血清維生素D 與乙肝肝硬化疾病的相關性分析

陳曉艷 張一文 范妮

作者單位：1 山東中醫(yī)藥高等專科學校西醫(yī)教學部，山東 煙臺 264100；2 青島市第六人民醫(yī)院一病區(qū)，山東 青島 266000

維生素D除參與鈣磷代謝，還可參與細胞的增殖、分化及凋亡，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種生物學功能[1]。維生素D在肝內(nèi)活化為25-羥維生素D（25-hydroxyvitamin D，25（OH）D），被認為是測定維生素D水平最可靠的指標，可反映機體維生素D狀態(tài)。乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）損傷肝細胞線粒體內(nèi)25-羥化酶的活性，減少了25（OH）D的生成。同時肝病患者維生素D減少又會加速肝臟疾病本身的進展。維生素D缺乏已被證明會增加肝硬化患者的總體死亡率和感染風險，與晚期肝癌和預后不良有關[2]。本文收集青島市第六人民醫(yī)院就診的乙型肝炎肝硬化患者327例，通過檢測患者血清維生素D含量、乙型肝炎病毒復制水平及肝纖維化程度，就兩者之間的相關性進行探討分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年11月—2018年11月在青島市第六人民醫(yī)院就診的乙型肝炎肝硬化初治患者327例，均經(jīng)臨床表現(xiàn)、生化指標、腹部B超或CT等檢查確診，診斷符合2015年《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》標準[3]。排除合并其他嗜肝病毒感染、藥物性肝損害及酒精性肝病患者。其中男215例，女112例；年齡35～77歲，平均年齡（48.5±8.3）歲。患者均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法

所有受試者取晨起空腹靜脈血3 mL，以3000 r/min離心20 min，分離血清待檢。采用酶聯(lián)免疫法檢測血清25（OH）D含量，＜30 ng/mL者列為實驗組；≥30 ng/mL者列為對照組[4]。熒光定量PCR法檢測血清HBV-DNA水平，放射免疫分析法檢測肝纖維化指標：透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、層粘連蛋白（laminin，LN）、Ⅲ型前膠原（type Ⅲ procollagen，PC-Ⅲ）、Ⅳ型膠原（type Ⅳ collagen，C-Ⅳ）。

1.3 觀察指標

檢測血清HBV-DNA定量、透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型膠原（C-Ⅳ）。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 根據(jù)血清25（OH）D含量分組情況

檢測327例乙肝肝硬化患者，血清25（OH）D含量＜30 ng/mL者246例，列為實驗組；＞30 ng/mL者81例，列為對照組。實驗組男性159例，女性87例，年齡37～77歲，平均年齡（49.3±8.1）歲；對照組男性56例，女性25例；年齡35～77歲，平均年齡（48.2±9.5） 歲。兩組在性別、年齡無顯著性差異。

2.2 不同組別病毒學結果比較

實驗組HBV-DNA（6.17±2.12）log10 copies/mL，對照組HBV-DNA（4.93±1.96） log10 copies/mL，實驗組明顯高于對照組，有顯著性差異（t=4.650，P=0.000）。

2.3 不同組別肝纖維化指標比較

見表1。實驗組HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ明顯高于對照組，有顯著性差異（P＜0.05）。兩組LN無顯著性差異（P＞0.05）。

3 討論

維生素D能刺激細胞免疫，活化單核細胞，抑制Th1細胞激活，減少白介素（IL）-2等細胞因子的分泌，促進Th2細胞分泌IL-4、IL-5等抗炎因子[5]。這些機制對于乙肝病毒感染的細胞免疫至關重要。本研究發(fā)現(xiàn)，實驗組HBV-DNA水平明顯高于對照組，提示25（OH）D不足與HBV高復制相關，這與多項研究結果一致。Yu R等[6]發(fā)現(xiàn)，25（OH）D水平是病毒學應答的獨立預測因子，但與乙型肝炎e抗原（HBeAg）血清轉化率或丙氨酸氨基轉移酶（ALT）正常化無關。He LJ等[7]報道CD3+、CD4+T淋巴細胞比例及CD4+/CD8+比值均隨著血清維生素D水平的升高而顯著升高，但CD8+比例有所下降；HBeAg、HBsAg、HBV DNA滴度陽性率隨血清維生素D的增加而下降。

