防風解熱合劑解熱鎮痛抗炎藥理作用的實驗研究?

劉 羽 張月娟△ 余 毅 李 弘 劉 林

（1.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙410208）

防風解熱合劑（防風合劑）是以地骨皮、防風等十 余味中藥制成的復方合劑，適應證為清熱解表、止咳化痰，主要用于治療小兒急性支氣管炎和慢性支氣管炎急性發作，可迅速緩解其臨床癥狀及體征。為了擴大藥物臨床應用并為臨床用藥提供理論依據，本文就防風合劑的解熱、鎮痛、抗炎作用進行了相關實驗探討。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 新西蘭兔70只，雌雄各半，購自長沙天勤生物技術有限公司，許可證號：SCXK（湘）2009-0012。SD大鼠和ICR小鼠，SPF級，均購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2013-0004。

1.2 試藥與儀器 1）藥物與試劑：防風合劑，生藥含量18 g/10mL，由湖南中醫藥大學第一附屬醫院提供，批號20140504，臨床擬用人每日生藥量為30 mL。兒感清口服液，北京同仁堂股份有限公司，批號：4260057。安乃近，華中藥業股份有限公司，批號20131155。羅痛定，山西云鵬制藥有限公司，批號A131101。阿司匹林，湖南亞大制藥有限公司，批號20140519。醋酸潑尼松片，浙江仙琚制藥股份有限公司，批號140347。大腸桿菌內毒素，Sigma公司進口分裝；2，4-二硝基苯酚，上海試劑三廠，批號0908820；冰醋酸，湖南匯虹試劑有限公司，批號20131026；角叉菜膠，索萊寶公司進口分裝；二甲苯，湖南匯虹試劑有限公司，批號20120614。2）儀器：AY-120電子分析天平，日本島津；YLS-7B足趾容積測定儀，山東省醫學科學院設備；8mm打耳器，由北京吉安得爾科技有限公司生產；BL-420生物信號采集系統，成都泰盟。

1.3 內毒素致家兔發熱實驗 新西蘭兔70只，剔除不在正常體溫范圍（38.0～39.2℃）及體溫波動＞0.3℃，最終選取60只，隨機分為對照組、安乃近組、兒感清口服液組和防風合劑高、中、低劑量組，每組10只。對照組給予蒸餾水10 mL/kg，防風合劑高、中、低劑量予防風合劑藥液5.6、2.8、1.4 mL/kg，安乃近組予安乃近藥液0.14 g/kg，兒感清口服液組予兒感清口服液2.8 mL/kg.灌胃給藥，每日1次，連續3 d。末次給藥前，耳緣靜脈注射大腸桿菌內毒素10 μg/kg，注射后立即灌胃給予相應藥物。然后測定致熱后0.5、1、2、3、4、6 h兔體溫值。

1.4 2，4-二硝基苯酚致大鼠發熱實驗 SD大鼠70只，實驗前預測體溫3次，剔除不在正常體溫范圍（36.6～38.3℃）及體溫波動＞0.3℃，最終選取體溫合格的動物60只，隨機分為對照組、安乃近組、兒感清口服液組和防風合劑高、中、低劑量組，每組10只。對照組給予蒸餾水10 mL/kg，防風合劑高、中、低劑量組予防風合劑藥液10.8、5.4、2.7 mL/kg，安乃近組予安乃近藥液0.27 g/kg，兒感清口服液組予兒感清口服液5.4 mL/kg，灌胃給藥，連續3 d。末次給藥后0.5 h后，皮下注射0.15%的2，4-二硝基苯酚1 mL/100 g，然后測量造模后0.5、1、1.5、2、2.5、3 h體溫各1次，共6次。

1.5 小鼠熱板實驗 預選痛閾值在5～30 s內的18～22 g雌性ICR小鼠60只，隨機分為對照組、羅痛定組、兒感清口服液組和防風合劑高、中、低劑量組，每組10只。對照組給予蒸餾水20 mL/kg，防風合劑高、中、低劑量組予防風合劑藥液15.6、7.8、3.9 mL/kg，羅痛定組予羅痛定藥液15.6 mg/kg，兒感清口服液組予兒感清口服液7.8 mL/kg，灌胃給藥，連續藥3 d。用熱板法分別測各鼠末次給藥后1、2、3 h的痛閾值。

