茯苓加工炮制、成分分析及體內代謝研究進展

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(1.九芝堂股份有限公司國家企業技術中心,湖南 長沙410021；2.湖南省中藥固體制劑工程技術研究中心,湖南 長沙410021；3.中藥驗方湖南省工程研究中心,湖南 長沙410021；4.中南大學 湘雅藥學院,湖南 長沙410013；5.成都九芝堂金鼎藥業有限公司,四川 成都610051)

炮制工藝是影響中藥飲片質量的關鍵環節,建立規范合理的炮制工藝,是保證中藥飲片質量的基礎。研究中藥炮制規范的關鍵控制工藝必須關注飲片炮制過程對化學成分的影響以及活性成分在體內的代謝過程。本文通過檢索國內外相關文獻,簡要總結茯苓的加工炮制工藝、化學成分分析及體內代謝的研究進展,為茯苓炮制工藝的現代化研究、產業鏈的開發提供參考。茯苓為多孔菌科臥孔屬真菌茯苓的菌核,具有滲濕利水、益脾和胃、寧心安神的功效,有“十藥九茯苓”之說[1]。

1 茯苓加工炮制工藝

1.1 茯苓炮制工藝的現代研究

根據2015版《中國藥典》記載及多地產地實際加工經驗,目前茯苓主要的四種加工模式：①鮮茯苓－去皮－切制－干燥；②鮮茯苓－發汗－去皮－切制－干燥；③鮮茯苓－蒸制－去皮－干燥；④鮮茯苓－發汗－蒸制－去皮－干燥[2]。許多學者針對茯苓飲片炮制工藝的關鍵環節進行系統研究,以期確定最佳炮制方式和工藝參數。許臘英等[3]采用正交設計的方法,以茯苓主要有效成分茯苓多糖含量為主要考察指標,對茯苓的炮制工藝進行比較系統的研究,獲得茯苓的最佳炮制工藝的量化指標為發汗2次,加12倍量水,洗2次,每次洗3 min,蒸20 min,趁熱去皮后用刀切成約為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的茯苓丁,于60℃烘8 h。王海燕等[4]以茯苓酸和茯苓多糖含量的綜合作用為指標,對發汗次數、飲片規格和烘干溫度進行正交試驗研究,確定茯苓飲片最佳炮制工藝為：趁鮮,去皮,切制成厚片或丁,70℃烘干。賀?；ǖ萚5]以多糖和總糖為指標,篩選出茯苓的最佳炮制工藝為：發汗的茯苓個,加水浸泡24 h,取出用濕布潤透后于蒸鍋內蒸40min,趁熱切制后于60℃烘箱內干燥。

1.2 不同炮制方法對茯苓化學成分的影響

雷高明等[6]從浸出物、多糖和總糖含量、HPLC色譜等方面來考察趁鮮加工和發汗后加工對茯苓飲片化學成分的影響,研究表明趁鮮處理的飲片水溶性浸出物含量大于發汗后處理的飲片,不同炮制加工方法對堿溶性成分的含量影響較?。怀悯r處理的茯苓片總糖和多糖含量均高于發汗后處理的茯苓片,茯苓丁相反；炮制加工方法的不同對茯苓飲片中化學成分的含量有一定的影響。徐雷等[7]以茯苓為試材,采用分光光度法測定茯苓多糖和三萜類化合物含量,研究傳統發汗切制和趁鮮切制2種初加工方法,研究結果表明茯苓采用不同初加工方法對多糖含量有極顯著影響,發汗切制法高于趁鮮切制法,對三萜類成分無顯著影響。李習平等[8]采用高效液相色譜法測定各種不同茯苓加工品中茯苓酸的含量,發現茯苓皮中茯苓酸的含量大于茯苓,且經蒸制后兩者的含量均明顯降低,其中生切品＞傳統法蒸品＞高壓蒸品。張平等[9]以傳統“發汗”、水蒸氣蒸制、鮮茯苓直接切制處理的茯苓為研究對象,對不同預處理方式下的茯苓品質、干燥動力學展開系統研究。結果表明：①傳統“發汗”處理茯苓的水溶性多糖質量分數是鮮茯苓直接切制的1.5倍、水蒸氣蒸制的1.7倍,水蒸氣蒸制處理的水溶性多糖質量分數顯著低于鮮茯苓直接切制；②傳統“發汗”處理茯苓的三萜質量分數顯著低于鮮茯苓直接切制及水蒸氣蒸制,水蒸氣蒸制與鮮茯苓直接切制間無顯著差異；通過適當控制“發汗”時間、“發汗”溫度,可保持茯苓三萜含量不發生顯著降低；③傳統“發汗”處理茯苓的成品顯著變白,色澤改善；水蒸氣蒸制處理茯苓的成品顯著變黃、變紅,色澤變差。張衛鵬[10]在統一茯苓丁外形、含水率等初始狀態參數下,對自然晾曬、微波干燥、熱風干燥、氣體射流干燥、控溫控濕干燥、紅外熱風干燥、真空脈動等7種干燥技術21個干燥條件進行評價,綜合對比干燥效率、破碎率、醇溶性浸出物含量、能耗系數指標。結果表明,紅外干燥醇溶性浸出物含量較高,約為3.69～4.07 mg/g,真空脈動干燥茯苓破碎率低,約為3.28%～3.51%。楊武德等[11]采用苯酚－硫酸法測定不同炮制方法制成的茯苓總糖及多糖的含量,結果表明,炮制方法不同茯苓中總糖及多糖的含量有明顯差異,含量從高到低依次為米湯制＞明礬米湯制＞土炒＞朱砂制2＞朱砂制1＞生品。與生品相比較,炮制后茯苓的總糖及多糖含量顯著性增加。

