固相萃取-三重四級桿氣質聯用法測定油桃中硝苯菌酯

景贊，劉超，劉曉碧

（樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川樂山 614000）

硝苯菌酯主要用于防治柑橘類、核果類、仁果類、瓜類蔬菜和觀賞植物的紅蜘蛛和白粉病，有良好的防治效果，同時還具有殺螨卵的作用，是從敵螨普中分離出來具有最高生物活性的異構體之一。目前，對于硝苯菌酯的研究主要集中在病蟲害防治方面[1-5]。GB2763-2016 規定了敵螨普的臨時限量，但缺少相應的檢測方法，因此對于硝苯菌酯的風險評估很難開展[6]。隨著近年來人們對食品安全的重視，農藥殘留問題不容忽視，相應的對檢驗檢測手段也提出了更高的要求。當前質譜類儀器普及程度逐年加大，加之質譜類儀器有著定性、定量準確的優點，檢驗檢測標準中應用到此類儀器的比例也在逐步提高[7-8]。有少量采用液質聯用檢測硝苯菌酯的報道，但缺少相應的國家標準，而且檢測范圍也未涉及到油桃。本研究結合工作實際，應用氣質聯用和固相萃取技術，建立了一種快速檢測硝苯菌酯的方法，為硝苯菌酯標準檢測方法的建立提供一定的數據支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

油桃，購于超市。

硝苯菌酯標準品，100 μg/mL，購于壇墨質檢科技有限公司；乙腈、丙酮等均為色譜純，購于百靈威科技有限公司。

1.2 儀器與設備

氣質聯用儀，TQ-8030，島津中國有限公司；高速均質器，T25，IKA 儀器設備有限公司；高速冷凍離心機，TGL16M，長沙湘智離心機儀器有限公司。CleanertS C18（2 g/12 mL），Cleanert PestiCarb/NH2（0.5 g/6 mL），均購于博納艾杰爾科技有限公司。

1.3 硝苯菌酯標準溶液配制

取硝苯菌酯標準品1 支，準確移取1 mL，用丙酮稀釋定容至10 mL，混勻，配制成濃度為10 μg/mL 的標準儲備溶液，冷藏備用。按照樣品制備方法，提取空白基質溶液，用于不同濃度標準系列工作溶液的配制。

1.4 樣品提取液的制備

除去樣品不可食用部分，用制樣機打碎，準確稱取20 g（精確至0.01 g），加入乙腈50 mL，高速均質2 min，加入7 g 氯化鈉，再繼續均質提取1 min，5 000 r/min 冷凍離心5 min，移取乙腈層提取液20 mL，待凈化。

用10 mL 乙腈活化CleanertS C18 柱，移入上述20 mL 提取液，并用15 mL 乙腈洗脫，將收集的溶液在40 ℃水浴中旋轉濃縮至1 mL 左右，在Cleanert PC/NH2柱中加入2 cm 高無水硫酸鈉，加樣前先用4 mL 乙腈+甲苯（3+1）預洗柱子，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液轉移至凈化柱上，再用少量乙腈洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中，用25 mL 乙腈+甲苯（3+1）洗脫，收集所有流出液于雞心瓶中，旋轉濃縮近干，再加入5 mL丙酮于40 ℃水浴中旋轉蒸發，進行溶劑交換2 次，最后使樣液體積約為1 mL，過0.22 μm 濾膜上機分析[7]。

1.5 檢測條件

進樣口：250 ℃，不分流（高壓進樣）；毛細管柱：Rtx-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；柱溫采用梯度升溫：起始溫度40 ℃（1 min），以25 ℃/min 升至130 ℃，再以10℃/min 升至260 ℃（15 min）；線速度：70 cm/sec；進樣體積：1 μL；載氣：高純氦氣。

溶劑延遲：5 min；離子源為電子電離源，溫度220℃；MS 接口溫度：260 ℃。

2 結果與分析

2.1 前處理及質譜條件的優化

乙腈對絕大多數農藥殘留都有比較好的提取效果[9]，所以本方法選擇乙腈作為提取溶劑，加入氯化鈉飽和水相，使水相與乙腈分層，同時在后期凈化處理時，加入無水硫酸鈉去除多余水分。油桃中存在比較多的糖分、色素、維生素等物質，如果不凈化很容易干擾測定結果，選擇CleanertS C18 柱和Cleanert PC/NH2柱可以去除絕大多數的干擾物質。

農藥殘留測定中基質效應是不可避免的，本研究將丙酮和空白基質溶液配制的標準溶液分別予以考量，在相同儀器條件下測定，結果表明空白基質溶液配制的標準點的峰面積要比丙酮配制的高20%左右。為減少基質效應，標準溶液采用空白基質溶液配制。硝苯菌酯在70 eV 電子轟擊下產生的碎片離子如圖1 所示（見下頁），選擇質荷比大、響應高的碎片離子進行二級碎裂，得到定性定量離子對，見表1（下頁），以此建立氣質聯用方法。相比GB23200.8-2016，該方法擴大了使用范圍，同時串極質譜方法較單極質譜，有更低的檢出限和更好的抗干擾能力[10]。

圖1 硝苯菌酯碎片離子質譜圖Fig.1 The fragment ions of meptyldinocap

表1 保留時間和質譜參數Table 1 Retention time and MRM parameters

2.2 線性范圍與檢出限

將硝苯菌酯標準溶液用油桃空白基質提取液稀釋成0、0.2、0.5、1、2、4 μg/mL 的標準系列工作溶液，以濃度與對應的定量離子色譜峰的峰面積繪制標準曲線。以3 倍的S/N 計算該方法的檢出限，以10 倍的S/N 計算該方法的定量限，計算結果以全果計（下同），結果見表2。

表2 線性范圍、檢出限和定量限Table 2 Linear range,detection limit and quantitative limit

2.3 加標回收率

為驗證方法準確性，向油桃空白樣品中添加硝苯菌酯農藥標準溶液，添加濃度為0.05、0.1、0.2 mg/kg 三個水平，依照樣品提取方法制備提取液，平行測定3 次，結果見表3。空白樣品色譜圖見圖2，加標樣品色譜圖見圖3。

表3 加標回收率和相對標準偏差（n=3）Table 3 Recoveries and relative standard deviation (n=3)

分析表3 中數據可知，硝苯菌酯回收率在77.9%～85.3%，RSD 均低于5%，滿足國家標準的有關要求。由圖2、3 可以看出，硝苯菌酯保留時間附近無干擾物質，峰型對稱，說明前處理凈化效果較好，質譜串聯技術的運用使得方法抗干擾能力更強，定性和定量更為準確。

圖2 空白樣品總離子流色譜圖Fig.2 Total ion current chromatogram of blank sample

圖3 加標樣品總離子流色譜圖Fig.3 Total ion current chromatogram of spiked sample

2.4 精密度

采用濃度為0.3 μg/mL 的基質標準溶液，平行測定6次，測定方法的精密度。該結果顯示精密度RSD 為3.3%，精密度良好。

3 討論

我國是農藥生產和消費大國，農藥濫用和殘留超標現象比較普遍，帶來的安全性問題不容忽視，因此對檢驗檢測技術的要求也越來越高[11-12]。本研究采用乙腈提取，固相萃取柱凈化，利用氣相-串聯質譜聯用技術進行測定，考察了基質效應對測定結果的影響，建立了油桃中硝苯菌酯農藥殘留的快速檢測方法。結果顯示該方法具有較高靈敏度、準確度和精密度，線性關系良好，適合于油桃中硝苯菌酯的日?？焖贆z測。