基于核酸適配體檢測動物性食品中氯霉素殘留的研究進展

王鑫，劉河冰，陶曉奇,3*

1(西南大學 食品科學學院，重慶，400715)2(北京維德維康生物技術有限公司，北京，100095) 3(重慶市特色食品工程技術研究中心，重慶，400715)

氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一種廣譜抗生素，又名左旋霉素，是一種由鏈霉菌產生并對多種有氧和厭氧微生物具有活性抑制作用的抗生素，分子式為C11H12Cl2Na2O3，其化學結構如圖1所示。自1949年被引入臨床實踐，CAP就由于其廉價和高效的特點，被廣泛用作治療各種傳染病的獸藥[1]。然而，隨著對CAP研究的不斷深入，科學家們發現其苯環上含有的硝基半衰期時間較長，在動物性食品中的殘留可通過食物鏈進行富集，對人體有較強的毒性，長期積累會使細菌產生強的耐藥性，甚至導致白血病，再生障礙性貧血和灰色嬰兒綜合癥等疾病發生[2]。由于其具有種種危害人類健康的毒副作用，美國、澳大利亞、日本以及中國等許多國家都禁止在動物食品中使用CAP。歐盟(European Union，EU)規定在海鮮、牛奶、肉等動物性食品中CAP的最高殘留限量(maximum residue limits，MRL)為0.3 μg/kg[3]，我國農業農村部在2002年第235號公告中也明文規定將氯霉素及其鹽、酯類列入禁止使用藥物，并在所有動物性食品的靶組織中不得檢出[4]。為滿足市場監管需要，相關行業不斷研究發展快速、準確和便捷檢測食品中CAP殘留的高新技術，為規范市場行為和保障食品安全建立了一道重要防線。

圖1 氯霉素分子結構式Fig.1 Molecule structure of chloramphenicol

近年來對CAP殘留檢測主要包括儀器分析法和免疫分析法兩大類主流檢測方法。儀器檢測方法擁有高通量、靈敏、準確的分析檢測能力，在大型分析檢測機構有著較為廣泛的應用，如氣相色譜法(GC)[5]、高效液相色譜法(HPLC)[6]、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)[7]、液質聯用法(HPLC-MS)[8]等，但儀器操作專業度高，前處理過程復雜耗時，且后期設備維護成本較高，難以推廣到市場中進行現場檢測，因而對于大批量樣品的快速高通量檢測具有一定的局限性[9]。免疫分析方法，如酶聯免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)[10]、化學發光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CLIA)[11]、放射免疫測定法(radio immunoassay, RIA)[12]、熒光免疫分析法(fluorescent immunoassay, FIA)[13]和膠體金免疫層析法(gold immunochromatography assay, GICA)[14]等，操作簡便、反應快速，靈敏度高、準確度高，能滿足大多數檢測需求，因此發展快速，應用廣泛。然而傳統的免疫分析方法均是基于抗原-抗體特異性識別反應建立起來的，其原料抗體生產成本高、周期長，免疫活性易受離子強度、pH等環境因素影響，標記修飾復雜且難以定向標記。核酸適配體作為一種新型識別元件，合成簡單快速、成本低、親和力高、性質穩定且易于修飾標記[16-17]，是一種優良的抗體替代識別元件。因此，基于核酸適配體的分析檢測研究在近些年得到了不斷發展。本文對核酸適配體進行了簡要介紹，并綜述了近5年基于該生物識別元件檢測動物性食品中氯霉素殘留的分析方法，以期為動物性食品中氯霉素殘留的有效監管和檢測技術的深入研究提供有價值的參考。

1 核酸適配體

核酸適配體(aptamer，Apt)是通過體外配體指數級富集系統進化技術(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)從人工構建的寡核苷酸文庫中篩選出來的一種對目標靶標物質具有高度親和力的單鏈寡核苷酸序列[17]，一般由25～80個核苷酸堿基組成，既可以是RNA也可以是單鏈DNA，其功能與抗體相似，不但能與多種目標物進行高特異性、高靈敏度地結合，并且還具有許多優于抗體的優點，例如核酸適配體是通過體外合成，不需要依賴動物產生受體，批次差異小，生產周期短，并且核酸穩定性好，適用范圍更廣，能夠特異性結合蛋白質、細胞、藥物以及金屬離子等，因此常常被視為更有前途的“化學抗體”[18]。憑借優越的性能，適配體已作為一種新的生物識別元件被廣泛應用于分析化學、食品安全、分子識別和藥物殘留檢測等領域的研究[19-21]。我們發現在近5年結合核酸適配體檢測CAP的相關報道中，不同的實驗所設計的適配體序列雖不盡相同，但通過仔細比對發現大部分核酸適配體的完整序列中都包含“5′-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA G-3′”這一共同序列，所以推測這就是高特異性識別目標分子CAP的適配體核心序列，并且親和性能被大家所普遍認同。