2 成分分析法

茯苓中的化學成分主要包括三萜類、多糖和其他成分如甾體類、氨基酸、揮發油、膽堿、鉀鹽等微量元素[12],目前多以茯苓多糖、茯苓酸含量的高低作為評價茯苓質量的指標。

2.1 三萜類

目前從茯苓中提取分離的三萜類化合物將近80種,主要是羊毛甾型三萜化合物,包括羊毛甾-8-烯型三萜、羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜、3,4-開環－羊毛甾-7,9(11)－二烯型三萜、3,4-開環－羊毛甾-8-烯型三萜等四類[13]。目前研究人員多采用HPLC、RP-HPLC等方法分析茯苓中的三萜類成分。具體分析方法見表1。

表1 三萜成分的分析方法

續表1 三萜成分的分析方法

2.2 多糖類成分分析方法

茯苓多糖類成分主要為β-茯苓聚糖(占93%左右)以及羧甲基茯苓多糖、木聚糖、茯苓次聚糖、μ-茯苓多糖、f-茯苓多糖、(1,3)-(1,6)-β-D-葡聚糖、纖維素等[23]。多糖成分分析方法見表2。

表2 多糖成分的分析方法

2.3 其他成分分析法

表3 其他成分的分析方法

3 茯苓化學成分體內代謝研究

3.1 藥物動力學研究

中藥藥代動力學是定量研究中藥及復方在體內吸收、分布、代謝和排泄的過程,運用數學原理和方法闡述中藥及復方在體內的動態規律的學科。宋宗華等[29]采用HPCL方法測定大鼠灌胃給予茯苓素混合提取物后,血漿中去氫土莫酸的達峰時間約為2 h,峰濃度為(10.4±1.4)μg/mL,藥時曲線下面積為32.6μg·mL-1·h-1。尹連紅[30]通過大鼠灌胃和靜脈注射給予茯苓新酸A后,采用LC-MS/MS法建立血漿中茯苓新酸A的測定方法,并對不同劑量的茯苓新酸A進行藥代動力學研究。沈嬋娟[31]采用2種動物模型對茯苓乙醇提取物主要有效成分進行藥動學研究,比較茯苓三萜主要有效成分在正常大鼠與腎病綜合征模型大鼠體內代謝過程,結果表明正常大鼠體內茯苓酸和去氫土莫酸吸收、分布較快,吸收量較大,消除較快,去氫茯苓酸較難檢出。Feng Xiao等[32]通過LC-MS方法比較大鼠灌胃給予茯苓提取物和桂枝茯苓膠囊后,3種茯苓三萜類化合物的藥物動力學特征的差異。錢琪等[33]采用大鼠灌胃給予茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮提取物,利用 UHPLC-Q-TOFMS/MS技術測定大鼠血漿中茯苓新酸B、去氫土莫酸、茯苓新酸A、豬苓酸C、茯苓新酸AM、去氫茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸的濃度,結果表明茯苓新酸AM在各組中均無吸收,茯苓新酸B、去氫土莫酸、茯苓新酸A、豬苓酸C、去氫茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸在茯苓皮組中吸收量最大。

3.2 血清藥物化學研究

中藥血清藥物化學依據中藥經口給藥的特點,以口服給藥后血清為樣品,從入血成分角度對中藥進行研究,是近年來發展迅速、科學性和系統性很強的一種研究方法[34]。錢琪[35]采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS技術,分析茯苓皮在大鼠血漿、膽汁和尿液中的吸收組分和代謝物,共鑒定出15種主要吸收組分,按結構分為4類,其中3類分別以茯苓酸、茯苓新酸A和去氫土莫酸為母藥；初步鑒定102種代謝物成分,主要代謝類型為甲基化、氧化、水解、氫化和葡萄糖醛酸結合等,為茯苓皮體內代謝過程的闡明奠定了基礎。沈嬋娟[31]建立茯苓乙醇提取物、實驗動物含藥血清和空白血清的指紋圖譜,通過對比分析,發現雄性大鼠的含藥血清中有12種移行成分,其中7種為茯苓三萜原型,5種為代謝產物；雌性大鼠中有10種移行成分,其中6種為茯苓三萜的原型,4種為代謝產物。

4 結語

目前,茯苓的加工炮制工藝主要以傳統加工模式為主,現有研究主要集中在具體加工環節技術工藝探索改良,產地加工技術操作規范。茯苓炮制工藝的發汗環節缺乏科學、系統的評價指標,新技術應用也欠佳,因此,有必要對茯苓進行全面系統研究,揭示炮制原理和規律,采用新技術、新設備系統研究發汗、蒸煮、干燥等加工環節對茯苓品質的影響,考察傳統炮制工藝與現代化加工技術對藥效的影響,建立茯苓炮制技術規范和質量標準。

在成分分析方面,研究主要集中在三萜類的茯苓酸、去氫茯苓酸等,對茯苓多糖成分的研究較少?，F代藥理研究表明,茯苓多糖具有抗衰老、抗腫瘤等[36]作用,因此,深入加強茯苓多糖化學成分的技術分析,建立更高的茯苓質量標準。在體內代謝方面,目前報道的針對茯苓藥材的體內代謝研究較少,主要集中在三萜類化學成分的動力學研究,其研究方法主要有HPLC法、LC-MS/MS法等。

中藥炮制是中藥現代化的關鍵所在,也是影響產品質量、藥效的重要因素。本文對目前茯苓加工炮制現狀、主要化學成分分析方法和體內代謝的研究情況進行了初步整理,以期為茯苓炮制的現代化研究、產業鏈的開發提供參考。