MoFlo XDP超速流式細胞分選儀的使用和管理

向承林

摘? 要：簡述MoFlo XDP超流式細胞分選儀的工作原理、使用調試和日常維護，介紹MoFlo XDP超速流式細胞分選儀的使用和管理。

關鍵詞：MoFlo XDP;超速流式細胞分選儀;使用和管理

中圖分類號：R197.39? ? ? ?文獻標志碼：A? ? ? ? ?文章編號：2095-2945（2019）26-0190-03

Abstract： This paper briefly describes the working principle， debugging and daily maintenance of the MoFlo XDP ultra speed flow cytometry sorter， and introduces the use and management of the MoFlo XDP ultra speed flow cytometry sorter.

Keywords： MoFlo XDP; ultra speed flow cytometry sorter; use and management

流式細胞分選儀是電子技術、激光技術、計算機技術、熒光化學技術及流體理論為一體的細胞分選技術，可以從細胞群體中分選出高純度的目標細胞進行細胞培養、細胞蛋白檢測、細胞基因測序等應用。MoFlo XDP超速流式分選儀是美國Beckman Coulter的第三代流式細胞分選儀，可根據細胞胞內蛋白、DNA、RNA及細胞表面標志物的不同，以每秒10萬個細胞的速度檢測包含FSC、SSC在內的17參數對細胞進行快速準確的分析和分選，同時可最多對四種細胞進行分選，廣泛應用于細胞生物學、免疫學、細胞生物學、發育生物學、細胞動力學、生理學、分子生物學等學科的研究。

1 工作原理

MoFlo XDP是一款在空氣中激發和分選的流式細胞分選儀，當單個懸浮顆粒通過噴嘴后在空氣中被激光束照射并對激光進行散射，同時所帶的熒光化合物發被激發并發射出熒光，檢測器同時對散射光和熒光進行分析并對包裹細胞的液流進行充電，通過震蕩液流使目標細胞包含在帶電的液滴中，在通過高壓靜電偏轉板時收集到指定容器中，實現對細胞的分析和分選。

2 儀器調試

2.1 激光

MoFlo XDP采用了固態激光，激光開啟后應預熱5分鐘使激光穩定工作，當使用355nm的高功率激光時，應當預熱30分鐘，否則可能因高功率的紫外激光對儀器光學部件造成損壞。

2.2 液流調整

打開液流系統，點擊觸屏面板上的“Debubble”進行排氣泡，當能觀察到穩定的液流即可停止。調整噴嘴的上下、左右、前后千分尺和平衡臺上的2個旋鈕，使液流垂直對齊。

2.3 光路校正

將MoFlo XDP的質控（QC）熒光微球用無菌的超純水按1：20進行稀釋，上樣微球，調整樣品壓力差使EPS為100，打開QC面板，調整激光的上下、左右、前后的千分尺和電壓，使面板上各通道的信號形成最亮、最集中的一群，且CV值在2.5以下即可（如圖1）。

2.4 液滴調整

打開液流震蕩開關，選擇噴嘴直徑，尋找激光位置，調整振蕩頻率（Frequency）、整幅（Amplitude）。選擇到分選調整面板，打開靜電偏轉板電源并加電壓到3000Volts，調整Charge Phase到分選液流偏轉最差的角度，然后調整到以該數值加減180°的角度，得到穩定的四路預分選液流。MoFlo XDP使用了IntellisortⅡ智能化分選模塊，使用70μm和100μm噴嘴時可通過計算機計算液滴延遲時間（Drop Delay）并自動微調振幅以維持液滴斷點（如圖2）。

2.5 分選設置

上樣并通過在軟件Summit V5.4.0上對細胞散射和熒光進行分析、設門，設定分選設置，選擇分選位置，可最多同時對L1、L2、R1、R2四個位置分選四種特定的細胞，并適配0.5mL、1.5mL、2mL、5mL、15mL、50mL離心管及標準流式管作為上樣和分選容器。同時MoFlo XDP還可通過“CyClone”分選設置，使用玻片和不同規格的孔板進行單種細胞分選。

2.6 關機

分選完成后，調整壓力差至5.0PSI，分別先后上樣2mL5%次氯酸鈉、75%乙醇、無菌超純水進行管路清洗，關閉系統和激光，排除鞘液桶氣壓。

3 日常維護與管理

（1）設備預約：流式細胞分選儀應至少提前24小時預約使用，預約前應提前告知樣品來源、抗體熒光染料信息和樣品信息。

（2）環境質控：MoFlo XDP應置放于密閉的潔凈房間內，室溫控制在18-22℃，濕度控制在20%-65%，同時配備紫外滅菌設備，實驗前后使用紫外照射滅菌15min。

