池州地區HPV感染的基因型分布特點和宮頸病變情況分析

唐爭翠，李榮，唐爭艷

(1.池州市人民醫院婦科,安徽 池州 247000；2.西安醫學院,陜西 西安 710061)

據統計全球每年宮頸癌新發病例可達50萬例，其中我國新發病例為14萬例[1]。宮頸癌的病因很明確，人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染是導致宮頸癌前病變和宮頸癌的主要病因[2-3]。因此，對HPV感染的早期診斷和早期治療能有效預防宮頸癌的發生。目前已報道的HPV型別高達200多種，其中40多種均可引發宮頸病變[4]，不同的病毒類型與宮頸癌的發生有一定的相關性，且存在著種族和地區間的差異[5]。本研究將探討池州地區HPV感染基因型分布特點及與宮頸病變發生的相關性，以提高宮頸癌及宮頸癌前病變的早期篩查效果，為本地的宮頸癌防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取2017年12月至2018年12月池州市人民醫院陰道鏡專科門診的683例宮頸病變患者(包括宮頸炎，宮頸鱗狀上皮內病變及宮頸癌)作為研究對象，其中HPV感染者558例。所有患者均無HPV疫苗接種史。患者年齡23～85歲，均行陰道鏡下定位活檢、病理檢查。以病理診斷作為宮頸病變診斷的金標準。剔除腺上皮異常患者。本研究通過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 檢測儀器和試劑 基因擴增儀為新加坡生產的 Gene Amp PCR system 2400型；恒溫雜交儀為深圳亞能生物技術有限公司生產的YN-H16 型；高速冷凍離心機為德國生產的 Eppendorf 5810 R型；生物安全柜為江蘇省蘇州市安泰空氣技術有限公司生產的BHC-1300 IIA2 型；青島海爾有限公司生產的-20 ℃冰箱等。

1.2.2 標本的采集與保存 用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，取出宮頸刷置于宮頸口，單方向旋轉4～5周以獲得足量的上皮細胞樣本，然后將宮頸刷頭部放入洗脫管中，沿刷柄折痕處折斷，旋緊洗脫管蓋，做好樣本標識，并保持洗脫管直立放置。

1.2.3 DNA提取 充分洗脫宮頸刷，并在管壁上擠干。把洗脫液全部轉移到液全部轉移至 1.5 mL 離心管中，13 000 r /min 離心10 min，離心半徑 11 cm。棄去上清液，保留管底細胞沉淀。加入 50 μL 裂解液懸浮沉淀，沸水浴加熱10 min。 13 000 r /min 離心10 min，保留上清液待用。參照HPV基因型試劑盒說明書，對DNA提取液擴增出23種 HPV基因型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、6、11、42、43、81、83)的目的片段，再將擴增產物與固定在膜條上的包括17種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6種低危型(6、11、42、43、81、83)在內的分型探針進行雜交，依據雜交信號的有無來判斷是否有這些HPV基因型的感染。

1.3 陰道鏡檢查與病理診斷

所有進入研究的患者使用深圳理邦公司的EDAN C6型電子陰道鏡，由經驗豐富的陰道鏡專科醫生實施陰道鏡下的宮頸可疑病灶多點活檢或頸管搔刮術，送至病理室制成石蠟的切片，組織切片用蘇木精-伊紅染色，由兩名專門的病理科醫生進行閱片，作出病理診斷。組織病理具體診斷結果分別是慢性宮頸炎 、宮頸低級別鱗狀上皮內病變(LSIL)、宮頸高級別鱗狀上皮內病變(HSIL)[6]及宮頸癌。

1.4 統計學分析

相關數據采用EpiData3.0軟件雙份錄入并仔細核查，運用SPSS 20.0統計軟件研究數據。[n(%)]表示計數資料，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV分型檢測結果

納入研究的683例患者，其中有558例存在HPV感染。HPV感染出現頻數最高的基因型為：HPV16型，共182次，占22.7%，其次為HPV 52型，共151次，占18.9%，HPV 58型，共79次，占9.7%，HPV 18型，共63次，占7.9%，HPV 33型，共39次，占4.9%，HPV 53型，共35次，占4.4%。HPV感染出現頻數最低的基因型為HPV83型，為0次，其次為HPV73型，1次，占0.1%。見表1。

表1 HPV感染的型別分布情況[n(%)]

注：由于存在雙重或多重感染，1個病例可多次計算。

2.2 不同病理診斷結果HPV分型結果分析

(1)宮頸炎癥中感染頻數最高的基因型為HPV16型，共50次，占22.1%，其次為HPV52型，共38次，占16.8%，HPV18型，共29次，占12.8%。(2)LSIL中感染頻數最高的基因型為HPV52型，共73次，占21.2%；其次為HPV16型，共53次，占15.4%，HPV18型，共31次，占9.0%；HPV58型，共29次，占8.4%；HPV33型，共21次，占6.1%。(3)HSIL中感染頻數最高的基因型為HPV16型，共58次，占29.9%；其次為HPV52型，共36次，占18.6%；HPV58型，共34次，占17.5%。(4)癌陽性中感染頻數最高的基因型為HPV16型，共21次，占58.3%；其次為HPV52型，共4次，占11.1%；HPV18 型，共3次，占8.3%；HPV58型，共2次，占5.6%；HPV81型，共2次，占5.6%。見圖1。