1.6 小鼠醋酸扭體實驗 取60只ICR小鼠，雌雄各半，體質量18～22 g，隨機分組。分組與給藥同“1.5小鼠熱板實驗”，于末次藥后1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，記錄給藥后15 min內各動物的扭體次數，并計算扭體抑制率：扭體抑制率=［（對照組扭體次數-給藥組扭體次數）/對照組扭體次數］×100%。

1.7 大鼠足腫脹實驗 取SD大鼠60只，雌雄各半，體質量180～220 g。隨機分為對照組、阿司匹林組、兒感清口服液組和防風合劑高、中、低劑量組，每組10只。對照組給予蒸餾水10 mL/kg，防風合劑高、中、低劑量組予防風合劑藥液10.8、5.4、2.7 mL/kg，阿司匹林組予阿司匹林藥液0.135 g/kg，兒感清口服液組予兒感清口服液5.4 mL/kg。灌胃給藥，每日1次，連續5 d。末次給藥30 min后，大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL致炎。于致炎后1、2、3、4、5、6 h測右踝關節下容積1次。以足腫脹度、足腫脹抑制率為指標，計算腫脹度。腫脹度=致炎后足趾容積-致炎前足趾容積，足腫脹抑制率=［（對照組足腫脹度-給藥組足腫脹度）/對照組足腫脹度］×100%。

1.8 小鼠耳腫脹實驗 取ICR小鼠60只，雌雄各半，體質量180～220 g。隨機分為對照組、阿司匹林組、兒感清口服液組和防風合劑高、中、低劑量組，每組10只。對照組給予蒸餾水20 mL/kg，防風合劑高、中、低劑量組予防風合劑藥液15.6、7.8、3.9 mL/kg，阿司匹林組予阿司匹林藥液0.195 g/kg，兒感清口服液組予兒感清口服液7.8 mL/kg。每日1次，連續7 d。末次給藥1 h后，各組小鼠均于右耳正反面各均勻涂抹25 μL二甲苯致炎，致炎1 h后處死動物，用8 mm打孔器打取左右耳同一部位圓片，稱質量，按下式計算腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度=右耳片質量-左耳片質量。耳腫脹抑制率=（對照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/對照組耳腫脹度×100%。

1.9 統計學處理 應用SPSS19.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，數據分析采用單因素方差分析及t檢驗。P＜0.05為差異有顯著統計學意義。

2 結 果

2.1 各組家兔內毒素致發熱實驗體溫比較 見表1。與對照組比較，防風合劑高劑量組大鼠藥后1、2、3、4 h時間點體溫均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防風合劑中劑量組大鼠藥后2、3、4 h時間點體溫均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防風合劑低劑量組大鼠藥后2 h時間點體溫顯著降低（P＜0.05）。與安乃近組比較，兒感清組大鼠藥后3、4 h時間點體溫均顯著升高（P＜0.05）；與兒感清組比較，其他各組大鼠藥后各時間點體溫差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風高劑量組比較，其他各組大鼠藥后各時間點體溫變化差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風中劑量組比較，防風低劑量組大鼠藥后各時間點體溫變化差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 各組家兔內毒素致發熱實驗體溫比較（℃，±s）

表1 各組家兔內毒素致發熱實驗體溫比較（℃，±s）

與對照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與安乃近組比較，▲P＜0.05。下同

給藥后組 別n 基礎體溫對照組安乃近組兒感清組防風高劑量組防風中劑量組防風低劑量組10101010101038.92±0.2638.88±0.1838.90±0.2738.91±0.2038.91±0.2138.89±0.240.5h 39.43±0.4739.19±0.2139.30±0.3239.24±0.3239.30±0.3939.41±0.361h 39.68±0.4239.26±0.18**39.49±0.3039.31±0.33*39.41±0.4339.49±0.352h 40.01±0.3439.48±0.25**39.62±0.39*39.52±0.49*39.63±0.27*39.65±0.39*3h 40.14±0.3139.57±0.41**39.94±0.34▲39.77±0.34*39.85±0.4539.86±0.494h 40.20±0.2439.58±0.30**39.95±0.31▲39.80±0.22**39.87±0.25**39.89±0.436h 39.69±0.4739.44±0.3039.58±0.3439.51±0.3539.55±0.3739.57±0.31

