促分裂原活化的蛋白激酶與表皮生長因子受體在三陰性乳腺癌患者中的表達及臨床意義△

蔣威華，熊廷川，王曉文，張晨光，伊麗娜，歐江華

新疆醫科大學第三臨床醫學院/新疆醫科大學附屬腫瘤醫院乳腺外科，烏魯木齊830011

三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）的研究一直是乳腺癌研究的熱點問題，其在診斷、治療和預后等方面困擾著不少學者。雖然分子生物學研究的不斷發展為腫瘤治療提供了新的途徑，但TNBC目前在基因水平的治療仍缺乏有力的證據，因此亟待尋找TNBC的新靶點以指導TNBC的診斷和治療。促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）對 TNBC的發生發展起重要作用，它是一組絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，能被不同細胞外因素刺激激活，目前所發現的3條MAPK信號通路中，胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）通路和c-Jun氨基末端激酶/應激活化的蛋白激酶（c-Jun N-terminal kinase/stress-activated protein kinase，JNK/SAPK）通路均在TNBC的發生機制中起重要作用[1-2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）參與了很多復雜的細胞信號轉導途徑，作為原癌基因c-ErbB1的表達產物，其在間充質、上皮及神經源性組織中都有一定程度表達，對細胞的增殖分化有重要作用[3]，與TNBC細胞的生長密切相關[4]。本研究旨在研究MAPK及EGFR在TNBC中的表達及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年1月至2013年12月于新疆醫科大學附屬腫瘤醫院住院手術經病理證實為TNBC患者的病歷資料。納入標準：①首次治療并進行手術治療的患者；②雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）表達均為陰性的浸潤性乳腺癌；③有完整病理資料及隨訪資料。排除標準：ER、PR、HER2表達均為陰性的原位癌。根據納入、排除標準，共納入TNBC患者200例，年齡25～72歲，中位年齡48.5歲。選取TNBC患者的200例TNBC組織及80例癌旁組織（距腫瘤＞2 cm）進行研究。

1.2 檢測方法及結果判讀

采用免疫組織化學SP法測定組織中MAPK、EGFR的表達，實驗操作嚴格按照質量控制內容進行，采取雙盲法觀察切片。

1.2.1 MAPK結果判讀MAPK定位于細胞質及部分細胞核，陽性細胞為細胞核、細胞質或細胞膜呈棕黃色而背景清晰。隨機取5個高倍視野，同時每個視野計數100個細胞，根據染色強度及陽性細胞所占百分比進行評分。陽性細胞所占百分比：＜25%為1分，25%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項得分相乘為綜合評分，結果≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.2.2 EGFR結果判讀 EGFR定位于細胞膜。＞10%區域呈棕色或棕褐色染色，但細胞膜染色不連續者為1分；＞10%區域呈棕色或棕褐色染色且細胞膜染色連續，但形態不完整者為2分；＞10%區域呈棕色或棕褐色染色，細胞膜染色連續，且形態完整為3分。此外，細胞輕度棕褐色為1分，中度棕褐色為2分，重度棕褐色為3分。將兩項分值相加，總分≤2分為陰性，＞3分為陽性。

1.3 觀察指標

比較MAPK、EGFR在TNBC組織及癌旁組織中的表達差異及與TNBC患者淋巴結轉移、臨床分期、預后的關系。局部復發是指同側乳腺、胸壁或區域淋巴結復發；遠處轉移為通過臨床特征、影像學檢查以及組織活檢以獲得確認，經病理學診斷為乳腺癌的轉移。

1.4 隨訪

隨訪截至2018年6月。無瘤生存時間定義為患者手術開始至復發轉移的時間，總生存時間定義為自患者確診之日至患者死亡的時間。

1.5 統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件進行數據處理。計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman秩相關分析；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank法比較生存情況。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNBC組織及癌旁組織中MAPK與EGFR表達情況的比較

TNBC組織中MAPK及EGFR的陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 TNBC組織及癌旁組織中MAPK與EGFR表達情況的比較[n（%）]

2.2 TNBC組織中MAPK與EGFR表達的相關性

TNBC組織中MAPK與EGFR的表達呈正相關（r=0.494，P＜0.01）。

2.3 不同臨床特征TNBC患者的TNBC組織中MAPK及EGFR表達情況的比較

不同臨床分期及有無淋巴結轉移的TNBC患者的TNBC組織中MAPK蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=6.982、4.547，P＜0.05）；不同臨床分期及有無淋巴結轉移的TNBC患者的TNBC組織中EGFR蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=16.515、9.362，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征TNBC患者的TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況

