microRNA-218在肝細胞癌中的表達及其與肝癌轉(zhuǎn)移復發(fā)關(guān)系的實驗研究

肖鐘迪，張玉成，喬 峰

(1.大慶油田總醫(yī)院 普外科，黑龍江 大慶163001；2.吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 科學研究中心；3.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院 胸心外科)

肝細胞癌(HCC,簡稱肝癌)的惡性程度高，侵襲性強，極易復發(fā)和轉(zhuǎn)移。研究肝癌侵襲與轉(zhuǎn)移的潛在標志物和機理，將對肝癌的治療和預后判斷至關(guān)重要[1]。microRNAs(miRNAs)是一類長度約為19-22個核苷酸的非編碼RNA，研究表明microRNAs參與了肝癌的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的全過程[2,3]。但是有關(guān)miR-218與肝癌之間的相關(guān)性仍然未知。本研究將利用qRT-PCR方法檢測不同分期的肝癌組織miR-218表達的情況，結(jié)合肝癌患者生存率進行預后判斷，結(jié)合肝癌患者生物特征與生物統(tǒng)計學分析，以明確miR-218的表達與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移和預后之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象本研究選取2011-2013年大慶油田總醫(yī)院普外科肝癌患者112名，均為漢族，其中男性63名，女性47名，年齡20-70歲，其中女性平均年齡47.7歲，男性平均年齡46.1歲；112例肝癌樣本中，T1期44例，T2期45例，T3期23例。所有的樣本采集均獲得了患者知情同意，檢測完全符合大慶油田總醫(yī)院倫理道德標準并通過倫理審查。

1.2 RT-qPCR檢測TRIzol試劑(Thermo Fisher Scientific,USA)提取RNA，提取過程嚴格按照試劑盒說明書進行。然后應(yīng)用TaqMan MicroRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成單鏈cDNA，接著應(yīng)用TaqMan MicroRNA PCR (Thermo Fisher Scientific,USA)進行PCR反應(yīng)。結(jié)果采用2-ΔΔCT方法進行miR-218定量分析，U6作為對照microRNA，每個樣本至少重復3次，進行統(tǒng)計學分析。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0進行t檢驗，數(shù)值用均值和標準差表示，P<0.05代表有統(tǒng)計學意義；Kaplan-Meier生存曲線用于分析miR-218的表達水平與肝癌患者預后的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 miR-218在肝癌患者中表達降低利用RT-qPCR檢測了112例肝癌患者miR-218的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與癌旁正常組織相比，miR-218在肝癌患者中表達明顯降低，具有統(tǒng)計學意義(見圖1)。

圖1 miR-218在肝癌中表達降低

2.2 miR-218的表達與肝癌患者分期等的相關(guān)性利用RT-qPCR分別檢測了不同分期肝癌患者miR-218的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與癌旁正常組織相比，miR-218在T3期降低了86%，miR-218表達降低最大，而在T1期降低了52%，miR-218表達降低相對最小(見圖2A)； miR-218表達的降低與肝癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā)密切相關(guān)(見圖2B和圖2C)。

2.3 miR-218的低表達與肝癌患者預后有關(guān)通過手術(shù)后患者隨訪，以miR-218表達的中位值作為截斷值進行Kaplan-Meier生存曲線分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-218表達越低，肝癌患者的預后生存率越差(見圖3)。

3 討論

HCC是發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，其死亡率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中位列第三位，僅次于胃癌和食管癌。我國每年約有11萬人死于肝癌，其患病率占世界的50%以上，已成為嚴重威脅我國人民健康的重大疾病，值得重視。miRNAs作為一類新型基因調(diào)控劑，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。越來越多的資料表明miRNAs在多種腫瘤中存在異常，其通過調(diào)控下游靶基因，影響腫瘤細胞的增殖、凋亡、浸潤、轉(zhuǎn)移以及血管生成等生物學特性，發(fā)揮癌基因或抑制癌基因的作用，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移。

A miR-218在不同分期肝癌患者的表達情況.B miR-218在肝癌患者轉(zhuǎn)移狀況的表達情況.C miR-218在肝癌患者復發(fā)狀況的表達情況.

圖3 miR-218的低表達與肝癌患者預后關(guān)系

本研究利用qRT-PCR方法檢測了112例肝癌組織中miR-218的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與癌旁正常組織相比，miR-218在肝癌患者中表達明顯降低；同時發(fā)現(xiàn)，miR-218在肝癌的表達隨著肝癌分期的增加而逐漸降低，其中肝癌三期降低最大，提示miR-218低表達可能與肝癌的分期有關(guān)；此外，研究還提示miR-218的低表達與肝癌轉(zhuǎn)移和復發(fā)之間具有密切關(guān)系；miR-218表達越低，肝癌患者的預后越差。已有的研究也表明miR-218在非小細胞肺癌、腎透明細胞癌和大腸癌表達降低，并且miR-218表達的降低可能在非小細胞肺癌和腎透明細胞癌和轉(zhuǎn)移和復發(fā)有關(guān)[4-6]；但是也有研究表明miR-218在上皮性卵巢癌中表達升高，并且miR-218的高表達與上皮性卵巢癌的分期和進展密切相關(guān)[7]，這可能與miR-218在不同癌組織中具有差異表達有關(guān)。

總之，我們的結(jié)果顯示miR-218在肝癌中低表達，并與肝癌的轉(zhuǎn)移復發(fā)和預后密切相關(guān)。但是本研究僅僅選擇了112例肝癌患者標本，標本量不夠大，檢測結(jié)果可能不能完全反應(yīng)miR-218與肝癌轉(zhuǎn)移復發(fā)的相關(guān)性，另外有關(guān)miR-218參與肝癌的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移復發(fā)的機制尚需要進一步研究。