兩種免疫分析儀測定血清甲胎蛋白的比對分析

葉夢霞 李揚宇 秦雪君

甲胎蛋白是含有一條多肽鏈的糖蛋白，主要在胎兒的肝臟和卵黃囊中產(chǎn)生并分布在其他器官中。受孕約30天，在胎兒的血循環(huán)中可檢測到甲胎蛋白，隨后分泌到胎兒血清中，妊娠第13周時達到峰值，之后逐漸降低直到胎兒出生。在良性肝臟疾病中，血清甲胎蛋白常有一過性增高。甲胎蛋白是肝細胞癌的一種腫瘤標志物，具有較高的敏感性和特異性，廣泛應用于臨床的篩查，早期診斷和治療[1]。因此，為了滿足日常工作的需要，本科在原來l臺Beckman Coulter Access DXI800的基礎上又添置了1臺Abbott I4000（均為酶促化學發(fā)光）。為了確保結(jié)果的可靠性和可比性，比較兩種儀器的結(jié)果，以避免由于結(jié)果之間的差異過大而導致臨床診斷錯誤。

1 資料與方法

1.1 一般資料

樣本：本研究經(jīng)患者同意，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，連續(xù)5日（2019年3月4—8日），每日收集8例患者的新鮮血清標本（無溶血、脂血、黃疸），包括低、中、高值，覆蓋分析方法的線性范圍，并根據(jù)項目規(guī)范的要求進行保存。

1.2 儀器與試劑

Beckman Coulter Access DXI800和Abbott I4000化學發(fā)光免疫檢測儀。兩種儀器都使用制造商提供的試劑和校準品。

1.3 方法

1.3.1 實驗原理 兩種儀器的檢測原理都是雙抗體夾心法。

1.3.2 方法選擇、質(zhì)量控制和標本測定 Beckman Coulter Access DXI800化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)參加了全國室間質(zhì)評，成績優(yōu)秀，所以用作參比方法（X），Abbott I4000化學發(fā)光測定為待評方法（Y），實驗前對儀器常規(guī)維護保養(yǎng)并做質(zhì)控，確保質(zhì)控在控后測定樣本，連續(xù)5日，每日在兩臺儀器測定符合要求的8份患者新鮮血清，收集得40組數(shù)據(jù)。

1.4 觀察指標

統(tǒng)計所得甲胎蛋白數(shù)據(jù)，首先篩查離群值，之后進行精密度比較，再計算出線性回歸方程，觀察結(jié)果是否具有統(tǒng)計學意義，最后進行偏倚評估兩臺儀器檢測結(jié)果是否具有統(tǒng)計學意義。

1.5 統(tǒng)計學處理

1.5.1 離群點檢查 同時超過相對偏差和絕對偏差平均值的4倍，判斷為離群點。

表1 兩臺儀器檢測甲胎蛋白的精密度比較（ng/mL）

表2 兩臺儀器檢測結(jié)果的偏倚評估

1.5.2 相關性分析 計算數(shù)據(jù)得到回歸方程及相關系數(shù)R2。如R2≥0.95，可以認為X的取值范圍合適，線性回歸統(tǒng)計的斜率和截距是可靠的，兩種儀器的結(jié)果具有良好相關性。

1.5.3 偏倚評估 目前，臨床上常以甲胎蛋白20 ng/mL和400 ng/mL作為臨床診斷的臨界值[2]，選擇這兩點與所使用儀器線性范圍所達到的水平代入回歸方程，以計算待評方法（Y）和參比方法（X）之間的標準誤（SE）和相對偏倚（SE%）。SE= lYc-Xcl，SE%=（SE /Xc）×100%。本實驗甲胎蛋白的允許總誤差（TEa）為25%，SE%＜1/2TEa為臨床可接受標準。

1.5.4 統(tǒng)計學軟件 使用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進處理和分析。

2 結(jié)果

2.1 離群值篩查

經(jīng)數(shù)據(jù)分析，2種檢測系統(tǒng)無離群值。如圖1。

2.2 精密度比較

兩種儀器的CV值均小于8.33%的日間CV允許范圍。測得兩個水平質(zhì)控的均值（），變異系數(shù)（CV），標準差（SD）,見表1。

2.3 線性回歸

兩種儀器的線性回歸方程及相關性分析如圖1所示。相關系數(shù)R2=0.998 5＞0.95，截距a=0.097 7，斜率b=1.125 1，回歸方程Y= 1.125 1X +0.097 7表明回歸統(tǒng)計的斜率和截距是可靠的。兩臺儀器測定甲胎蛋白的檢測結(jié)果有顯著的相關性，可用于評估兩臺儀器測定甲胎蛋白的偏倚。