2.4 TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況與復發轉移的關系

至隨訪截止日期，200例TNBC患者中共55例（27.5%）患者出現復發轉移。55例復發轉移TNBC患者的TNBC組織中MAPK、EGFR陽性表達率分別為54.5%（30/55）和65.5%（36/55），均明顯高于無復發轉移患者的33.8%（49/145）和37.9%（55/145），差異均有統計學意義（χ2=7.186、12.181，P＜0.01）。

2.5 TNBC組織中MAPK及EGFR的表達情況與生存的關系

MAPK陽性表達患者5年無瘤生存率為62.0%，明顯低于MAPK陰性表達患者的79.3%，差異有統計學意義（χ2=7.354，P＜0.01）。EGFR陽性表達患者5年無瘤生存率為60.4%，明顯低于EGFR陰性表達患者的82.6%，差異有統計學意義（χ2=12.404，P＜0.01）。（圖1、圖2）

圖1 MAPK陽性表達（n=79）及陰性表達（n=121）TNBC患者的無瘤生存曲線

圖2 EGFR陽性表達（n=91）及陰性表達（n=109）TNBC患者的無瘤生存曲線

3 討論

目前，基于分子水平的研究可使人類腫瘤被重新分類為多種亞型，不同亞型在疾病進展和對治療的反應方面不同。TNBC是乳腺癌的一種特殊亞型，其對許多治療方法均具有抗性，由于缺乏有效的治療選擇，研究人員一直在探索與TNBC細胞增殖有關的分子途徑，闡明其分子機制，從而幫助改善預后。

MAPK信號轉導通路是TNBC關鍵的信號轉導途徑之一[5-6]。乳腺癌患者較短的生存時間與升高的MAPK活性相關，而EGFR過度表達或持續激活可活化MAPK[7]。在TNBC的進展過程中，EGFR通過與配體結合的方式形成同源或異源二聚體，然后激活磷脂酰肌醇3-羥激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase/protein kinase B，PI3K/PKB，又稱PI3K/AKT）、MAPK/ERK等多條信號轉導通路，起到促進腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移等作用[8]。本研究中MAPK及EGFR在TNBC組織中的陽性表達率分別為39.5%與45.5%，與國內研究報道相似[9]，通過相關性分析，結果顯示MAPK與EGFR的表達呈正相關（r=0.494，P＜0.01），提示二者在TNBC的發生發展過程中可能存在協同作用。

研究顯示，MAPK及EGFR高表達的患者易出現早期復發轉移，預后也較差[10-12]。但也有不同結論者，國內外有研究顯示MAPK陽性表達與患者淋巴結轉移情況無關[2,9]，而本研究結果顯示MAPK及EGFR陽性表達不僅與TNBC患者的淋巴結轉移有關，也與患者的臨床分期有關，TNBC患者淋巴結轉移和臨床分期是判斷預后的重要依據，并可為臨床治療方案的選擇提供一定參考。MAPK及EGFR可作為TNBC分子靶向治療新的嘗試方向，應考慮針對TNBC患者的不同MAPK及EGFR表達狀態，而采取不同的個體化治療，進一步改善患者的預后。

隨訪結果顯示，MAPK及EGFR的表達均與患者復發轉移有關，復發轉移患者MAPK及EGFR的陽性表達率均明顯高于無復發轉移患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。在無瘤生存率方面，MAPK及EGFR陽性表達患者預后較陰性表達患者差，無瘤生存率更低。這與國外報道一致[13-14]，說明了MAPK及EGFR在TNBC的發生發展過程中起到了一定作用，有可能成為TNBC患者生存情況的預測指標和治療新靶點。可通過調控MAPK通路抑制TNBC細胞的生長，而達到治療目的[15-16]。

本研究為回顧性研究，且樣本量較小，建議擴大樣本量深入分析，以期獲得兩分子指標的臨床指導價值?？傊?，MAPK及EGFR蛋白的過表達及活化，在TNBC的發生發展過程中發揮了一定作用，可考慮作為TNBC基因治療的新靶點。