GC法同時(shí)測(cè)定艾納香油中6種成分的含量

陳寶雯 錢一鑫 周黎亞 王魯 康冀川

摘 要 目的：建立同時(shí)測(cè)定艾納香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素含量的方法。方法：采用氣相色譜法。色譜柱為RTX-1701毛細(xì)管柱，程序升溫，檢測(cè)器為氫離子火焰檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度為240 ℃，進(jìn)樣口溫度為240 ℃，載氣為高純氮?dú)猓魉贋? mL/min，進(jìn)樣量為0.5 μL，進(jìn)樣分流比為50 ∶ 1。結(jié)果：β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.029 7～0.267 1 mg/mL（r=0.999 9）、 0.024 3～0.218 9 mg/mL（r=0.999 9）、0.126 0～1.134 0 mg/mL（r=0.999 9）、0.217 2～1.954 8 mg/mL（r=0.999 9）、0.136 3～1.226 9 mg/mL（r=0.999 9）、0.044 5～0.400 3 mg/mL（r=0.999 5）;定量限分別為0.028 5、0.008 7、0.018 6、0.016 8、0.014 5、0.042 1 mg/mL，檢測(cè)限分別為0.009 4、0.002 9、0.006 1、0.005 5、0.004 8、0.013 9 mg/mL;精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、耐用性試驗(yàn)的RSD均小于3%;加樣回收率分別為98.13%～101.30%（RSD=1.20%，n=9）、98.44%～101.81%（RSD=1.28%，n=9）、98.26%～101.05%（RSD=1.19%，n=9）、99.08%～101.58%（RSD=0.89%，n=9）、98.66%～101.66%（RSD=1.17%，n=9）、98.84%～103.60%（RSD=0.96%，n=9）;樣品含量分別為14.552～46.766、16.951～22.096、80.597～113.115、205.224～242.537、47.761～135.697、26.493～45.771 mg/g。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，精密度、重復(fù)性良好，可用于同時(shí)測(cè)定艾納香油中6種成分的含量，并可為艾納香油質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)及提取工藝研究提供參考。

關(guān)鍵詞 艾納香油;氣相色譜法;β-蒎烯;芳樟醇;L-樟腦;L-龍腦;β-石竹烯;花椒油素;含量測(cè)定

Simultaneous Determination of Contents of 6 Components in the Oil of Blumea balsamifera by GC

CHEN Baowen1，QIAN Yixin2，ZHOU Liya3，WANG Lu2，3，KANG Jichuan1，2（1. School of Pharmacy， Guizhou University， Guiyang 550025， China; 2. Engineering Research Center of Southwest Bio-Pharmaceutical Resources， Ministry of Education， Guizhou University， Guiyang 550025， China; 3. Guizhou Rui-Teng Intellectual Property Agency Co.， Ltd.， Guiyang 550007， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of contents of β-pinene， linalool， L-camphor， L-borneol， β-caryophyllene and xanthoxylin in the oil of Blumea balsamifera. METHODS： GC method was adopted. The determination was performed on RTX-1701 capillary column （programmed temperature）. The FID detector was controlled at 240 ℃. The inlet temperature was set at 240 ℃. The carrier gas was high-purity nitrogen 3 mL/min. The the sample size was 0.5 μL， and split ratio was 50 ∶ 1. RESULTS： The linear range of β-pinene， linalool， L-camphor， L-borneol， β-caryophyllene and xanthoxylin were 0.029 7-0.267 1 mg/mL （r=0.999 9）， 0.024 3-0.218 9 mg/mL （r=0.999 9）， 0.126 0-1.134 0 mg/mL （r=0.999 9）， 0.217 2-1.954 8 mg/mL （r=0.999 9）， 0.136 3-1.226 9 mg/mL （r=0.999 9）， 0.044 5-0.400 3 mg/mL（r=0.999 5）， respectively. The limits of quantitation were 0.028 5， 0.008 7， 0.018 6， 0.016 8， 0.014 5， 0.042 1 mg/mL; the limits of detection were 0.009 4， 0.002 9， 0.006 1， 0.005 5， 0.004 8， 0.013 9 mg/mL， respectively. RSDs of precision， stability， reproducibility and durability tests were all lower than 3%. The average recoveries were 98.13%-101.30%（RSD=1.20%，n=9），98.44%-101.81%（RSD=1.28%，n=9），98.26%-101.05%（RSD=1.19%，n=9），99.08%-101.58%（RSD=0.89%，n=9），98.66%-101.66%（RSD=1.17%，n=9），98.84%-103.60%（RSD=0.96%，n=9）， respectively. The contents of 6 components in the sample were 14.552-46.766， 16.951-22.096， 80.597-113.115， 205.224-242.537， 47.761-135.697， 26.493-45.771 mg/g， respectively. CONCLUSIONS： The established method is simple， accurate， precise and reproducible， which can be used for simultaneous determination of contents of 6 components in the oil of B. balsamifera. It can provide reference for comprehensive evaluation and extraction technology study of the oil of B. balsamifera.

