高效液相法與氣質聯用法測定白酒中對乙酰氨基酚的比較

景贊 劉超 黃志勇 楊永剛

摘 要：目的：建立白酒中非法添加物對乙酰氨基酚的液相和氣質聯用檢測方法，并比較兩種方法的差異性。方法：液相法樣品直接過濾進樣檢測，氣質聯用法采用二氯甲烷提取，QuEChERS凈化進樣檢測，從線性關系、定量限、回收率、精密度及實際樣品測定等方面比較差異性。結果：兩種方法線性關系良好，回收率81.4%～98.1%，

精密度0.9%～3.0%，氣質法定量限0.15 mg·kg-1，液相法定量限0.60 mg·kg-1。結論：液相法和氣質法均適合基層檢驗機構開展對乙酰氨基酚的檢測，可以靈活選擇。

關鍵詞：白酒;高效液相;氣質聯用;對乙酰氨基酚;非法添加

Abstract：Object： To compare HPLC and GC-MS/MS for determination of acetaminophen in Chinese spirit. Methods： Samples were filtered before injected to the HPLC， the compound was carried out on ODS-3 C18 column using methanol and ammonium acetate （10+90， 50 mmol·L-1） as mobile phase. The other sample was extracted with dichloromethane and separated by VF-1701ms column. Compare the differences of two methods from recovery， precision， limit quantitation and actual samples respectively. Results： Good linearity was observed in the ranges of 0～10 mg·kg-1 and the limit of quantitation was 0.15 mg·kg-1 and 0.60 mg·kg-1. The method had a great recovery in the concentration range of 1～10 mg·kg-1，

the recovery was 81.4%～98.1%， the precision was 0.9%～3.0%. Conclusion： The simplicity， sensitivity and good precision of the methods made it is well suitable for determination of acetaminophen in Baijiu.

Key words：Chinese spirit; HPLC; GC-MS/MS; Acetaminophen; Illegally add

中圖分類號：O657.63;TS262.3

我國是白酒的生產、消費大國，白酒也承載著文化與歷史的雙重底蘊，但近幾年白酒行業的食品安全問題不容樂觀，塑化劑、甜味劑、工業酒精勾兌假酒及虛標年份等問題時有發生，2016年相關報道稱，個別經銷商在白酒中非法添加對乙酰氨基酚，俗稱“頭痛粉”，并對外宣稱飲用該酒不上頭，醉酒后不頭疼[1-2]。

對乙酰氨基酚是一種常用的解熱鎮痛藥，別名撲熱息痛，日常使用中要遵循醫囑，并注意各種禁忌，非法添加在白酒中有很大的安全隱患，長期飲用易造成肝腎功能損傷。目前檢測對乙酰氨基酚的方法主要有液相色譜法、液質聯用法、近紅外漫反射、拉曼光譜法及氣相色譜法，主要應用在藥品含量測定以及臨床研究、代謝組學等方面，應用液相法和氣質聯用法檢測白酒中對乙酰氨基酚尚未有報道[3-8]。液相色譜儀在基層檢測單位的普及率較高，氣質聯用儀也有一定的覆蓋，本文可為靈活選用合適的檢測方法，有效監管此類非法添加提供可靠及時的檢測手段。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

對乙酰氨基酚標準品，購于中國藥品生物制品檢定所;甲醇，色譜純;二氯甲烷，分析純;C18、PSA粉，天津博納艾杰爾科技。

1.2 儀器與設備

液相色譜儀1260，安捷倫科技有限公司;氣質聯用儀，TQ-8040，島津中國有限公司。

1.3 標準溶液的測定

1.3.1 液相法

稱取對乙酰氨基酚標準品適量，用甲醇配制成濃度為100 μg·mL-1的標準儲備溶液，分別準確移取0、0.1、0.2、0.4、0.6 mL及1 mL上述溶液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到0、1、2、4、6 μg·mL-1及10 μg·mL-1的標準系列工作溶液。

1.3.2 氣質法

稱取對乙酰氨基酚標準品適量，用二氯甲烷稀釋至10 μg·mL-1，準確移取0.02、0.04、0.10、0.20 mL及0.40 mL于容量瓶中，用空白提取液定容至2 mL，搖勻，得到濃度分別為0.1、0.2、0.5、1 μg·mL-1及