2.3 HPV單一型別感染與多重型別感染在不同宮頸病變中的分布情況

在558例宮頸病變中單一感染共338例，占60.6%，多重感染共220例，占39.4%。進一步用χ2檢驗分析結果顯示：各類宮頸病變的單一感染和多重感染的構成比的差異無統計學意義(χ2=6.554，P=0.088)，說明宮頸病變的類型與感染HPV的種類的多少無關。

表2HPV單一型別感染與多重型別感染在不同宮頸病變中的分布[n(%)]

宮頸病變類型單一感染多重感染二重三重四重五重以上合計慢性宮頸炎101(64.3)49(31.2)3(1.9)3(1.9)1(0.6)157(100)LSIL147(60.0)85(34.7)10(4.1)2(0.8)1(0.4)245(100)HSIL66(53.2)48(38.7)6(4.8)2(1.6)2(1.6)124(100)宮頸癌24(75.0)5(15.6)2(6.3)0(0.0)1(3.1)32(100)合計338(60.6)187(33.5)21(3.8)7(1.3)5(0.9)558(100)

2.4 不同宮頸病變的年齡分布情況

用Spearman秩相關分析結果顯示，年齡和宮頸病變的程度有相關性(r=0.091，P=0.018)。由表3得出，每種宮頸病變的年齡分布均呈倒“U”型，即各類宮頸病變患者中，年齡在41～50歲所占的比重最大，年齡越大或越小的患者所占的比重逐漸減少。由圖2看出，各個年齡段的患者其宮頸病變的類型的分布存在差異，≤30歲的患者，慢性宮頸炎所占的比重最大，31～60歲的患者中，LSIL所占的比重最大，>60歲的患者中，HSIL所占比重最大。

表3 683例不同宮頸病變患者的年齡分布[n(%)]

3 討論

HPV是導致宮頸鱗狀細胞癌發生發展的必要因素[7-8]。根據致病力的不同，HPV分為低危型及高危型。岑堯等[9]分析結果顯示HPV的型別分布在我國也存在一定地區性,全國范圍內6位常見高危HPV分布依次為HPV16 、HPV52 、HPV58 、HPV33、HPV18、HPV31。 HPV16型是我國最為常見的感染型別，且在南北方地區、少數民族地區和其他省市以及不同人群中均位居所有型別的第1位。

本研究中常見的高危型HPV感染型別檢出頻率前5位分別為：HPV16(22.7%)、52(18.9%)、58(9.7%)、18(7.9%)、33(4.9%)，與上述研究結論基本相符。從不同宮頸病變類型可看出，本地區LSIL中感染頻數最高的基因型為HPV52型、其次為HPV16型、HPV18型、HPV58型及HPV33型。HSIL中感染頻數最高的基因型為HPV16型，其次為HPV52型、HPV58型、HPV33及HPV31。宮頸癌中感染頻數最高的基因型為HPV16型，其次為HPV52型、HPV18 型、HPV58型及HPV81型。HPV16位居LSIL和HSIL首位，其次為HPV52型、HPV18型及HPV58型，此研究結果與萬啟軍等[10]研究結果一致，提示除HPV16型外，HPV52、58、33、31型是我國南方女性宮頸癌前病變者HPV感染比較常見的類型，與HPV16及18一樣，均應引起婦科門診醫生的重視，也應納入轉診陰道鏡檢查的指征，作為密切隨訪的對象。

HPV型別較多，機體可以單一型別感染，也有同時感染多個型別。關于多重型別感染能不能引起宮頸病變發展，目前觀點尚不一致。有部分學者認為HPV多重型別感染容易引發宮頸病變[11]。而季春燕[12]研究顯示，HPV感染型別數和宮頸病變級別沒有相關性認為本研究結果提示，宮頸病變的類型與感染HPV的種類的多少無關。本研究結果和第二種觀點較為一致，在HPV陽性不同程度的宮頸病變中，單一型別感染占比會伴隨宮頸病變嚴重程度增加而上升。

我國宮頸癌的高發年齡段為40～60歲，其發病高峰為50～54歲[13]。本研究結果顯示，LSIL峰值為41～50歲，HSIL峰值為31～40歲和41～50歲。不論LSIL還是HSIL，其發病高峰年齡段均小于宮頸鱗狀細胞癌的高峰年齡，符合宮頸癌前病變發展為宮頸鱗狀細胞癌年齡進程。此結果提示臨床婦產科醫生尤其要重視41～50歲年齡段且感染HPV16、52、58、18和33型宮頸癌前病變的診斷和治療。

綜上所述，池州地區的宮頸病變嚴重程度與HPV感染密切相關，臨床婦產科醫師應該即要重視HPV16和18型感染[14],也要兼顧本地區較為常見的HPV52、58、33型感染,尤其41～50歲女性，以此作為陰道鏡轉診指標，如陰道鏡檢查正常,也要做好跟蹤和隨訪工作，及時干預治療，以預防宮頸癌的發生。