2.4 結(jié)果偏倚評估

甲胎蛋白醫(yī)學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，在Abbott I4000上測定的結(jié)果以Beckman測定為參比方法的SE%，均＜1/2TEa。見表2。

3 討論

甲胎蛋白是臨床上使用最廣泛的肝細胞癌標志物[3]，是一種血清糖蛋白，作為腫瘤相關蛋白，其對肝細胞癌的陽性診斷率約為70%。李峰等[4]也提出肝癌是腫瘤的進展性結(jié)果，如果在癌癥早期得到充分的重視，對改善患者的預后具有重要的指導意義。血清甲胎蛋白水平可用于評估經(jīng)導管動脈化療栓塞聯(lián)合射頻消融術(shù)后原發(fā)性肝癌患者的預后[5]。近年來，隨著醫(yī)學檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，以及對腫瘤標志物臨床意義的深入研究，再加上國民健康意識的普遍提高，甲胎蛋白已逐漸成為體檢的常規(guī)項目，為滿足工作需要，本科有Beckman C o u l t e r A c c e s s D X I 8 0 0 與Abbott I4000兩臺化學發(fā)光免疫測定系統(tǒng)，因甲胎蛋白醫(yī)學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，如果兩種儀器同時報告結(jié)果，在這兩個水平的偏倚過大，將會對臨床的診斷和治療帶來干擾。醫(yī)學檢驗結(jié)果的相互認可是醫(yī)學檢驗發(fā)展的需要，報告相互認可的基礎是不同檢驗系統(tǒng)中相同檢驗項目的結(jié)果是否具有可比性[6]，所以筆者對兩臺儀器檢測甲胎蛋白做了比對實驗。當比對結(jié)果超過規(guī)定偏倚時，應分析原因并糾正，以減少不同儀器之間的結(jié)果差異，以便正確報告。

本科兩臺儀器測定甲胎蛋白的兩個水平質(zhì)控日間及總CV均＜8.33%，表明兩組儀器檢測結(jié)果可靠，精密度高。在保證檢測系統(tǒng)精度和準確性的前提下，建立了各種檢測系統(tǒng)的標準化長期比較機制，用于實現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)之間測量結(jié)果的一致性和可比性具有重要的意義[7]。本實驗選擇的甲胎蛋白AFP（alpha-fetoprotein）水平在20 ～ 400ng/mL，在該范圍內(nèi)檢測甲胎蛋白異質(zhì)體L3（alpha-fetoprotein L3）AFP L3，測得的結(jié)果基本上能反映早期原發(fā)性肝癌和非腫瘤性肝病的AFP L3水平狀況[8]。因此，今后可在此基礎上擴展實驗，深入研究甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體L3（AFP L3）和高爾基體跨膜糖蛋白73（golgin 73）對診斷原發(fā)性肝癌的意義[9-10]。作為原發(fā)性肝癌診斷的新型腫瘤標志物，甲胎蛋白異質(zhì)體L3可有效彌補單獨檢測甲胎蛋白的不足，并且結(jié)合臨床影像學和病理學診斷方法，可以有效提高診斷原發(fā)性肝癌的準確性[11]。它還可以擴展到研究慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）肝硬化患者的外周血甲胎蛋白（AFP）、丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2）、白蛋白（albumin）mRNA表達及其臨床意義[12]。

圖1 兩臺儀器測定結(jié)果均值散點圖

綜上所述，此次實驗結(jié)果顯示：此實驗使用的儀器檢測甲胎蛋白的結(jié)果無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），并且存在良好的相關性（R2＞0.95 ）。甲胎蛋白的允許總誤差（allowable total error）TEa為25%，以臨床可接受的SE%＜1/2TEa為標準，而甲胎蛋白醫(yī)學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，在這兩個取值范圍附近的比對結(jié)果未出現(xiàn)較大偏差，均符合SE%＜1/2TEa的標準。因此，實驗結(jié)果顯示兩種儀器的檢測結(jié)果具有可比性，系統(tǒng)偏差在可接受的范圍內(nèi)，并且可以同時報告而不影響患者病情的臨床判斷。為患者提供診斷依據(jù)，并節(jié)省因為不確定病情而導致浪費治療時間，值得推廣及應用[13]。