KEYWORDS ? Oil of Blumea balsamifera; GC; β-pinene; Linalool; L-camphor; L-borneol; β-caryophyllene; Xanthoxylin; Content determination

艾納香[Blumea balsamifera（L.）DC]為菊科艾納香屬多年生木質(zhì)草本植物，分布于我國(guó)南部各省，如貴州、廣西、海南等[1]，是貴州重要的民族藥。該藥具有祛風(fēng)消腫、活血散瘀的功效，可用于治療跌打損傷、瘡癤腫痛、濕疹、皮炎等[2]。艾納香油是由艾納香葉提煉而成的精油，具有抗炎、抗氧化和修復(fù)皮膚等藥理活性[3-5]，主要含有萜品烯醇、龍腦、樟腦、芳樟腦等多種成分[6]，其中L-龍腦具有促進(jìn)藥物吸收的作用，L-樟腦具有神經(jīng)保護(hù)作用[7]，β-石竹烯具有局部麻醉、抗炎、驅(qū)蚊蟲(chóng)、抗焦慮、抗抑郁等作用[8]，β-蒎烯具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒、抗炎等作用[9]，芳樟醇具有鎮(zhèn)痛、抗焦慮、鎮(zhèn)靜催眠等作用[10]，花椒油素具有抑制血小板凝聚和藥物所致腸、子宮、膀胱等肌肉收縮等作用[11]。《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》采用氣相色譜法（GC）測(cè)定艾納香油中L-龍腦的含量，規(guī)定其含量不得低于20.0%[6]。但由于艾納香油成分較多，因此對(duì)單一成分的定量檢測(cè)難以全面評(píng)價(jià)其質(zhì)量。目前，雖然已有研究采用GC法同時(shí)測(cè)定艾納香油中5種成分的含量，但該方法存在耗時(shí)較長(zhǎng)的缺點(diǎn)[12]。為了縮短分析時(shí)間、提高分析質(zhì)量和效率，本研究在優(yōu)化色譜條件的基礎(chǔ)上，采用GC法同時(shí)測(cè)定了艾納香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素等6種成分的含量，旨在為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

1 材料

1.1 儀器

GC-2010 Plus型GC儀，包括RTX-1701型毛細(xì)管柱、2010 Plus型氫火焰離子檢測(cè)器、WBI-2010 Plus型進(jìn)樣口、AOC-201+S型自動(dòng)進(jìn)樣器、Lab Solutions 5.87工作站（日本Shimadzu公司）;BS1101S型萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

β-蒎烯對(duì)照品（批號(hào)：C10H116，純度：≥98%）、花椒油素對(duì)照品（批號(hào)：C10H1204，純度：≥98%）均由鄭州杰克斯化工有限公司提供;L-樟腦對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111749-201702，純度：99.9%）;芳樟醇對(duì)照品（批號(hào)：J28J9S66619，純度：≥98%）、β-石竹烯對(duì)照品（批號(hào)：Z02A9H67113，純度：≥98%）均由上海源葉生物科技有限公司提供;L-龍腦對(duì)照品[阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號(hào)：F1705071，純度：≥98%];艾納香油（貴州A公司，批號(hào)：20170317;貴州B公司，批號(hào)：20170409;貴州C公司，批號(hào)：20170321、20180116;規(guī)格均為500 mL/瓶）;水楊酸甲酯對(duì)照品[內(nèi)標(biāo)，阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號(hào)：J1709026，純度：≥99.5%];甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：RTX-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）;程序升溫：初始溫度100 ℃，以10 ℃/min升溫至150 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升溫至220 ℃，保持6 min;檢測(cè)器：氫火焰離子檢測(cè)器;檢測(cè)器溫度：240 ℃;進(jìn)樣口溫度：240 ℃;載氣：高純氮?dú)猓兌龋?9.999%）;流速：3 mL/min;進(jìn)樣量：0.5 μL;進(jìn)樣分流比：50 ∶ 1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 分別精密稱取花椒油素、芳樟醇、β-石竹烯、β-蒎烯、L-龍腦和L-樟腦對(duì)照品各適量，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯和花椒油素質(zhì)量濃度分別為0.371、0.304、1.575、2.715、1.704、 0.556 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取水楊酸甲酯對(duì)照品適量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為9.982 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.3 供試品溶液 精密稱取艾納香油樣品40 mg，置于10 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”項(xiàng)下內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 空白對(duì)照溶液 以甲醇為空白對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白對(duì)照溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，詳見(jiàn)圖1。由圖1可知，各成分均能達(dá)到基線分離，分離度均大于3，保留時(shí)間均小于13 min，理論板數(shù)均大于3 000;空白對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.4、0.8、1.0、1.8、3.6 mL，分別置于5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”項(xiàng)下內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，再加甲醇定容至刻度，得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。取適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以各成分與內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度比（x）為橫坐標(biāo)、各成分與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 定量限與檢測(cè)限考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，用甲醇倍比稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分別計(jì)算定量限、檢測(cè)限。結(jié)果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素的定量限分別為0.028 5、0.008 7、0.018 6、0.016 8、0.014 5、0.042 1 mg/mL，檢測(cè)限分別為0.009 4、0.002 9、0.006 1、0.005 5、0.004 8、0.013 9 mg/mL。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，用甲醇稀釋后，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素峰面積的RSD分別為 0.51%、0.96%、0.09%、0.12%、0.19%、0.49%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：20180116）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素峰面積的RSD分別為0.55%、1.91%、0.21%、0.21%、0.25%、0.46%（n=7），表明供試品溶液于室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20180116）40 mg，共6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中6種成分的含量。結(jié)果，β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素的平均含量分別為16.296、20.466、114.568、209.877、117.284、35.062 mg/g，RSD分別為1.79%、0.97%、1.26%、1.04%、0.99%、1.23%（n=6），表明本方法重復(fù)性較好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：20180116），共9份，每份約20 mg，分別加入一定量的混合對(duì)照品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.10 耐用性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：20180116）適量，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別以不同進(jìn)樣口溫度（230、240、250 ℃）、柱溫（98、100、102 ℃）、流速（2、3、4 mL/min）進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中6種成分的含量。結(jié)果顯示，各成分含量的RSD均小于3%，提示本方法可滿足試驗(yàn)要求，耐用性良好。