1.1 核酸適配體與靶標物結合模式

核酸適配體對靶標物的親和性類似于抗體抗原的特異性免疫識別，其結合模式可劃分為兩大類，即單站點結合和雙站點結合模式[23]。如圖2所示，單站點結合主要是針對小分子靶標物，當核酸適配體與小分子物質結合后自身構象會發生一定的改變，核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)研究證實了小分子通常被結合于適配體自身的折疊區域[24]，這種結合模式也是被運用最多的。雙站點的結合模式則常常被設計用于結合蛋白質等大分子物質，與小分子相比，類似于蛋白質等大分子靶標物在結構上往往更加復雜，但是這些復雜結構為堆疊、結構互補、氫鍵結合等結合方式提供了更多的可能，使有多個結合位點大分子常被設計成“三明治”夾心法檢測模式。這兩種結合模式的探明為后續研究的實驗方案設計提供了強有力的理論支撐。

圖2 核酸適配體結合模式[23]Fig.2 Aptamer-based assay formats

2 檢測方法

近年來應用核酸適配體檢測氯霉素殘留的研究有大量報道，主要有比色檢測法、熒光檢測法、化學發光檢測法、表面增強拉曼散射檢測法和生物傳感器檢測法等，表1為相關檢測方法的文獻簡要概括對比。研究者們通過對核酸適配體的巧妙設計，同時結合納米金顆粒(AuNPs)、磁性納米粒子、熒光素和量子點(quantum dots, QDs)等各種類型的新型納米標記材料，使動物性食品中氯霉素殘留的檢測方式多樣化，并且朝著快速簡便、高靈敏度、高準確度和高通量的方向不斷發展，表2為相關新型納米標記材料特性的簡要概括總結。

2.1 比色分析法

比色法是指基于有色待測物質顏色的深淺與組分含量在一定范圍內成比例的原理，通過比較或測量物質溶液的顏色深淺來確定含量，早在20世紀40年代就被應用于定量分析，是一種常見的分析方法[25-26]。基于核酸適配體檢測氯霉素殘留的比色法成本低，響應快速，靈敏度及精密度高[27]，有一定的發展前景。

在傳統比色法檢測中，ELISA方法利用辣根過氧化物酶(HRP)催化H2O2和3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺(TMB)反應產生顏色信號，且待測物濃度與顏色深淺相關。該方法所需的儀器設備簡單，適合批量檢測，然而這類非均相反應需要多次洗滌孵育，操作繁瑣耗時。類似于ELISA反應，YAN等[28]開發了一種基于核酸適配體的比色法用于檢測動物性食品中CAP殘留，運用經典的生物素-鏈霉親和素信號級聯放大系統，既可通過目測顏色變化定性確定樣品中是否存在CAP超標殘留，也可進一步使用酶標儀測定吸光度達到定量測定的目的，在蜂蜜及魚肉中的檢測限達到了0.003 1 μg/kg，添加回收率為96.2%～109.0%，該方法靈敏度高且準確度高，表現出了適配體對CAP優異的識別能力。此外，新型納米材料的開發為構建比色法檢測技術提供了全新的思路和平臺，同樣是催化TMB顯色，HUANG等[29]將核酸適配體特異性識別結合的特性與DNAzyme功能化納米探針催化顯色的原理相結合，建立了一種新型比色生物傳感器用于快速檢測CAP殘留，將過氧化氫酶模擬物及適配體互補探針cDNA與納米金結合，構建新的納米金探針，過氧化氫酶模擬物能催化H2O2使TMB的氧化并產生比色信號，該方法中新型納米材料的引入使檢測信號大大增強，奶粉樣品中添加回收率在92.0%～104.0%，相對標準偏差(RSD)<2.7%，表明了基于核酸適配體的比色法對氯霉素的檢測具有較強的檢測能力，但不足之處是這種四聯體DNAzyme制備納米探針過程復雜，在大批量檢測效率上應用相對受限。

表1 核酸適配體檢測氯霉素殘留的檢測方法Table 1 The methods of chloramphenicol residue detection via aptamers

