基于HPLC法的芙蓉散質量控制方法研究

首都醫科大學附屬北京中醫醫院（100010）莊志宏 吳劍坤

北京市衛生局臨床藥學研究所（101300）張林華

芙蓉散為北京中醫醫院院內制劑，在皮科、外科已有50多年的應用。它具有清熱解毒，消腫止痛的功效，對于陽性腫瘍有良好的治療效果。臨床常用于瘡瘍腫毒之熱毒蘊結引起的乳腺炎、各種軟組織損傷、關節炎等癥候，癥見皮膚紅、腫、熱、痛，舌紅，苔白或黃，脈滑、數[1]。處方為芙蓉葉、生大黃、黃芩、黃連、關黃柏、澤蘭、冰片等。方中芙蓉葉具有涼血解毒、消腫止痛作用，生大黃清熱解毒、祛瘀生新，芙蓉葉、生大黃為君藥，黃芩清熱解毒、瀉火燥濕，助君藥清熱解毒，行臣藥之功。局部用藥可使腫瘍得以消散，即使難以完全消散也可使腫勢局限，拔膿外出[2][3]。在現執行標準《北京市醫療機構制劑規程》中僅規定對芙蓉散進行薄層鑒別，并無含量檢測項目。為進一步提升芙蓉散質量控制水平，識別制劑生產過程關鍵風險因素，本研究建立了芙蓉散中黃芩苷含量測定方法，為有效控制制劑質量、保證臨床用藥安全提供依據。

附圖 對照品溶液，陰性對照溶液，供試品溶液色譜圖

1 材料

1.1 主要儀器 日立L-2000型高效液相色譜儀；D-2000工作站；島津AUW-220D分析天平等。

1.2 樣品與試劑 黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110715-201720）；芙蓉散（北京中醫醫院提供，批號：1701016）；乙腈（色譜純，天津市光復科技有限公司）；純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈（B）和0.1%磷酸水（A）為流動相梯度洗脫，梯度洗脫條件詳見附表1；流速1ml/min；柱溫30℃；檢測波長277nm；進樣量10μL；理論塔板數按黃芩苷峰計算不低于2500。見附表1。

2.2 黃芩苷對照品溶液制備 精密稱取黃芩苷對照品1.55mg，置于10mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃芩苷為0.155mg/mL的對照品溶液。

2.3 芙蓉散供試品溶液制備 精密稱取芙蓉散5g，精密加入70%甲醇75ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷至室溫，用70%甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續濾液5ml～25ml容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，取續濾液即得。并按照處方配制不含黃芩的陰性對照樣品。

2.4 陰性對照樣品 在上述色譜條件下，取黃芩對照品溶液、芙蓉散供試品溶液、芙蓉散陰性樣品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，結果顯示黃芩苷和其他組分峰分離度良好，陰性樣品對測定無干擾，見附圖。

附表1 梯度洗脫色譜條件

附表2 芙蓉散中黃芩苷含量測定結果

附表3 樣品中黃芩苷含量測定結果

2.5 線性關系考察 按照上述色譜條件，分別進樣1、2、3、5、10μL的黃芩苷對照品溶液，記錄色譜圖。以進樣含量（μg）為橫坐標，以色譜峰面積值為縱坐標進行線性回歸，得到黃芩苷的回歸方程為Y=233651925.3239X+4290.3661；R2=1.0000。黃芩苷在0.155～1.55μg范圍內與峰面積線性關系良好。

2.6 重復性試驗 取2.4項下制備的供試品溶液，連續進樣6次，進樣量10μL，結果樣品中黃芩苷的平均含量為4.00mg/g，RSD為1.38%（n=6），表明該方法重復性較好。

2.7 穩定性試驗 取芙蓉散供試品溶液，按上述色譜條件于0、2、4、8、24h進樣，結果，供試品溶液中黃芩苷峰面積的RSD為1.33%（n=5），表明供試品溶液中的黃芩苷成分在室溫放置24h內基本穩定。

2.8 回收率試驗 精密稱取已測含量的同一批號芙蓉散樣品6份，計算回收率。平均回收率為95.43%，RSD為1.48%。見附表2。

2.9 樣品含量測定 取3批芙蓉散供試品，按照2.4項下方法進行樣品處理，按照上述色譜條件進行含量測定，結果見附表3。

3 結論

本研究通過對供試液在HPLC檢測器響應信號進行測定，優化儀器參數，對提取溶劑的組成、提取時間和溶劑用量進行優化，確定最優的實驗條件，建立了具有分離效果好、峰形對稱、溶劑及其他雜質干擾小的含量測定方法。在三個批次樣品的應用表明，此方法可以對符合現行標準的藥品的質量進行進一步的量化。預期通過一段時間的數據積累可以明確制劑質量合理變化范圍。為采取合理、有效手段提升散劑均勻性，控制制劑質量、保證臨床用藥安全提供方法支撐。