2.11 樣品含量測(cè)定

取各批樣品，每份40 mg，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每批樣品平行操作3次，記錄峰面積并按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中6種成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

在樣品前處理中，筆者分別考察了乙酸乙酯和甲醇為溶劑時(shí)的色譜分離情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以乙酸乙酯為溶劑時(shí)，色譜圖中除有乙酸乙酯峰外，在3 min內(nèi)還出現(xiàn)了雜峰，干擾了樣品中其他成分的測(cè)定，這可能與乙酸乙酯具有較強(qiáng)吸水性，吸水后在高溫下易水解有關(guān)[13];以甲醇為溶劑時(shí)，樣品在甲醇中溶解度好，且甲醇在GC分析中不易分解出雜峰，故選擇將其作為溶劑。同時(shí)，筆者對(duì)程序升溫進(jìn)行了優(yōu)化，并在10～30 ℃/min范圍內(nèi)對(duì)升溫速率進(jìn)行調(diào)整。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，L-樟腦、L-龍腦在溫度升至150 ℃左右時(shí)出峰，且保留時(shí)間相近，此時(shí)的升溫速率（10～30 ℃/min）無(wú)法將二者分離;在150 ℃保留1 min時(shí)，L-樟腦和L-龍腦有良好的分離效果，且峰形良好;同時(shí)由于花椒油素熔點(diǎn)較高，在210 ℃以下無(wú)法出峰，當(dāng)溫度升至220 ℃保持4 min后才得以洗脫出現(xiàn)在色譜圖上，繼續(xù)升高溫度雖然可以提高花椒油素的分析率，但是由于溫度過(guò)高，使得色譜圖后半段基線嚴(yán)重漂移，無(wú)法保證分析質(zhì)量，因此將220 ℃的持續(xù)時(shí)間設(shè)定為6 min，并最終確定了本研究中的升溫程序。

本研究含量測(cè)定結(jié)果顯示，L-龍腦為艾納香油中含量最高的成分，其在4批樣品中的含量相對(duì)穩(wěn)定，分別為20.5%、24.3%、20.6%、20.8%，符合《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[6]中的規(guī)定（不低于20.0%），這提示雖然不同廠家的提取方法不同，但對(duì)L-龍腦含量的影響均較小。不同企業(yè)樣品間其余各成分的含量存在較大差異，由于本研究中的3家企業(yè)的原材料產(chǎn)地、樣品采收季節(jié)均相同，只是提取工藝不同，因此提示提取方法對(duì)樣品中其余成分的含量影響較大，這與嚴(yán)學(xué)芬等[14]研究結(jié)果一致。

綜上所述，本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，精密度、重復(fù)性良好，可用于同時(shí)測(cè)定艾納香油中β-蒎烯、芳樟醇、L-樟腦、L-龍腦、β-石竹烯、花椒油素等6種成分的含量，并可為艾納香油質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)及提取工藝的研究提供參考。

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（收稿日期：2019-05-13 修回日期：2019-09-23）

（編輯：陳 宏）