表1 不同組別患者肝纖維化指標比較 （μg/L）

表1 不同組別患者肝纖維化指標比較 （μg/L）

組別 HA LN PC-Ⅲ C-Ⅳ實驗組 325.1±95.6 177.2±36.2 322.7±119.4 251.8±96.8對照組 290.3±86.3 185.5±55.4 275.2±98.3 182.5±84.1 t 值 2.909 1.552 3.236 5.765 P 值 0.004 0.122 0.001 0.000

維生素D與心肌、腎、肺等多種組織器官的纖維化相關。25（OH）D在肝臟產(chǎn)生，Shan B等[8]研究9個關鍵單核苷酸多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)多種基因與維生素D代謝相關。Reiter FP等[9]通過研究硬化性膽管炎小鼠，發(fā)現(xiàn)1，25（OH）2D3可下調(diào)腫瘤壞死因子受體1和CD11b+細胞的表達，改善肝臟炎癥損傷，延緩肝纖維化進程。Zhu L等[10]應用 Vit D 缺乏的食物飼養(yǎng)小鼠后，發(fā)現(xiàn)Vit D 缺乏可以通過增加 Fas 和 FasL，降低Bcl2和Bclx，從而引發(fā)肝實質(zhì)細胞凋亡，并激活 HSC 誘導肝纖維化。Papapostoli I等[11]研究發(fā)現(xiàn)，短期應用維生素D 20 000 IU/周，4周，可改善肝臟炎癥進展。Jamil Z等[12]認為，晚期肝硬化患者（Child-Pugh B級和C級）應定期檢查維生素D水平，必要時需以補充，以改善肝硬化患者的總體狀況。亦有研究得出不同結論， Ren Y等[13]認為，25（OH）D與肝臟炎癥活動度相關，但與纖維化程度并無相關。出現(xiàn)這種爭議必須考慮到，血清維生素D水平受人種、地理位置、年齡、飲食習慣、服飾、光照條件等多種因素的影響，不同實驗顯示這種看似矛盾的結論，可能與這些影響因素有關。

本研究以HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ、LN作為肝纖維化的觀察指標。HA是肝細胞外間質(zhì)中的蛋白多糖，LN是構成細胞間質(zhì)的非膠原糖，PC-Ⅲ反映肝內(nèi)膠原合成，C-Ⅳ是基底膜的主要成分。測定上述指標的血清含量，可反映肝臟內(nèi)皮細胞、儲脂細胞、成纖維細胞的變化。本研究發(fā)現(xiàn)，實驗組肝纖維化指標HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ明顯高于對照組，提示25（OH）D不足與肝纖維化進程相關。兩組LN未表現(xiàn)顯著差異，可能與肝硬化所致門靜脈壓力升高、食管胃底靜脈曲張程度相關。

綜上所述，慢性乙型肝炎肝硬化患者普遍存在維生素D缺乏，且血清維生素D含量低下與HBV復制高水平、肝纖維化程度進展相關。應維持乙肝肝硬化患者的血清維生素D的正常水平，以抑制HBV復制，延緩肝臟纖維化進程。采用血清維生素D含量作為肝硬化的嚴重程度的評價指標，維生素D作為乙肝抗病毒的輔助治療等方面也有廣泛的研究前景。由于維生素D在體內(nèi)的靶細胞種類很多，各種反饋調(diào)節(jié)機制復雜，如何補充維生素D來控制乙型肝炎患者病情發(fā)展，同時避免高鈣血癥的發(fā)生還有待進一步的探索。