鹽酸丁螺環酮大鼠在體腸吸收特征*

王柯玉，牟雄軍，林寧

(湖北中醫藥大學藥學院，武漢 430065)

鹽酸丁螺環酮(buspirone hydrochloride，BUS)為氮雜螺環癸烷二酮化合物，于1985年由德國Bristol-Myers上市，目前已在世界上很多國家廣泛使用。該藥物在臨床上主要用于廣泛性焦慮癥，還適用于更年期綜合征、抑郁癥、注意力缺乏、精神分裂癥等[1]。丁螺環酮作為新一代非苯二氮類抗焦慮藥，幾乎無依賴性與耐藥性，能長期服用，且無鎮靜催眠作用，對認知無影響，被認為是較為理想的抗焦慮藥[2]。

BUS生物半衰期約2.6 h，血藥峰值濃度較低，目前市場上出售大多為普通片，其存在服藥次數多、順應性差、生物利用度較低等問題，因此開發BUS緩釋、控釋制劑具有臨床應用價值[3]。目前關于BUS腸道吸收及其機制研究的報道較少，研究藥物腸道吸收機制和吸收動力學對于指導口服藥物的劑型設計，尤其對緩釋、控釋制劑的劑型設計具有重要意義。因此，本研究選用大鼠在體腸灌流法，采用高效液相色譜(HPLC)法測定循環灌流液中BUS濃度，考察藥物在大鼠腸道的吸收動力學特征，為BUS的緩釋、控釋制劑的研究與設計提供生物藥劑學依據[4]。

1 材料與儀器

1.1實驗動物 斯潑累格·多雷(SD)大鼠，雄性，體質量(250±50)g，購自華中科技大學同濟醫學院動物實驗中心，實驗動物生產許可證號：SCXK(鄂)2011-0009，實驗動物使用許可證號：SYXK(鄂)2013-0072。動物飼養于湖北中醫藥大學實驗動物中心，溫度18～35 ℃，相對濕度45%～75%，適應性喂養1周后開始實驗，手術前禁食12 h，自由飲水。

1.2試藥 BUS原料藥(上海玉博生物科技有限公司，批號：20150722，含量≥99.9%)；BUS對照品(原料藥精制，批號：201610)；酚紅(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20150424)；戊巴比妥鈉(中國醫藥集團上海化學試劑公司，進口分裝，批號：F20141216)；甲醇(色譜純，TEDIA)；乙腈(色譜純，TEDIA)；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3儀器 戴安P680高效液相色譜儀(美國戴安)；UV-1800型紫外-可見分光光度計(日本島津)；BP211D電子天平(德國賽多利斯天平有限公司，感量：0.01 mg)；HL-2恒流泵(上海滬西分析儀器廠)；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長城科工貿有限公司)；SK2200H型超聲波清洗儀(上海科導超聲儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1腸循環液中BUS的含量測定

2.1.1溶液的配制 K氏緩沖液的制備：稱取氯化鈣0.37 g、葡萄糖1.40 g，置燒杯中，用適量水溶解；再稱取氯化鈉7.8 g、氯化鉀0.35 g、氯化鎂0.22 g、碳酸氫鈉1.37 g、磷酸二氫鈉0.32 g，依次加入另一燒杯中溶解；二者混合并定容至1 000 mL，測得pH值為7.4。空白腸循環液的制備：將配置好K氏液經腸循環裝置，以5.0 mL·min-1流速沖洗大鼠腸道約45 min，收集，濾過，即得空白腸循環液。對照品溶液的制備：精密稱取BUS對照品適量，用空白腸循環液溶解并定容，配制成含BUS濃度為0.101 mg·mL-1的對照品溶液。供試品溶液的制備：精密稱取BUS和酚紅適量，用空白腸循環液溶解并定容，配制成BUS濃度為20.12 μg·mL-1，酚紅濃度為20.07 μg·mL-1的混合供試品溶液。

2.1.2色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈-1%甲酸(40：60)；檢測波長：238 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。

2.1.3系統適應性實驗 按照“2.1.2”項色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、空白腸循環液進樣測定。結果見圖1，BUS保留時間為6.33 min，樣品液主峰保留時間與對照品一致；空白腸循環液在BUS出峰處無干擾；供試品的分離度不少于1.5，理論板數不少于5 000。

2.1.4線性關系與方法學考察 精 密量取BUS對照品溶液適量，配制成4.04，8.08，12.12，16.16，20.20，30.30 μg·mL-1系列濃度標準溶液，于上述色譜條件下分別進行HPLC測定；以峰面積(A)對BUS濃度(C，μg·mL-1)進行線性回歸，得回歸方程：A=0.049 9C+0.007 3(R2=0.999 1)；BUS在4.04～30.30 μg·mL-1濃度范圍內峰面積與濃度的線性關系良好。精密度實驗中日內RSD=0.52%(n=5)，日間RSD=0.84%(n=3)；穩定性實驗中將BUS對照品溶液室溫放置24 h，其峰面積RSD=1.54%(n=5)，說明在實驗過程中，BUS穩定性良好；加樣回收率實驗中配置濃度為20.12 μg·mL-1的BUS標準溶液，分別加入相當于標準溶液含量80%，100%，120%的樣品，測定BUS的濃度，其平均回收率為99.73%，RSD=1.12%(n=3)；均符合要求[5-7]。