近年來關于納米金的比色研究在分析檢測領域十分熱門，金納米粒子高消光系數和良好的光學效應使得適配體和金納米粒子的組合成為比色生物測定中成為最強大的生物傳感之一[30]。核酸適配體的單鏈DNA(ssDNA)上的N原子與金原子的靜電吸附作用可以使其結合在納米金上，AuNPs在分散狀態下溶液為酒紅色，當加入鹽離子后會引起AuNPs聚集從而呈現藍紫色。根據AuNPs在不同狀態下顯色不同的原理，JAVIDI等[31]設計了一個基于Watson-Crick堿基配對的適配體終端鎖(ATL)比色法來檢測CAP，具有環狀結構的ATL由完整的適配體序列和用作鎖定探針(LP)的短序列寡核苷酸共同組成，當待測物中存在CAP時，特異性適配體識別CAP形成復合物，LP片段從ATL中解離吸附在納米金顆粒上，避免了加入鹽離子而引起的聚集，溶液依然保持透亮的酒紅色，反之鹽離子誘導納米金聚集而呈現藍紫色，奶粉樣品中在0.1～10.0 nmol/LCAP與相對響應信號有良好的線性關系，最低檢測限為0.03 nmol/L。該方法的最大優勢在于無需對適配體以及其他分子進行任何修飾，檢測所需設備少，步驟簡單，通過紫外可見光光譜即可定量檢測，弊端是樣品的前處理要求較高，否則基質會影響AuNPs的聚集從而造成檢測結果不準確。

2.2 熒光分析法

熒光分析法是基于一些熒光物質能夠在一定的激發波長下發出熒光的原理，通過檢測熒光的強弱來進行定性定量分析的一種方法，具有高靈敏度、低背景值和選擇性好等明顯的優點，在生命醫學，化學等各種檢測領域應用廣泛[32-33]。核酸適配體新技術與熒光分析法的結合為氯霉素等抗生素殘留檢測提供了新思路，同時新型納米熒光材料的應用也大大提升了熒光分析法的檢測能力。核酸適配體具有易被化學鍵修飾的特點，因此常常對核酸適配體或其互補鏈cDNA末端進行熒光標記，對CAP的檢測根據核酸適配體的標記與否可以劃分為熒光標記型檢測法和熒光非標記型檢測法[34]。

表2 新型納米標記材料主要特性Table 2 Main features of new marking nanomaterials

2.2.1 熒光標記型檢測法

熒光標記的捕獲探針與目標物結合能夠顯著性地改變體系中的熒光信號強度，且待測物濃度與信號強度相關，通過檢測反應前后體系熒光信號的變化即可測算出待測物濃度。目前常應用于標記核酸適配體的熒光物質有量子點、熒光染料、上轉換材料以及貴金屬納米簇等。

量子點(QDs)又稱半導體納米粒子，是一種準零維納米材料，其作為新型的納米材料憑借量子產率高，發射光譜窄、激發光譜寬，抗光漂白以及可測量的熒光強度等優點，被廣泛應用作熒光標記材料。ALIBOLANDI等[35]以量子點作為能量供體，氧化石墨烯(GO)作為能量受體，構建了一個基于適配體的QDs-GO熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)平臺用于檢測牛奶樣品中的氯霉素，反應中熒光猝滅效率超過90%，檢測限為0.03 μg/L，檢測范圍為0.1～10 nmol/L，該方法與CAP類似物無交叉反應，準確度高，達到了良好的檢測效果，最大缺點在于GO的制備及純化耗時約1周，實驗周期長。由于FRET檢測模式具有高靈敏度、高效率的優勢，因此近幾年在熒光檢測法中的研究十分熱門，MIAO等[36]將CdSe量子點作為能量供體，AuNPs探針作為受體，建立了一種基于FRET的適配體檢測方法用于檢測氯霉素，在魚肉的實際樣品中檢測限為0.002 μg/L，線性范圍為0.001～10 μg/L，與傳統的ELISA相比，該方法不但檢測步驟少，而且更加省時，從添加樣品到測出熒光時間不足10 min，不足之處是探針的制備技術難度大，成本較高。在后面的進一步研究中，MIAO等[37]又創新性地開發出了一種脂質體囊泡探針用于氯霉素FRET檢測。如圖3所示，脂質體囊泡由雙磷脂分子層結構的兩端親水基團和中間疏水基團構成，包裹的大量QDs可以放大探針信號，在牛奶樣品中檢測限為0.000 3 μg/L，線性范圍為0.001～10 μg/L，添加回收率均在90%～103%。這種均相檢測熒光“開關”模式操作簡便，結合熒光分析儀即可測定，并且較未改進的FRET模式檢測靈敏度提高了近7倍，是目前基于適配體熒光法檢測CAP殘留的所有報道中檢測限最低的方法。

