩查的新生兒中，有37例并未檢出攜帶耳聾基因突變；可能由于常規聽力篩查存在一定假陽性，也可能由于本研究所覆蓋的篩查位點較少，該類患者存在其他未在檢測范圍內的基因或位點的突變，擴大基因篩查位點應有助于提高檢出率。部分攜帶致病性耳聾基因突變的患兒早期雖未表現出明顯聽力損失，但仍應密切監測及隨訪聽力情況。

4 結論

部分類型的耳聾基因突變攜帶患兒出生時并不表現出聽力異常，單純應用常規聽力篩查會漏檢部分高危患兒。新生兒常規聽力篩查聯合耳聾基因篩查可以提高耳聾高危新生兒的檢出率，擴大耳聾高危兒童的防治范圍，能夠早期識別、早期診斷、早期干預，對降低耳聾的發生率起到重要作用。臨床應用中應當充分認識和正確對待聽力篩查和基因篩查的意義和局限性，基因篩查與聽力篩查及后期聽力學評估及隨訪相結合，才能更好地推進新生兒聽力篩查工作。