厄洛替尼對大鼠小腸上皮細胞跨膜轉運的影響

劉治芳，朱艷妮

（長沙醫學院，湖南長沙 410219）

厄洛替尼又稱特羅凱，適用于兩個或兩個以上化療方案失敗的局部晚期或轉移的非小細胞肺癌的三線治療，是一種選擇性EGFR-TKI（表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑），通過阻斷非小細胞肺癌細胞生存、增殖中的某些信號轉導通路而發揮作用[1]。但是，厄洛替尼在臨床應用中常引發皮疹、腹瀉等毒副反應，導致患者營養吸收障礙，甚至出現胃腸道出血。因此，本文旨在探討厄洛替尼對大鼠小腸上皮細胞跨膜轉運的影響，通過多次灌胃給予大鼠厄洛替尼，觀測大鼠體重及攝食量的變化，并建立在體腸循環及藥動學模型，考察厄洛替尼對合用藥物吸收的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SD大鼠12只，體重（200±20）g，雌雄各半，由長沙市天勤生物技術有限公司提供。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國，安捷倫公司）；熒光分光光度檢測器（日本島津RF-5301PC）；冷凍離心機（長沙英泰）；超純水機；pH計。

厄洛替尼原料藥（南京安格醫藥化工有限公司）；熒光素鈉（北京索萊寶科技有限公司）；頭孢克洛對照品（中檢所）；頭孢克洛膠囊（上海健坤）；β-羥乙基茶堿對照品（東京株式）。

1.3 方法

1.3.1 厄洛替尼對熒光素鈉大鼠在體腸循環的影響

對12只SD大鼠進行隨機分組，對照組和給藥組均為每組6只（雌雄各半）。每天灌胃給予給藥組大鼠30mg/（kg·d）厄洛替尼混懸液，給予對照組大鼠同體積生理鹽水，每天1次，連續灌胃7天，并每天記錄大鼠的體重與攝食量的變化。

第8天，將大鼠禁食12h進行在體腸循環試驗。每只大鼠采用腹腔注射烏拉坦溶液麻醉后固定，沿大鼠腹部中線打開腹腔（約3cm），在十二指腸上部至空腸下部（約20cm）各切一小口，插入循環管，先用注射器將37℃的生理鹽水（150 mL）緩緩注入腸管，洗凈腸管內容物，再注入空氣排凈生理鹽水，將循環管接通蠕動泵，形成回路。

循環液為5μg/mL的熒光素鈉溶液20mL置于錐形瓶（恒溫37℃），先以5mL/min循環10min后，將流速調節為2.5mL/min，立即自供試液錐形瓶中取樣 100μL，并及時向錐形瓶中補加100μL空白K氏液（恒溫37℃），之后每隔30min按同法取樣及補加K氏液，共取樣9次，停止循環。

向各采血時間點樣品中加入2mL純水，采用熒光分光光度計測定熒光強度，設置發射波長515nm，激發波長490nm，根據標準曲線計算出熒光素鈉的濃度，進而得到熒光素鈉的各時間段吸收量Qt，公式為：

式中，Ct為各時間點熒光素鈉的濃度（μg/mL），Vt為各時間點熒光素鈉的體積（mL），l為腸段長度（cm），d為腸段直徑（cm）。

1.3.2 單次灌胃給予厄洛替尼對頭孢克洛藥動學的影響

對12只SD大鼠進行隨機分組，對照組和給藥組均為每組6只（雌雄各半），其中對照組給予單次灌胃生理鹽水和50mg/kg頭孢克洛水溶液，給藥組給予單次灌胃13.5mg/kg厄洛替尼混懸液和50mg/kg頭孢克洛水溶液。在給藥前和給藥后進行眼眶取血0.5 mL，采血時間點分別為0、10 min、20 min、30 min、45 min、1.0h、1.5h、2.0 h、3.0h、4.0 h、5.0 h、6.0 h。立即分離血漿，精密移取100μL血漿樣本于EP管中，加入適量冰醋酸以增加穩定性。

采用HPLC-UV法進行測定血漿中的頭孢克洛，以β-羥乙基茶堿為內標，每100μL血漿樣本加入20μLβ-羥乙基茶堿（5mg/L），渦旋混勻30 s，再加10%高氯酸甲醇溶液30μL，渦旋混勻3 min，12 000 r/min低溫離心10 min，精密吸取上清液進樣分析。

測試條件：C18柱（4.6×150 mm，5μm，Agilent公司，美國）；流動相：醋酸水溶液（pH3.2）∶甲醇=80∶20（v/v）；流速：1 mL/min；檢測波長：265nm；柱溫：30℃；進樣量：40μL。

2 結果與分析

2.1 厄洛替尼對大鼠體重及攝食量的影響

記錄對照組及給藥組大鼠的體重與攝食量的變化，并進行統計分析，差異結果表示為*p＜0.05，見圖1。

圖1 對照組及給藥組大鼠體重及攝食量的變化（n=6）

給予厄洛替尼后，與對照組相比大鼠的體重及攝食量均顯著降低，第7天給藥組和對照組的平均體重分別為（229.8±24.1）g和（252.0±30.2）g。給藥組大鼠的平均每天攝食量為（16.7±3.9）g，顯著低于對照組（25.1±5.6）g。

A對照組及給藥組大鼠體重的變化B對照組及給藥組大鼠攝食量的變化。

2.2 厄洛替尼對熒光素鈉大鼠在體腸循環的影響

通過公式計算得到Qt，進而將各時間點前所有時間段吸收量Qt累加，得到各時間點累積吸收量，結果見圖2，差異結果表示為*p＜0.05，可見厄洛替尼給藥組熒光素鈉的累計吸收量顯著高于對照組。熒光素鈉是細胞旁路轉運的標志物[2]，厄洛替尼可能主要通過增加小腸上皮細胞旁路通透性，從而增加熒光素鈉的透過率。

圖2 厄洛替尼對大鼠小腸吸收熒光素鈉的影響（n=6）

2.3 單次灌胃給予厄洛替尼對頭孢克洛藥動學的影響

通過HPLC-UV測定得到對照組與厄洛替尼給藥組大鼠體內頭孢克洛的血藥濃度，分別與時間作圖得平均藥時曲線見圖3。通過藥動學軟件WinNonlin計算對照組與給藥組頭孢克洛的參數，結果見表1。單次給予大鼠厄洛替尼后，頭孢克洛的t1/2、V、CL有降低的趨勢，而Tmax、Cmax、AUClast有增加的趨勢，Cmax、AUClas是反映吸收的重要藥動學參數，雖采用SPSS統計軟件進行分析，顯示兩組的差異無統計學意義，但加大厄洛替尼的給藥劑量有可能導致吸收顯著增加。

圖3 單次給予厄洛替尼對頭孢克洛在大鼠體內藥動學的影響（n=6）

表1 不同處理組頭孢克洛在大鼠體內的藥動學參數

3 結論

厄洛替尼可降低大鼠體重和攝食量，顯著增加熒光素鈉的透過率，使頭孢克洛的吸收有增加的趨勢，其機制可能是增加了小腸上皮細胞旁路通透性，因此在厄洛替尼與其他藥物合用過程中應注意藥物的相互作用。