無創(chuàng)產(chǎn)前檢測胎兒染色體拷貝數(shù)變異的臨床價值初探

韓華 魏新亭 吳菊花

【摘 要】目的：探討無創(chuàng)產(chǎn)前檢測（NIPT）胎兒染色體拷貝數(shù)變異的臨床應用價值。方法：對2016年3月-2018年10月期間孕中期接受NIPT的5103例孕婦資料進行分析，對檢測提示胎兒CNVS的孕婦實施介入性產(chǎn)前診斷臍血/羊水染色體G顯帶核型分析，進行高通量測序（NGS）基因組拷貝數(shù)分析，并對介入性產(chǎn)前診斷結果與NIPT檢查發(fā)現(xiàn)的CNVs一致性進行分析。結果：5103例接受NIPT檢查的孕婦中有17例提示CNVs，陽性率為0.33%，有13例產(chǎn)婦接受介入性產(chǎn)前診斷，確診為CNVs胎兒7例，陽性預測值為53.85%。結論：NIPT檢查能篩查出部分有臨床意義CNVs胎兒，可作為常規(guī)檢查手段，為提高產(chǎn)前篩查準確性，對NIPT檢查提示為CNVs高風險者，應進行介入性產(chǎn)前診斷。

【關鍵詞】無創(chuàng)產(chǎn)前檢測;臨床價值;染色體拷貝數(shù)變異;產(chǎn)前篩查

【中圖分類號】R715.5【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）23--01

隨著高通量測序技術的發(fā)展，該技術的精度得到提升，該項技術在對常見非整倍體篩查時發(fā)現(xiàn)胎兒基因組拷貝數(shù)變異（CNVs），而致病性的CNVs會導致胎兒微重復綜合征/微缺失綜合征（MDs），MDs種類多且十分復雜，且目前該疾病的發(fā)病機制尚不明確，患者臨床主要表現(xiàn)有器官畸形、智力發(fā)育遲緩、生長發(fā)育異常、代謝性疾病、腫瘤、精神行為改變等。為了探討NIPT在產(chǎn)前篩查中的應用價值，本文對在我院應用該項技術檢測的孕婦臨床資料進行分析，并比較NIPT檢測異常結果與接受介入性產(chǎn)前診斷結果[1]，詳細情況如下文所述：

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選取2016年3月-2018年10月在我院接受NIPT檢查的孕中期孕婦5103例為研究對象，納入孕婦年齡在18-49歲之間，平均（28.06±3.97）歲，孕周在15-20周之間，平均孕周為（18.35±1.01）周。

1.2 方法

抽取孕婦外周血5ml進行NIPT檢查，對檢查結果疑似胎兒CNVs的孕婦開展科學、認真的遺傳咨詢，并建議孕婦接受臍血穿刺術或羊膜腔穿刺術取樣進行產(chǎn)前診斷。介入術前均有經(jīng)驗豐富的超聲醫(yī)師進行超聲檢查，抽取2ml臍血或20ml羊水，送至遺傳診斷中心對胎兒染色體核型進行分析及低深度全基因組測序（CNV-seq）。抽取確診為CNVs胎兒的父母4ml外周血，進行外周血染色體核型分析以及CNV-seq。

1.3 統(tǒng)計學分析

對孕婦基本信息及篩查結果應用Excel表格進行記錄，并分析NIPT檢查診斷陽性率、準確率。

2 結果

2.1 NIPT篩查結果

5103例接受NIPT產(chǎn)前篩查的孕婦，篩查結果有17例孕婦疑似CNVs，篩查陽性率為，陽性率為0.33%，有13例產(chǎn)婦接受介入性產(chǎn)前診斷，所占比例為76.47%。

2.2 產(chǎn)前篩查結果

接受介入性產(chǎn)前診斷的13例產(chǎn)婦中，確診為CNVs胎兒7例，陽性預測值為53.85%，其中有5例致病變異為微缺失/微重復綜合征MDs，這5例患者中有4例合并染色體結構異常，處于常染色質(zhì)區(qū)域，檢出區(qū)域覆蓋功能基因。5例患者中有4例微缺失，微重復1例。對父母外周血染色體、基因結果證實，有4例為新發(fā)變異，1例證實為父系來源。

3 討論

我國是出生缺陷率較高的國家之一，出生缺陷會給患兒家庭以及社會帶來沉重的負擔，為了有效降低缺陷兒出生率，做好產(chǎn)前篩查非常必要、產(chǎn)前篩查是對胎兒是否患有某種遺傳性疾病或先天畸形進行預測的方法，借助生物化學、現(xiàn)代生物學、細胞遺傳學、免疫遺傳學、分子遺傳學等技術，經(jīng)母體或對胚胎/胎兒直接進行檢測，來判斷胎兒是否存在先天畸形或存在遺傳缺陷。染色體異常是指染色體結構或數(shù)目發(fā)生異常，各種“致病因素”作用與卵子、精子以及早期卵裂球，導致數(shù)百億種類型的基因發(fā)生突變或導致染色體畸形[2]，臨床常見的染色體疾病有18-三體綜合征、21-三體綜合征、性染色體數(shù)目異常、13-三體綜合征以及各種類型染色體結構異常，其中前4種類型在染色體疾病中所占比例高達95%[3]。大量研究表明，染色體異常是導致新生兒缺陷的主要原因之一，現(xiàn)階段染色體疾病無有效的治療方法，故有效的產(chǎn)前篩查是降低缺陷兒出生率的重要手段。

