硝苯地平緩釋片（Ⅰ）含量及含量均勻度測定方法的改進

安徽省合肥市食品藥品檢驗中心（230088）王瑋 秦紹剛

硝苯地平緩釋片（Ⅰ）是一種預防和治療冠心病心絞痛常用藥物，并未收載與中國藥典中，其執行標準為國家藥品標準WS1-(X-056)2004Z，本文參照藥典[1]中硝苯地平片含量測定項下方法，建立一種測定硝苯地平緩釋片（Ⅰ）中含量及含量均勻度的方法，結果準確，硝苯地平和降解產物可以完全分離。

1 儀器與試藥

1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AB265-S電子分析天平（德國梅特勒-托利多公司）；UV-3900紫外可見分光光度計（日本日立公司）。硝苯地平對照品（批號：100338-201103，中國食品藥品檢定研究院）；硝苯地平緩釋片（Ⅰ）片（亞寶藥業集團股份有限公司，批號120107和120903）；甲醇為色譜純，水為屈臣氏重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱：Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-水（60∶40），流速為1.0ml·min-1，檢測波長為235 nm，進樣量：20μl，柱溫：30.0℃。理論塔板數按硝苯地平峰計算應不小于2000，硝苯地平與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取硝苯地平對照品10.90mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品20片，精密稱取總片重，研細，精密稱取適量（約相當于硝苯地平10mg），置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察 精密稱取硝苯地平對照品10.70mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml分別置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按擬定的色譜條件進行檢測，記錄色譜圖，以硝苯地平濃度（μg·mL-1）為橫坐標，峰面積為縱坐標作線性回歸，得回歸方程Y=57.798X-92.149，r=0.9998。表明硝苯地平在8.56～42.8μg·mL-1濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

2.4 精密度、重復性及穩定性試驗 分別取同一種對照品溶液（21.8μg·mL-1），在上述色譜條件下，重復測定6次，每次20μl，主峰面積的RSD為0.18%（n=6），表明精密度良好。

分別取同一批硝苯地平緩釋片（Ⅰ）（批號：120903）共6份，在上述色譜條件下進樣，記錄色譜圖，硝苯地平含量測定的RSD為0.15%，表明本法重復性好。分別取同一種對照品溶液（21.4μg·mL-1），在室溫下放置，分別于0h、2h、4h、6h、8h進樣，記錄色譜圖。硝苯地平峰面積的RSD為0.22%，表明溶液的穩定性良好。

2.5 回收率試驗 稱取已知含量的供試品細粉（批號：120903）適量各9份，置50ml容量瓶中，分別加入硝苯地平對照品適量，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.1項下色譜條件，分別進樣。記錄色譜圖與峰面積，考察加樣回收率，結果見附表1。

附表1 硝苯地平回收率實驗（n=9）

附表2 樣品含量測定結果

附圖 硝苯地平液相色譜圖

2.6 專屬性試驗

2.6.1 酸降解溶液的配制 精密量取硝苯地平對照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10ml量瓶中，加5mol·L-1鹽酸溶液100μl，放置30分鐘，加5mol·L-1氫氧化鈉溶液100μl，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6.2 堿降解溶液的配制 精密量取硝苯地平對照品溶液（0.218mg·mL-1）1ml，置10 ml量瓶中，加5mol·L-1氫氧化鈉溶液100μl，放置30分鐘，加5mol·L-1鹽酸溶液100μl，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6.3 光破壞溶液的配制 將硝苯地平對照品溶液（0.218mg·mL-1），置日光下放置24小時后，即得。

2.6.4 熱降解溶液的配制 將硝苯地平對照品溶液（0.218mg·mL-1），置100℃水浴中加熱3小時后，即得。

按2.1條件進樣，記錄圖譜（附圖a-d）。結果顯示，本品四種破壞條件下，均產生明顯的降解產物（6.5分鐘處為硝苯地平雜質Ⅰ，7.7分鐘處為硝苯地平雜質Ⅱ）。在堿破壞時2種雜質峰較大，而光照條件下，硝苯地平嚴重降解為硝苯地平雜質Ⅱ，可見硝苯地平對光敏感，試驗過程要避光操作。在此色譜條件下，硝苯地平與相鄰雜質峰的分離度約為3.4，理論塔板數為4000，表明該方法專屬性良好。

2.7 最低檢測限 取對照品溶液（8.56μg·mL-1）用水稀釋若干倍，在上述色譜條件下測定，以信噪比S/N＝3計算檢測限，硝苯地品檢測限約為0.05μg。

2.8 樣品含量測定 避光操作。將樣品按照2.2.2項下的方法制成供試品溶液。精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取硝苯地平對照品，同法操作，按外標法以峰面積計算，即得，結果見附表2。

2.9 樣品含量均勻度測定 避光操作。取本品1片，除去包衣后，置50ml量瓶中，加甲醇振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液適量，加甲醇定量稀釋制成每1ml中約含20μg的溶液，作為供試品溶液。照含量測定項下的方法測定含量，結果均符合規定。

3 討論

筆者采用HPLC法測定硝苯地平緩釋片（Ⅰ）中硝苯地平的含量，能有效地控制該藥的質量。參考相關學者研究[2][3][4]，在檢測波長的選擇上，筆者將20μg·mL-1的硝苯地平對照品甲醇水溶液在紫外光譜區掃描，在235nm的波長有最大吸收，故本文選擇235nm作為檢測波長。

原有國家標準中要求稱樣于研缽中加氯仿研磨，再轉移至容量瓶中，研磨及轉移的過程又增加了測定誤差的步驟。整過程繁瑣費時、環境污染大，易造成誤差。本文直接用甲醇超聲溶解即可。比對色譜柱Venusil M P C18(250mm×4.6mm，5μm)與Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250mm×4.6mm，5μm)；硝苯地平的峰形和塔板都差不多，選擇較簡單的甲醇-水（60∶40）作為流動相體系，完全可以滿足試驗需求。