HSPA13在ARPE19細胞氧化應激中的作用

李夢雯， 呂亞莉， 徐國彤， 呂立夏

(1. 同濟大學醫學院再生醫學系生物化學與分子生物學教研室，上海 200092; 2. 同濟大學附屬第十人民醫院眼科，上海 200072)

年齡相關性黃斑變性(age-related macular degeneration, AMD)，也稱老年性黃斑變性，是全世界老年人失明的主要原因之一[1]。視網膜色素上皮(retinal pigment epithelial, RPE)細胞的氧化損傷和慢性炎癥被認為是AMD的發展過程中重要的影響因素[2-3]。應激分子伴侶也稱為HSPA13，是熱休克蛋白家族的一員，由鈣離子誘導[4]。活性氧類(reactive oxygen species, ROS)導致細胞內鈣離子超載，引發細胞凋亡[5-6]。

細胞內鈣離子水平升高誘導HSPA13基因的表達上升，因此，本研究探討HSPA13在氧化應激誘導的人視網膜上皮ARPE19細胞中的表達情況，以及HSPA13的表達水平對氧化應激誘導的ARPE19細胞中相關氧化應激指標和促炎因子的影響；并在干擾HSPA13表達后進行RNA測序，對差異表達的基因進行基因本體(gene ontology, GO)分析及京都基因和基因組數據庫(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)信號通路分析，為進一步探索HSPA13在AMD中的作用機制提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

DME/F12培養基購自美國HyClone公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；鏈霉素及青霉素、CCK8試劑盒、丙二醛(malondialdehyd，MDA)試劑盒、還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)檢測試劑盒購自碧云天公司；3%H2O2購自美國Sigma公司；anti-HSPA13、anti-β-actin、二抗購自Proteintech公司；TNF-α、IL-8、IL-2和IL-1β ELISA試劑盒購自美國BD公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養 使用DME/F12基礎培養基，添加10%的胎牛血清和500μL的青霉素鏈霉素雙抗，在37℃、5%CO2的恒溫培養箱中培養人ARPE19細胞。

1.2.2 CCK8法測定細胞活力的改變 實驗前使用細胞培養基配制H2O2處理液，以2×104/mL的密度將ARPE19細胞接種在96孔板中，細胞貼壁后，分別添加含終濃度為10、25、50、100、200、300、400μmol/L H2O2的細胞培養基處理細胞，處理4h。……