新生兒缺陷無論對家庭還是社會來說，都是一個沉重的負擔，近幾年受各種因素影響，我國缺陷兒出生率在逐漸升高，為了降低缺陷兒出生率，做好產(chǎn)前篩查非常必要。隨著人們優(yōu)生優(yōu)育意識的提高，遺傳因素在生殖發(fā)育異常診療中受到人們更多關注，以往進行產(chǎn)前篩查，主要通過分析孕婦年齡、孕史、家族史、超聲篩查、血清學篩查，以篩查出胎兒染色體異常的孕婦，然后對高危孕婦進行介入性產(chǎn)前診斷，包含臍帶血穿刺、羊水穿刺以及絨毛穿刺，通過細胞培養(yǎng)染色體核型分析，診斷胎兒染色體是否存在異常。該產(chǎn)前篩查技術存在著許多不足，漏診率較高，直接影響了產(chǎn)前診斷質(zhì)量，為了最大限度的降低缺陷兒出生率，提高產(chǎn)前篩查精準度勢在必行。

CNVs是指長度在1kb以上的染色體片段拷貝數(shù)量減少或增加，主要表現(xiàn)為亞顯微水平重復、缺失或倒置等變異，有學者認為，該現(xiàn)象與改變基因結構、CNVs本身的劑量效應、影響基因表達水平、CNVs遠距離調(diào)控等對表型產(chǎn)生調(diào)控作用有關，本次研究，確診的7例CNVs中有5例為MDs，其MDs片段均處于常染色質(zhì)區(qū)域，檢出區(qū)域均覆蓋了功能基因，該結果說明，此次研究MDs的產(chǎn)生與CNVs數(shù)目本身劑量效應關系不強。以往使用的染色體核型分析，分辨率低，只能對8Mb-10Mb及以上的染色體片段重復或缺失進行觀察，精準度低，漏診率較高。隨著醫(yī)學技術的發(fā)展與成熟，產(chǎn)前篩查精準度大幅度提升[4]。NIPT檢測中CNVs假陽性產(chǎn)生的原因與母體DNA干擾存在較大關聯(lián)，這是因為胎兒游離DNA（cff-DNA）檢測的DNA片段來自胎盤絨毛外層凋亡的滋養(yǎng)層細胞，因此，若存在限制性胎盤嵌合體，NIPT檢測便會顯示異常。因此，雖然介入性產(chǎn)前診斷雖然存在一定安全隱患，可能會增加流產(chǎn)風險，但是該項檢查仍然是現(xiàn)階段確診CNVs的唯一的有效方法[5]。近幾年，隨著測序技術的不斷改進，生物信息分析軟件的成熟以及更多大樣本的研究，相信在不久的將來能出現(xiàn)更準確、合理的CNVs篩查技術。

對已經(jīng)確診的CNVs父母進行遺傳咨詢，遺傳咨詢通過告知孕婦、家屬攜帶CNVs的胎兒可能會發(fā)生的臨床表現(xiàn)及預后，在讓孕婦及家屬知情后進行選擇。

進行CNVs產(chǎn)前診斷結果進行遺傳咨詢與建議

（1）可能致病的CNVs是經(jīng)文獻報道但未能得到證實或共識的，若來源與雙親中的一方，則患病風險較低[6];

（2）致病性CNVs是經(jīng)多人、多項研究報道并證實，會導致MDs的CNVs，有明確的致病性且會嚴重影響發(fā)育，應在對父母進行遺傳咨詢時明確告知不良的預后風險，讓父母共同選擇[7];

（3）臨床意義不明的致病，父母表型正常，生物信息學分析難以給出明確的致病證據(jù)，單胎兒出現(xiàn)臨床意義不明的CNVs時，建議父母雙方進行外周血染色體檢查、CNVs檢查，若雙親或雙親中的一方表型正常，則患病風險較低。若疑似新發(fā)生變異，則需結果父母二人生育史、既往史、胎兒超聲檢查結果進行綜合分析;

（4）正常多態(tài)性在健康人群中存在，尤其是表型正常的父母攜帶，不需進行特殊處理[8]。

綜上所述，本次研究，5103例接受NIPT檢查的孕婦中有17例提示CNVs，陽性率為0.33%，有13例產(chǎn)婦接受介入性產(chǎn)前診斷，確診為CNVs胎兒7例，陽性預測值為53.85%。 以上研究結果充分說明，NIPT檢查能篩查出部分有臨床意義CNVs胎兒，可作為常規(guī)檢查手段，但仍然有較高的假陽性率，為提高產(chǎn)前篩查準確性，對NIPT檢查提示為CNVs高風險者，應進行介入性產(chǎn)前診斷【9-10】。

參考文獻

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