氣相色譜法測定飼料中9種香味劑含量的研究

郭國賢

（遼寧省檢驗檢測認證中心遼寧省農產品及獸藥飼料產品檢驗檢測院，沈陽 110000）

香味劑作為飼料添加劑的一種，廣泛應用于飼料生產中，可改善飼料適口性，增進飼養動物進食欲，抵抗因換料、高溫、疾病等引起的應激反應，所以近些年來食品用香料作為飼料中添加劑被廣泛應用于飼料生產中。但隨著香味劑的應用，香味劑也存在著一定的危害：高濃度的香味劑本身具有很強的毒性；飼料中的一些成分可與高濃度香味劑發生反應，影響飼料安全；香味劑可掩蓋飼料腐敗變質和污染霉變。根據農業部2045 號公告《飼料添加劑品種目錄（2013）》及《食品安全國家標準食品添加劑使用衛生標準》（GB 2760）中食品中香料名單的規定，食品用香料可以作為飼料添加劑使用，導致飼料中香味劑在一定程度上的濫用。而國家標準以及各行業標準中針對飼料中香味劑的檢測標準及方法還較少，飼料中香味劑乳酸乙酯、乙基麥芽酚及乙基香蘭素等還沒有國際檢測方法[1]。目前國內外有關乙酸異戊酯、乙基麥芽酚、肉桂醛、大茴香腦、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、香蘭素、乙基香蘭素、桃醛的添加檢測方法研究主要針對食品檢測領域，僅有少量地方標準有針對上述香味劑作為飼料添加劑的檢測方法。本文建立了使用氣相色譜法同時測定飼料中乙酸異戊酯、乙基麥芽酚、肉桂醛、大茴香腦、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、香蘭素、乙基香蘭素、桃醛等九種香味劑的檢測方法，該方法具有操作簡便、靈敏度高、設備要求簡單、溶劑使用少等優點。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器

美國安捷倫公司6890 型氣相色譜儀；DB-5 毛細管柱，長60 m，內徑0.25 mm，膜厚0.25 μm，或性能類似的色譜柱；Staurt SA 8渦旋混合器；AS系列超聲清洗機。

1.2 藥品與試劑

對照品：香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦純度均≥98.5%；無水乙醇（分析純）；0.45 μm的微孔濾膜。

1.3 提取方法

稱取試樣約1 g（精確至0.1 mg），置于10 mL棕色容量瓶中，加無水乙醇5 mL，超聲20 min，降至室溫后，用無水乙醇定容至刻度。混勻后靜置。取上清溶液，溶液過0.45 μm微孔濾膜，供上機測定。

1.4 氣相色譜儀條件

色譜柱：DB-5 毛細管柱，長60 m，內徑0.25 mm，膜厚0.25 μm，或性能類似的色譜柱；載氣：高純氮氣，2.0 mL·min-1；分流比：10：1；進樣口溫度：270 ℃；檢測器：氫火焰檢測器；檢測器溫度：290 ℃；柱溫箱溫度：起始溫度90 ℃，保持2 min，以15 ℃·min-1升至200 ℃，保持8 min；進樣量：1.00 mL。

2 結果與討論

2.1 提取方法考察

9 種香味劑均為小分子化合物，一些含有苯環、共軛鍵，但有一些不含共軛鍵結構，同時參照9 種香味劑的溶解性數據，9 種香味劑均易溶于乙醇或者氯仿中，在水中幾乎不溶，參考實際提取的回收率以及實驗室常用試劑的毒性大小，選擇使用無水乙醇作為提取液。分別考查渦旋振蕩、搖床振蕩、恒溫水浴振蕩、超聲分別提取5、10、20、30 min。根據6 次結果的平均回收率比較，超聲提取20 與30 min 回收率最好。且超聲20 min 用時較短。9種香味劑提取回收率對比見表1。

表1 9種香味劑提取回收率對比%

2.2 方法線性

用濃度分別為5.00、10.00、20.0、50.0、100.0、200 和500 mg·mL-1的混合標準工作溶液，每個濃度連續進樣3次，按平均值，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算標準曲線線性。試驗結果表明，各種香味劑的濃度范圍在5.00～500 mg·mL-1時，標準曲線的r≥0.999，有良好的線性關系，結果見表2。

表2 9種香味劑校正曲線

2.3 方法靈敏度

采用標準添加法，在空白樣品中添加9 種香味劑，按“2.1”項下方法處理和檢測，依據色譜峰信噪比S/N＞3 為方法檢測限，S/N＞10 為方法定量限，得出9 種香味劑的檢測限為20 mg·kg-1，定量限為50 mg·kg-1。空白飼料樣品中添加100 mg·kg-19 種香味劑的色譜圖見圖1。

2.4 準確度、重現性和方法適用性

選擇空白飼料為測試對象，進行加標回收率試驗。在1 g 空白飼料中分別加入適宜體積的香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦混合標準工作溶液，使其添加濃度為20、50、100、200、500 和1 000 mg·kg-1，進行加標回收試驗，同一濃度做6 次平行實驗。9 種香味劑加標回收實驗結果均值見表3。試驗結果表明，在添加上述6個不同濃度，其回收率為70.1%～117.5%，重復性RSD最大的為11.4%。說明該方法有較高的準確性和重現性。

圖1 9種香味劑混合標準品色譜圖

表3 9種香味劑加標回收實驗 %

為考查本方法適用性，從市場上收集5 生產廠家的5 種代表性飼料樣品，添加20 和50 mg·kg-1，平行測定6 次，回收率均在70.6%～99.6%，結果見表4。由表4 可知，不同的生產廠家、不同成分的飼料均可用該方法檢測其香味劑含量。以上試驗表明該方法適用的范圍為飼料。

表4 不同添加濃度5種代表性飼料樣品的回收率 %

3 結論

本試驗結果表明，標準建立的飼料中香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦測定氣相譜法，樣品的提取步驟科學合理，易于掌握，測試數據重復性好，添加回收率范圍等均可滿足分析試驗要求，可很好的滿足飼料中香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦的測定要求。