圖3 基于核酸適配體的熒光共振能量轉移檢測氯霉素[37]Fig.3 FRET detection based on aptamer for chloramphenicol

上轉換納米粒子(upconversion nanoparticles, UCNPs)是一種優秀的生物材料，具有檢測背景值低，抗光漂白，低毒性，壽命長，大的逆斯托克斯(Stokes)位移，改變組分比例還可實現多重檢測等特點，常被用作熒光標記材料。WU等[38]建立了一個上轉換納米粒子的適配體檢測平臺，將連接有CAP適配體的磁性納米粒子(magnetic nanoparticles，MNPs)作為捕獲探針，連接有cDNA上轉換納米粒子作為信號探針，捕獲探針與靶標物結合后引起cDNA解離并釋放上轉換納米粒子，導致MNPs表面熒光信號減弱，在牛奶樣品中檢測限達到0.01 ng/mL，添加回收率為93.67%～101.41%。該方法原理簡單，靈敏度高，由于使用980 nm激光激發，可以完全避免源自溶液當中生物分子的自發熒光，同時這種檢測方法具有一定的通用性，基于該原理通過替換合適的適配體，可以嘗試用于檢測其他抗生素。但樣品的制備涉及2個標記過程，需要人工設計，具有一定的難度，并且標記的批間差異性也難以保證。

2.2.2 熒光非標記型檢測法

同熒光非標記型檢測法相比，標記型的檢測方法的檢測靈敏度更高，但是需要對探針進行化學合成標記，過程繁瑣耗時，非標記型檢測模式則相對更加簡便，無需使用化學試劑進行復雜的標記及最后的分離純化。DUAN等[2]首次報道了使用實時熒光定量PCR高靈敏度檢測食品中的氯霉素殘留，設計的方法中CAP適配體首先與生物素化的cDNA進行互補配對，cDNA通過生物素-鏈霉親和素結合系統固定在綴合有親和素蛋白的MNPs上，當存在CAP時，適配體與CAP特異性結合形成發夾結構，并從MNPs上釋放用于實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測。該方法優化后能對真實牛奶樣品中CAP殘留的進行高靈敏度檢測，檢出限為0.1 ng/mL,線性范圍為0.1～20.0 ng/mL,添加回收率為94.0%～102.0%，并且對氯霉素類似物甲砜霉素(TAP)和氟苯尼考(FF)顯示出了較高的選擇性。這種非標記熒光檢測方法中PCR技術靈敏度高，但是操作過程復雜，對實驗條件有一定的要求，因此在現場的快速檢測場景中有一定的局限性，但依然提供了一個新的檢測思路與方法。

2.3 化學發光檢測法

化學發光(chemiluminescence，CL)，指由發光物質自身電子從激發態躍遷到基態所產生的發光，是不需要使用外部光源或光學系統的化學反應，與熒光分析法相比可以有效避免光漂白效應，其檢測信號是由光子數決定的，具有靈敏度高，儀器簡單，校準范圍寬，操作簡便，檢測時間短等優點，因此在分析檢測領域中占有重要地位。HAO等[39]開發了一種基于化學發光的適配體檢測方法，將連有生物素化CAP適配體的MNPs作為功能化的捕獲探針，連有乙基異魯米諾(ABEI)的花狀金納米結構(AuNF)作為信號探針，結合對碘苯酚(PIP)共同構建了一個穩定的ABEI-H2O2-PIP化學發光系統；該方法基于競爭的形式實現了對CAP的高靈敏度檢測，牛奶樣品中檢測限為0.01 ng/mL，線性范圍為0.01～0.20 μg/L。與于秀霞[40]使用HRP催化魯米諾的化學發光的方法相比，基于核酸適配體的化學發光分析法中AuNF靈敏度高，適配體和磁分離穩定性較好，測定重現性好，是更具有前景的小分子藥物殘留的檢測方法，但制備修飾的ABEI-AuNF信號探針相當耗時，相比之下總體優勢不夠突出，同時該方法也是近5年基于化學發光檢測僅有的一篇報道。

