半乳糖凝集素-9與IgA腎病相關性研究

蘇波峰 李鐸 尤小寒

IgA腎病（IgAN）是我國慢性腎小球腎炎最常見的病理類型，發病機制與CD4+T細胞功能紊亂有關［1-2］。半乳糖凝集素-9（Galectin-9）與其受體結合后可通過誘導CD4+T細胞亞群凋亡，發揮免疫負調控作用，與某些自身免疫性疾病和腎臟病的發生發展有關。作者通過檢測IgA腎病血清Galectin-9的水平，并與24h尿蛋白定量、腎功能（eGFR）等臨床指標進行相關性分析，以期闡明Galectin-9與IgA腎病的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年7月至2018年12月本院就診并經腎活檢確診為IgA腎病患者58例為觀察組（A組），男26例，女32例；平均年齡（35.1±10.3）歲。納入標準：（1）年齡18～60歲；（2）未經激素及免疫抑制劑治療。排除標準：（1）過敏性紫癜、肝硬化等引起的繼發性IgA腎病患者；（2）患有其他自身免疫性疾病、過敏性鼻炎、過敏性皮炎、哮喘、感染（細菌、真菌、病毒）、惡性腫瘤、糖尿病等可導致Galectin-9水平變化的患者；（3）患有嚴重系統性疾病如肝硬化、心力衰竭等患者。依據24h尿蛋白定量水平分為3個亞組：A1組（18例）≤1.0g，1.0g＜A2組（22例）≤2.0g，A3組（18例）＞2.0g。同期選取30例體檢健康者為對照組（B組），男14例，女16例；平均年齡（33.5±12.1）歲。兩組均簽署受試知情同意書。

1.2 方法 （1）樣本收集及常規檢查：抽取兩組人員外周血5ml，靜置30min后室溫離心分離血清，-20℃低溫保存，用于血清Galectin-9檢測。同時檢測患者血肌酐（按Cockcroft-Gault公式計算eGFR評估腎功能）、血尿酸、空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、C反應蛋白等指標。A組患者留取24h尿標本測定24h尿蛋白定量，并測定血IgA水平。IgA腎病患者絕大部分都有血尿，但尿檢紅細胞結果容易受飲水、留置時間等多種因素的影響，波動較大，故未納入本次研究范疇。（2）Galectin-9檢測：取上述分離的血清，采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定，其測定原理及操作步驟按所購試劑盒相關說明書進行。Galectin-9 ELISA試劑盒購自武漢USCN公司。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0統計學軟件。計量資料以（s）表示，兩樣本均數比較采用t檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析，計數資料比較采用χ2檢驗。兩變量間的關系采用Pearson相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較 見表1。

表1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較（s）

表1 兩組臨床資料及實驗室檢查指標比較（s）

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2.2 IgA腎病組患者不同程度蛋白尿外周血Galectin-9水平比較 見表2。

表2 IgA腎病不同蛋白尿水平亞組間實驗室檢查指標比較（s）

表2 IgA腎病不同蛋白尿水平亞組間實驗室檢查指標比較（s）

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2.3 IgA腎病組血清Galectin-9水平和臨床指標的相關性分析 Pearson相關分析顯示，A組患者血清Galectin-9水平和性別、年齡、血尿酸、血白蛋白、空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、C反應蛋白、血IgA水平等無相關，與24h尿蛋白量呈正相關（r=0.709，P＜0.01），和 eGFR 呈負相關（r=-0.711，P＜0.01），見圖1。

圖1 IgA腎病組患者血清Galectin-9與24h尿蛋白、eGFR相關性

3 討論

慢性腎小球腎炎是終末期腎臟病（ESRD）的主要病因，IgA腎病是最常見的病理類型，約有15%～20%及30%～40%的IgA腎病患者分別在明確診斷10年及20年內進展至ESRD［3］。目前認為，IgA腎病在某種程度上是一種自身免疫性疾病。IgA腎病患者體內IgA1糖基化異常導致其被正?？贵w識別并結合，形成免疫復合物沉積于腎小球系膜區，激活補體，引起炎癥因子及血管緊張素Ⅱ等釋放，最終導致系膜細胞增生和足細胞損傷。IgA腎病患者產生的多聚IgA1是由多克隆活B細胞生成，而B細胞分泌多聚IgA1則受到CD4+T細胞的調控。越來越多的研究表明，IgA腎病的發生發展與CD4+T細胞功能紊亂有關。CD4+T細胞亞群Th1/Th2失衡對于IgAN發生發展的作用已得到證實［4］。IgA腎病患者外周血中Th1/Th2比例失衡［5］，導致IL-2，IL-6，TNF-α，INF-γ等［6］大量炎癥細胞因子分泌。促炎因子產生增多參與IgA腎病的進展，與臨床病理及臨床表現密切相關［7］，最終導致腎臟纖維化［8］。

半乳糖凝集素-9（Galectin-9）是T淋巴細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的配體。Tim-3主要分布于CD4+T細胞亞群Th1細胞表面，Galectin-9與Tim-3結合后可誘導Th1細胞細胞凋亡，調節Th1/Th2失衡，從而在體液免疫和細胞免疫各個階段中發揮負調控功能。近年來Galectin-9/Tim-3與自身免疫性疾病的關系逐漸成為研究熱點。研究表明，系統性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血Galectin-9和其受體Tim-3表達均升高，且升高水平與疾病活動度SLEDAI評分呈正相關［9］，Galectin-9/Tim-3可能通過促進相關淋巴細胞亞群細胞凋亡發揮免疫負調控和抗炎作用［10-11］。類風濕性關節炎患者外周血和外周關節液Galectin-9/Tim-3通路水平也明顯升高，與疾病活動度呈負相關，其表達增加有助于控制疾病活動［12］。

Galectin-9/Tim-3與腎臟疾病的研究也逐漸增多。日本學者發現2型糖尿病伴慢性腎臟?。–KD）的患者血清Galectin-9水平明顯升高，與其腎小球濾過率（GFR）呈負相關［13］。Guo等證實狼瘡性腎炎患者腎臟組織中Tim-3陽性率顯著高于對照組，且Tim-3表達強度與疾病病理分級及活動度顯著相關［14］。而在自身免疫性疾病抗GBM腎小球腎炎的小鼠模型中［15］，注射Galectin-9激活Galectin-9/Tim-3通路可以減輕抗GBM腎炎小鼠腎臟新月體形成，阻止腎功能進一步惡化，其腎保護作用是通過調整免疫失衡，抑制Th1和Th17介導的免疫反應和促進Th2細胞功能實現的。

本資料結果表明，Galectin-9水平隨著蛋白尿的增多而增高，與24h尿蛋白定量呈正相關，與腎功能（e-GFR）呈負相關，即Galectin-9水平隨著疾病嚴重程度增加而增高，提示Galectin-9有可能參與IgA腎病的發生發展過程。鑒于Galectin-9/Tim-3的免疫負調控作用，本資料中觀察組血清Galectin-9水平的升高可能是機體對IgA腎病狀態下免疫性炎癥的代償性反應，機體通過升高Galectin-9，增強與Tim-3的結合，促進相關細胞凋亡，調節CD4+T細胞亞群失衡，從而發揮體液和細胞免疫的負調控作用，減輕腎損害。已有實驗證實Galectin-9可以改善抗GBM腎小球腎炎小鼠模型的腎損傷害［15］，因此下一步實驗可將Galectin-9應用于IgA腎病動物模型以觀察其對IgA腎病的影響，并對具體機制進行研究。