2 μg·mL-1的標準系列工作溶液。

測定標準溶液，以濃度為橫坐標，響應值為縱坐標，繪制標準曲線。

1.4 樣品前處理

液相法。將樣品混勻，經0.22 μm有機濾膜過濾后測定。

氣質法：稱取2 g樣品，加入4 mL二氯甲烷和0.6 g氯化鈉，振搖4 min，靜置分層，將二氯甲烷層移至離心管中，重復提取1次，合并2次提取液。加入0.2 g無水硫酸鈉，去除提取液中殘余水分，氮吹至近干，用二氯甲烷定容至2 mL，0.22 μm有機濾膜過濾后測定。

1.5 儀器條件設置

1.5.1 液相法

色譜柱：Inertsil ODS-3（150 mm×4.6 mm，5 μm），

流動相：甲醇+0.05 mol·L-1乙酸銨溶液（10+90），流速：1 mL·min-1，檢測波：245 nm，柱溫：30 ℃，進樣體積：5 μL。

1.5.2 氣質法

進樣口溫度：220 ℃，分流比：20∶1;色譜柱：VF-1701 ms毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;柱溫箱升溫程序：初始溫度50 ℃（保持1 min），以15 ℃·min-1升至230 ℃（保持時間10 min）;線速度：50 cm·sec-1;進樣體積：1 μL;載氣：高純氦氣。接口溫度：240 ℃，離子源溫度：200 ℃;電離方式：EI，電離能量 70 eV;溶劑延遲：5 min。

2 結果與分析

2.1 前處理方法及儀器條件的選擇

白酒樣品基質相對簡單，直接過濾進樣可有效減少處理過程對目標物質的影響。通過實際樣品的液相圖譜也可以看出，目標物與白酒中其他成分達到了完全分離，不會干擾定性和定量。在190～400 nm范圍內掃描對乙酰氨基酚標準物質的吸收波長，結果如圖1。245 nm處該物質有最大吸收，選擇此波長作為檢測波長。

對乙酰氨基酚可溶于多種有機溶劑，前期實驗選擇乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、乙腈和甲醇作為提取溶劑，其中二氯甲烷提取液雜質最少，提取效率較高。

將對乙酰氨基酚標準溶液進行Q3掃描，得到總離子流色譜圖，見圖2，碎片離子見圖3，其中109、151質荷比較大，強度遠高于其它離子，選擇這兩個離子作為母離子，進行二級碎裂，優化碰撞電壓后，確定兩組離子對151>109（定量），109>80（定性），建立氣質聯用方法，具體MRM參數見表1。

2.2 方法的線性關系和定量限

以濃度為橫坐標，響應值為縱坐標，繪制標準曲線，在所測定濃度范圍內，線性關系良好。以10倍的信噪比計算定量限，結果見表2。

2.3 加標回收率和精密度

在空白酒樣中加入標準溶液使其最終含量分別為0.5、1、2 mg·kg-1，每個水平設定3個平行，按照1.4樣品前處理過程，提取后過0.22 μm有機濾膜上機測定，計算回收率和相對標準偏差，結果見表3。液相、氣質法加標樣品色譜圖分別見圖4、圖5。

2 1.2 1.9

由表3結果可見，2種方法在各濃度水平下的回收率和精密度都較好，液相法因為前處理簡單，回收率較高;氣質法涉及液液萃取過程，回收率和精密度稍差，但2種方法均滿足測定要求。

2.4 實際樣品測定

將15組不同濃度的樣品，按照上述前處理方法進行提取，分別采取液相法和氣質法進行測定，結果見表4。

15個樣品的含量測定范圍為0.33～14.8 mg·kg-1，經配對t檢驗，P>0.05，兩種方法的測定結果無顯著差異。

3 討論

液相法采用酒樣直接過濾后上機分析的方法，節約了樣品處理時間，同時液相色譜的應用較為廣泛，適合基層檢驗機構開展工作;氣質法儀器昂貴，前處理方法比較耗時，但是較液相法定性準確、定量限更低。對兩種方法進行方法學驗證得出，準確性、精密度良好，適用于白酒中對乙酰氨基酚的檢測，各檢測機構可根據實際條件進行選擇。

參考文獻：

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GB 29683-2013 食品安全國家標準 動物性食品中對乙酰氨基酚殘留量的測定 高效液相色譜法[S].北京：中國標準出版社，2014.