2.4 表面增強拉曼散射檢測法

表面增強拉曼散射(surface-enhanced Raman scattering, SERS)是一種表面敏感技術，具有快速響應，超高靈敏度，操作簡單，能同時進行多重檢測等特點，是超靈敏檢測復雜基質中特定分析物的最有效的技術之一，已廣泛應用于食品安全、生物診斷、醫學和化學等領域。YAN等[41]通過使用銀材料封裝的內層金，制成了一種金核銀殼納米結構材料用于SERS檢測CAP，將熒光染料Cy5修飾的適配體與納米金粒子通過共價鍵連接作為分子識別探針，當存在CAP時，適配體結合CAP形成莖環結構并引起解離，隨著Cy5-適配體與金核表面分離，SERS信號強度顯著降低。與在納米顆粒外層附著染料的其他SERS傳感器相比，該方法表現出的靈敏度更高，信號穩定性也更好，實際的加標乳樣品中，檢測限為0.19 ng/L，回收率為96.6%～110.2%，變異系數為1.8%～4.9%，具有對CAP殘留的高靈敏度和檢測的能力。與免疫分析方法相比，YANG等[42]開發出了1種競爭性免疫分析和磁分離的SERS生物傳感器用于精確和靈敏地檢測氯霉素，這種SERS生物傳感器由于磁分離技術的富集作用對氯霉素檢測信號具有很好放大作用，檢測限達到10 ng/L，線性范圍0.001～10 μg/L，但結果表明，免疫分析方法檢測限低于適配體檢測方法。總而言之，結合適配體的SERS平臺適用性廣泛，檢測效果好，通過適配體稍作變更即可以實現對其他類型的抗生素殘留的檢測，但遺憾的是，探針制備復雜以及昂貴的檢測成本限制了其應用推廣。

2.5 電化學適配體生物傳感器檢測法

電化學適配體生物傳感器是基于核酸適配體材料建立并利用電信號作為分析和檢測信號的新型生物傳感檢測裝置，具有靈敏度高，響應速度快等優點。CHEN等[43]首次基于納米金屬有機骨架(NMOF)建立了一種新型電化學適配體傳感器同時檢測包括氯霉素在內的多種抗生素；使用NMOF包封金屬離子并固定cDNA作為信號標簽，CAP與cDNA競爭性地結合適配體，CAP靶濃度與測定的電流信號成比例，該方法的檢測限低至0.19 pmol/L，同時線性范圍為0.002～100 nmol/L，達到了5個數量級，對CAP的檢測性能非常優秀，并且通過改變相應的適配體還能檢測其他靶標物，但電化學生物傳感器需要對電極進行改性設計，可能會影響生物活性分子的構型從而降低識別能力，檢測性能的穩定性也難以保證。電化學發光(electro chemiluminescence，ECL)同時具有電化學和化學發光2種方法的優點，與化學發光方法相比可以實現更精確的分析物測定。FENG等[44]建立的一種“雙電勢”的新型電化學發光適配體傳感器可同時檢測孔雀石綠(MG)和氯霉素，將與適配體互補的cDNA同魯米諾-納米金粒子連接并修飾到陽極上作為發射體，使電化學發光信號的增強取決于目標物MG和CAP的濃度，在實際魚類樣品的檢測中，檢測限分別為0.03 nmol/L和0.07 nmol/L。該方法反應迅速，從添加樣品到讀出結果僅需要1 min左右即可完成，精確度和重現性均表現良好，并且具有多重檢測的能力，但實驗中的電極修飾難度較大，對實驗的條件要求苛刻，限制了大規模的推廣應用。

2.6 微流控電泳法

微流控電泳法作為一種快速篩選和高通量檢測的方法，已成功作為高通量DNA或ssRNA的分離系統，可根據不同序列的堿基對數不同的原理來檢測ssDNA和dsDNA。核酸適配體本質也是ssDNA或RNA，基于此原理，ZHOU等[45]開發了一種新型無標記的適配體微流控電泳平臺用于自動檢測抗生素殘留，利用靶標物CAP和cDNA同時競爭結合適配體，電泳平臺根據不同比例的dsDNA和Apt-CAP產生不同的信號比率，實現了對CAP殘留的精確檢測，在實際的魚肉以及牛奶的樣品中，檢出限達到0.003 μg/mL，并且回收率良好。ZHOU等[46]后來又進一步在此模型上采用PCR信號放大原理進行同時測定卡那霉素和CAP，將CAP檢測的靈敏度再次提高了將近1倍。該方法在抗生素殘留的檢測方面具有非常大的優勢，首先作為電泳方法，適配體探針不需要信號源的標記，其次整個檢測過程可以在3 min之內完成，具備高通量檢測的能力，并且需要的樣品體積小，也適宜于痕量檢測，但樣品在檢測前需離心、真空干燥以及氮吹處理，因此基于核酸適配體的微流控電泳法在實驗室層面的CAP殘留檢測乃至其他種類的抗生素篩選均具有較大的應用潛力，但不適合現場的快速檢測。