（3）鞘液管路清洗：MoFlo XDP的鞘液管路系統采用

了全封閉系統，需要定期對鞘液管路進行滅菌維護。鞘液應使用無菌處理的PBS或生理鹽水，鞘液需要定期更換;每月使用75%乙醇做為鞘液，進行管路滅菌，每次進行2小時，再使用無菌PBS或生理鹽水沖洗管路2小時，清洗殘留乙醇;半年更換一次濾芯，拆下濾芯后可使用5%次氯酸鈉進行一次管路清洗，再使用75%乙醇沖洗，安裝新的濾芯，用無菌PBS或生理鹽水進行沖洗，濾芯不可接觸次氯酸鈉溶液。

（4）噴嘴清洗：噴嘴應每周或出現液滴狀態不穩定時進行拆卸和清洗，清洗時取下噴嘴，嘴尖朝上放入盛有2mL無菌超純水的流式管里，進行超聲清洗15min，清洗2次;將5mL注射器拔出針頭，吸入無菌超純水，對準噴嘴尾部并壓緊，推動注射器可看到噴嘴有穩定的液流噴出，再將注射器對準噴嘴尖部，緩慢推動，液體沿噴嘴內壁緩慢流出即說明噴嘴無堵塞，重復2次。

（5）進樣針清洗：MoFlo XDP提供了進樣針外壁滅菌

系統，點擊觸屏上的“Clean”按鈕，使用消毒液桶內預裝的消毒鞘夜對進樣針外壁滅菌;再點擊“Rinse”按鈕，使用鞘液對進樣針潤洗。

（6）上樣管路清洗：開機調試前，應先上樣75%乙醇對上樣管路滅菌5min，再使用無菌超純水上樣5min。

（7）進行分選時，應使用無水乙醇對分選倉使用無水乙醇進行擦拭滅菌，保證分選倉的無菌狀態，避免分選時樣品污染。

（8）分選過程中發現有樣品堵塞情況，應立即停止分選，點擊觸屏上的“Backflush”按鈕對上樣管路進行回沖2次，并上樣無菌超純水沖洗5min。

（9）每次完成實驗后，需要更換鞘液并加至鞘液桶上限刻度線，如使用自配的PBS或其他鞘液需要進行高壓滅菌;更換鞘液同時需要清倒廢液桶的廢液，并沖洗，防止下次實驗因廢液桶溢出而損壞空氣泵。

（10）MoFl XDP的光路系統在廠家工程師的指導下可以根據實驗需求進行光路調整和更改，嚴禁非管理人員擅自對電子系統、光路系統進行更改。

（11）樣品要求：對于需要進行分選的樣品，應當進行無菌處理，防止污染的樣品對系統管理造成污染;上樣前應使用300目（50μm）的無菌濾網過濾，防止對上樣管路造成堵塞;拒絕接受有感染性病毒、微生物樣品進行上樣分選。

4 結束語

MoFlo XDP超速流式細胞分選儀擁有高速度、高純度、高回收率和高準確性的特點，但是對運行環境要求較高，且設備零配件價格昂貴，到貨周期長，所以正確、規范的調試方法和日常管理方法，可以保證MoFlo XDP的穩定運行，準確有效地分選，節約設備的維護成本。

參考文獻：

[1]杜立穎.MoFlo XDP高速流式細胞儀[J].現代儀器，2004（2）：45-47.

[2]張小翠，符蓉，趙犇鵬.流式細胞儀MoFlo Astrios EQ 96孔板單細胞分選方法的條件優化[J].上海交通大學學報，2018，38（7）：845-890.

[3]石亞萍，種銀保，王晴.高端流式細胞分選有的選型和評價[J].醫療衛生裝備，2010，31（10）：122-124.

[4]李超，韓金路，王玉剛，等.流式細胞儀的工作原理及應用[J].中國國實用醫藥，2009，4（20）：235-236.

[5]黃瑩瑩.流式細胞分選術的應用進展[J].科技視界，2013（03）：173-174.

[6]楊蕊，陳捷光.流式細胞計無菌分選功能的開發[J].生物化學與生物物理進展，1990，17（6）：483-484.

[7]王淑靜，郝建民，畢建杰，等.流式細胞儀的使用與維護[J].中國現代教育裝備，2011（11）：55-56.

[8]方青，曾曉軍，徐鷹.流式細胞儀的原理和臨床應用[J].中國醫療前沿：學術版，2008，3（10）：84-85，91.

[9]張琰，溫潔，張朝霞.流式細胞儀在醫學中的應用[J].新疆醫科大學學報2005，28（1）：92-93.

[10]梁昊岳，楊晚竹，程雪蓮，等.BD Influx流式細胞分選儀參數調試和最佳條件的設定[J].中國醫學裝備，2014，11（2）：5-8.

[11]魯敏，李家璜，華子春.流式細胞儀（BD FACSCalibur）的管理和維護[J].北方藥學，2013，10（10）：147.

[12]王金福，邱麗燕，Jenny Harrintong，等.體外擴增小鼠造血干細胞/祖細胞及重建造血功能的研究[J].中華血液學雜志，2003，24（11）：584-587.