1.鹽酸丁螺環酮

2.2腸循環液中酚紅濃度的測定

2.2.1測定方法 采用可見-紫外分光光度法測定腸循環液中酚紅的濃度。在波長200～600 nm范圍進行紫外掃描，酚紅在558 nm處有最大吸收，其他成分在此處無吸收，對酚紅無干擾，故在波長558 nm處測定酚紅的吸光度(A值)。

2.2.2酚紅標準曲線的制備 精密稱取酚紅適量，配制濃度為5.03，10.06，20.12，30.18，35.21 μg·mL-1的酚紅系列標準溶液，分別取酚紅標準溶液0.5 mL置于10 mL具塞試管中，加入0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液 5 mL，搖勻，用孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液，以0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液為空白，在波長558 nm處測定，以A值對酚紅濃度(C，μg·mL-1)進行線性回歸，標準曲線回歸方程為：A=0.009 8C+0.038 1(R2=0.999 7)。結果表明，酚紅在濃度范圍5.03～35.21 μg·mL-1內有良好的線性關系[8]。精密度實驗中日內RSD=0.43%(n=5)，日間RSD=0.75%(n=3)；穩定性實驗中將酚紅溶液室溫放置24 h，其峰面積RSD=1.32%(n=5)，說明在實驗過程中，酚紅穩定性良好；加樣回收率實驗中配置濃度為20.07 μg·mL-1的酚紅標準溶液，分別加入相當于標準溶液含量80%，100%，120%的樣品，測定酚紅的濃度，其平均回收率為99.52%，RSD=1.26%(n=3)；均符合要求。

2.3大鼠在體腸道吸收實驗

2.3.1腸道吸收實驗方法 大鼠禁食、正常飲水18～20 h；麻醉，背位固定在手術臺上，沿腹中線剪開腹腔；選取所需腸段，兩端剪口，插管扎緊；用預熱至37 ℃的0.9%氯化鈉溶液沖洗腸道，再通入空氣排凈0.9%氯化鈉溶液[9]。先用BUS供試品溶液以5 mL·min-1的流速循環10 min，然后將流速調節為2.5 mL·min-1；分別于不同時間點從供試液中分別取2和0.5 mL作為BUS和酚紅的待測液，隨即補充同濃度酚紅供試品溶液2.5 mL；按上述方法測定各時間點BUS峰面積值(采用外標法)和酚紅吸光度值，按文獻方法計算吸收速率常數(Ka)和吸收百分率(ρ)[10-11]。

2.3.2不同腸段對藥物在體腸吸收的影響 將十二指腸、空腸、回腸及結腸作為考察腸段，取含BUS濃度為20.12 μg·mL-1、酚紅濃度為20.07 μg·mL-1的供試品溶液。按“2.3.1”項下方法操作，于0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4 h取樣，計算吸收參數，結果見表1。對數據進行方差分析及兩兩間多重比較，結果顯示不同腸段Ka差異有統計學意義(P<0.05)。各腸段吸收速率常數按十二指腸、空腸、回腸、結腸的順序依次下降。十二指腸為藥物最佳吸收部位，但藥物在整個腸段均有一定吸收。

表1 鹽酸丁螺環酮在大鼠各腸段吸收參數

2.3.3不同濃度對藥物在體腸吸收的影響 選取全腸段為考察腸段，取含BUS濃度分別為10.06，20.12，30.18 μg·mL-1、酚紅濃度為20.07 μg·mL-1的供試品溶液。按“2.3.1”項下方法操作，于0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4 h取樣，計算其吸收參數，結果見表2。對Ka進行配對t檢驗，結果表示在不同藥物濃度下，吸收速率常數Ka差異無統計學意義(P>0.05)，表明濃度在10.06～30.18 μg·mL-1，藥物的吸收量與濃度成正比，Ka無明顯變化，無飽和吸附現象，符合Ficks擴散原理，提示BUS的小腸吸收為被動擴散的機制。

表2 不同濃度鹽酸丁螺環酮小腸吸收實驗結果

2.3.4pH值對藥物在體腸吸收的影響 選取吸收速率常數最大的十二指腸，用pH值為5.4，6.8，7.4的K氏液分別配制含BUS濃度為20.12 μg·mL-1、酚紅濃度為20.07 μg·mL-1的供試品溶液。按“2.3.1”項下方法操作，于0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4 h取樣，計算其吸收參數，結果見表3。對Ka進行配對t檢驗，結果表示在不同環境pH值下，吸收速率常數Ka差異無統計學意義(P>0.05)。說明在pH值5.4～7.4范圍內，BUS的吸收不受介質pH值的影響。

表3 不同pH值下鹽酸丁螺環酮小腸吸收實驗結果

3 討論

在體腸循環法研究大鼠腸道吸收情況，通常認為大鼠腸道不僅吸收藥物，同時也可能吸收或排出水分，所以在循環時會導致供試品溶液體積的改變[12]。一般可在循環液中加入酚紅，由于酚紅為大分子絡合物，較難被腸道所吸收，因此可通過酚紅濃度的變化來對腸循環液體積進行校正，即得不同時刻的剩余藥量[13]。

從實驗結果可以看出，以循環液中BUS剩余藥量的對數lgD對時間t作線性回歸，所得相關系數r均大于0.9，線性關系較好，提示BUS在大鼠小腸的吸收符合表觀一級動力學過程，吸收以被動擴散為主；且BUS的吸收不受藥物濃度和pH值的影響；大鼠各腸段間藥物的吸收速率常數差異有統計學意義，按十二指腸、空腸、回腸、結腸依次減小，但藥物在整個腸段均有一定程度的吸收，提示鹽酸丁螺環酮可以制備緩釋、控釋制劑[14-15]。