2.2 各組大鼠2，4-二硝基苯酚致發熱實驗體溫比較 見表2。與對照組比較，防風合劑高劑量組大鼠藥后1、1.5、2 h時間點體溫均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防風合劑中劑量組大鼠藥后1、1.5、2 h時間點體溫均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。與安乃近組比較，其他各組體溫差異無統計學意義（P＞0.05）；與兒感清組比較，其他各組體溫差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風高劑量組比較，其他各組體溫差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風中劑量組比較，防風低劑量組大鼠藥后各時間點體溫差異無統計學意義（P＞0.05）。

表2 各組大鼠2，4-二硝基苯酚致發熱實驗體溫比較（℃，±s）

表2 各組大鼠2，4-二硝基苯酚致發熱實驗體溫比較（℃，±s）

給藥后組 別n基礎體溫對照組安乃近組兒感清組防風高劑量組防風中劑量組防風低劑量組10101010101037.74±0.1837.74±0.1537.71±0.1937.79±0.1637.81±0.1537.79±0.160.5h 38.14±0.3138.00±0.4838.14±0.2638.12±0.3938.06±0.1838.32±0.361h 38.39±0.2537.98±0.45*38.02±0.35*37.99±0.44*38.05±0.26*38.25±0.401.5h 38.50±0.2737.94±0.56*38.19±0.4538.07±0.58*38.22±0.27*38.26±0.682h 38.86±0.3338.16±0.62**38.41±0.46*38.19±0.64**38.39±0.33**38.43±0.622.5h 38.87±0.3538.32±0.53*38.60±0.4638.47±0.6238.52±0.4638.61±0.633h 38.82±0.4438.43±0.5538.85±0.3938.63±0.6638.75±0.4438.87±0.59

2.3 各組小鼠熱板實驗痛閾值和扭體實驗扭次數比較 見表3。與對照組比較，防風合劑高、中劑量組小鼠藥后1、2、3 h痛閾值明顯升高，扭體次數顯著減少（P＜0.05或P＜0.01）；防風合劑低劑量組小鼠藥后3 h痛閾值顯著升高（P＜0.05）。與羅痛定組比較，其他各組扭體次數顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），防風低劑量組小鼠藥后1 h痛閾值顯著降低（P＜0.05）；與兒感清組比較，防風低劑量組小鼠藥后1h痛閾值顯著降低（P＜0.05），不同時間痛閾值差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風高劑量組比較，各組小鼠扭體次數和不同時間痛閾值差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風中劑量組比較，防風低劑量組小鼠扭體次數和不同時間痛閾值差異無統計學意義（P＞0.05）。

表3 各組小鼠熱板實驗痛閾值和扭體實驗扭體次數比較（±s）

表3 各組小鼠熱板實驗痛閾值和扭體實驗扭體次數比較（±s）

與對照組比較，?P＜0.05，??P＜0.01；與羅痛定組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

不同時間痛閾值（s）組別n對照組羅痛定組兒感清組防風高劑量組防風中劑量組防風低劑量組101010101010給藥前24.17±6.3224.19±4.2424.72±4.8423.45±3.1124.68±4.8823.70±5.431 h 23.35±4.4535.40±11.57**34.85±12.21*33.12±11.72*32.90±12.72*25.44±6.92▲★2 h 23.56±5.6339.48±9.52**36.50±12.77**36.37±11.34**33.24±11.63*31.78±15.513 h 23.62±4.1840.13±8.84**39.51±14.84**37.44±11.44**38.96±11.41**34.33±14.85*扭體次數（次）27.03±7.6810.43±4.91**19.04±5.56*▲▲17.81±7.32*▲19.14±7.68*▲▲22.71±7.64▲▲

2.4 各組角叉菜膠致大鼠足腫脹程度的比較 見表4。與對照組比較，防風合劑高、中劑量組大鼠在致炎后5、6 h足跖腫脹度均顯著降低（P＜0.05）。與阿司匹林組比較，各組大鼠不同時間腫脹度差異無統計學意義（P＞0.05）；與兒感清組比較，各組大鼠不同時間腫脹度差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風高劑量組比較，各組大鼠不同時間腫脹度差異無統計學意義（P＞0.05）；與防風中劑量組比較，防風低劑量組大鼠不同時間腫脹度差異無統計學意義（P＞0.05）。