2.7 側流層析試紙條法

可視化的層析試紙條法是一種比較常見的低成本并且無需專業技能即可上手操作的快捷檢測方法。在近些年來得到了飛速的發展，已經成為食品檢測乃至醫藥研究領域的熱點方向[47]。傳統的基于抗原抗體免疫分析試紙條技術已經在很多方面進行了商業化的生產，但抗體本身具有一些局限性，比如批次的不均一性，無免疫活性或具有毒性的物質難以去制備抗體等，使得利用核酸適配體代替抗體去設計測流層析試紙條成為了一個新的突破口。趙帥[47]建立了一種基于核酸適配體的側流層析試紙條法用于快速檢測氯霉素的殘留，試紙條的樣品墊上附著有適配體標記的納米金，T線和C線分別通過生物素-鏈霉親和素系統固定有不同序列的cDNA，連接有納米金的適配體會先與靶標物CAP結合，此方法選擇性良好，當存在與CAP結構類似物氟苯尼考和甲砜霉素時，也不會產生信號的變化，借助熒光檢測讀數儀能夠定量準確檢測出CAP含量，在加標樣品的檢測中檢測限為0.06 μg/mL，然而BERLINA等[48]基于量子點并結合傳統的抗原抗體免疫層析法對牛奶樣品中的CAP檢測限達到了0.2 ng/mL，相比之下提高靈敏度則是目前亟待解決的問題。基于核酸適配體的側流層析法是一個快速定性定量檢測CAP殘留的好途徑，但試紙條本身不穩定，不能夠永遠維持像實驗室這樣一個良好的檢測環境，容易受到外界環境如溫度、濕度等因素的影響，因此具有許多不可控的因素而最終影響檢測的靈敏度和準確性，這是在以后開發類似方法中需要注意并加以解決的地方。

3 展望

氯霉素等獸藥超標殘留嚴重威脅著人們的生命健康，同時也影響我國動物源性食品對國際市場的外貿出口，因此發展簡單快速并且高靈敏度的檢測方法對保障食品安全和相關產業體系的良性發展具有重大的戰略意義。

核酸適配體作為新型識別元件具有許多獨特的優勢，它可以通過化學合成進行大量低成本生產，性質穩定，并易于進行官能團修飾以用作標記或固定；可以與新型功能化的納米材料如金屬納米粒子、磁性納米材料、上轉換納米材料、熒光染料以及量子點等結合使用提高檢測能力；與新的檢測策略結合應用如FRET等在近幾年的分析檢測領域中更是炙手可熱。這些優勢使得適配體的研究應用極富價值，然而抗體所構建的檢測體系仍是商業化應用的主流，核酸適配體的實際應用依然存在許多的不足與挑戰，例如臨床或環境樣品基質中通常含有多種干擾物質，其中有些會強烈地阻礙靶標與適配體之間的特異性識別，生物樣品中的某些成分也會導致適配體自身折疊從而無法進行準確檢測[49]；因此在核酸適配體檢測真正商業化應用之前，這些問題都需要去一一解決。未來關于核酸適配體檢測氯霉素的創新首先可能集中在提高靈敏度、選擇性以及樣品通量和多重檢測系統的設計上；其次適配體與檢測能力優異的電化學生物傳感器相結合并解決電極改性問題，將會使其在實際應用中更進一步[50]；最后，目前大多數報道的適配體都是對目標物進行體外檢測，設計適當的傳感器能在復雜基質中或體內定性定量檢測也將是一個重點的突破方向。

更好的檢測方法往往是基于現有的基礎上去精進并不斷探索出來的。隨著科學技術的進步，新的檢測策略、新型標記材料的研究不斷深入，簡便化、高通量、多殘留和高精度的檢測體系正日益完善，盡管仍有一些技術瓶頸需要去突破，但作為適用性更強的分子探針，相信核酸適配體在氯霉素等獸藥殘留檢測領域的研究應用將會更加深入，未來在健康、環境和食品質量方面的應用也將潛力巨大。