表4 各組角叉菜膠致大鼠足腫脹程度的比較（mL，±s）

表4 各組角叉菜膠致大鼠足腫脹程度的比較（mL，±s）

致炎后組別n對照組阿司匹林組兒感清組防風高劑量組防風中劑量組防風低劑量組1010101010101 h 0.17±0.070.151±0.060.16±0.070.16±0.060.15±0.050.16±0.062 h 0.28±0.070.25±0.060.26±0.070.25±0.060.25±0.090.27±0.073 h 0.38±0.090.33±0.040.33±0.090.31±0.070.32±0.100.36±0.124 h 0.46±0.100.35±0.05**0.38±0.070.38±0.070.40±0.100.42±0.125 h 0.45±0.040.36±0.08**0.37±0.06**0.38±0.07*0.39±0.08*0.39±0.116 h 0.40±0.080.29±0.07**0.30±0.07**0.29±0.11*0.32±0.08*0.33±0.10

2.5 各組二甲苯致小鼠耳腫脹程度的比較 見表5。與對照組比較，防風合劑高、中劑量組小鼠耳腫脹度顯著降低（P＜0.01）。與阿司匹林組比較，其他各組小鼠耳腫脹度顯著增加（P＜0.01）；與兒感清組比較，防風高劑量組小鼠耳腫脹度顯著降低（P＜0.01），防風低劑量組小鼠耳腫脹度顯著增加（P＜0.05）；與防風高劑量組比較，防風中、低劑量組小鼠耳腫脹度顯著增加（P＜0.01）；與防風中劑量組比較，防風低劑量組小鼠耳腫脹度顯著增加（P＜0.01）。

表5 各組對二甲苯致小鼠耳腫脹程度比較

3 討論

急性氣管支氣管炎是以支氣管黏膜急性炎癥為主因，表現為咽痛、鼻塞、流涕等癥狀的小兒常見疾病。抗病毒等藥物治療存在肝腎損害的風險，中醫藥防治該病具有副作用小、安全性高、全面調節的優勢，是重要的治療途徑之一。地骨皮主要含有生物堿類、有機酸類等生物活性成分，其具有抗炎、抗菌、抗病毒、解熱鎮痛等活性［1-3］。防風化學成分主要有色原酮類、香豆素類、多糖類等，具有鎮痛、鎮靜、抗過敏、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性［4-8］。本實驗研究旨在探討防風合劑具的解熱、鎮痛、抗炎的藥理作用。

發熱模型的致熱原常用的為干酵母、內毒素（LPS）、2，4-二硝基酚（DNP）、角叉菜膠等［9］。其中LPS致熱模型是目前經典的炎性發熱模型，其作用于動物后使分泌大量的炎性致熱原TNF-α、TL-I等，引起發熱［10-11］。而皮下注射DNP，能刺激動物出現無菌性炎癥，為非感染性發熱模型［12-13］。因LPS致熱模型和DNP致熱模型的經典性，研究發現，防風合劑的高、中劑量對于LPS致熱模型的家兔和DNP致熱模型的大鼠均有良好的解熱作用，說明防風合劑有一定的解熱作用，且呈一定的劑量依賴性。

熱板法是通過熱刺激足部的感覺神經末梢致痛，類似于急性銳痛，是篩選中樞鎮痛藥的有效方法［14］。扭體法是通過化學刺激致痛，類似于慢性鈍痛，是篩選弱鎮痛藥的一種敏感、簡便、重復性好的方法［15-16］。熱板實驗表明防風合劑高、中劑量組在給藥后1、2、3 h均可以明顯提高小鼠的痛閾值，低劑量組只在給藥后3 h明顯的升高痛閾值。而在醋酸致痛的扭體實驗中發現，高、中劑量組可以明顯抑制給藥后1 h，小鼠15 min內的扭體反應。在抗炎的實驗中，結果發現防風解熱高、中劑量組在給藥后5、6 h可以明顯減輕對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的腫脹度和給藥后1 h的小鼠耳腫脹度；以上結果表明防風合劑有一定的鎮痛、抗炎作用，且呈一定的劑量依賴性。

綜上所述，防風合劑具有一定的解熱、鎮痛、抗炎的作用，且呈劑量依賴性。其研究發現將為防風合劑擴大臨床應用及臨床用藥提供一定的理論依據。但其具體的解熱、抗炎、鎮痛作用機制還有待進一步的研究。