胃癌組織中Podoplanin、血管內皮生長因子-C表達水平及臨床意義

唐 歡，奚維東，夏 敏，文 靜，王紹榮

(1.四川省彭州市人民醫院消化內科，四川 彭州 611930；2.成都市第三人民醫院消化內科，四川 成都 610036)

胃癌為臨床常見惡性腫瘤，發病早期癥狀不明顯，多與胃炎、胃潰瘍等慢性疾病類似，易被臨床診斷忽略，早期檢出率較低[1]?，F階段，多數胃癌確診患者處于中晚期，淋巴結轉移率較高，即使是早期患者淋巴結轉移率也在10%～15%，而淋巴結轉移不僅決定患者手術范圍，同時對預后也有一定影響[2]。有研究發現，腫瘤淋巴結轉移可能與淋巴管生成密切相關，而血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作為促血管生成因子，家族包含多種異構體，而VEGF-C作為該家族重要成員之一，主要通過與酪氨酸激酶受體調節血管生成；Podoplanin作為Ⅰ型跨膜蛋白在人體多種組織細胞中均有表達，但主要表達在淋巴管內皮，故對淋巴管內皮細胞特異性較強[3，4]。本文對胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平及臨床意義進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2015年5月至2018年5月四川省彭州市人民醫院及成都市第三人民醫院收治的127例胃癌患者。納入標準：①符合《NCCN胃癌臨床實踐指南》[5]中診斷及分期標準，且在我院實施胃癌手術治療；②術前均實施放療、化療等治療方案；③標本根據染色結果，均選擇具有典型癌組織代表性蠟塊進行免疫組化研究；④臨床病理及病例資料均完整；⑤經我院醫學倫理委員會批準該項研究。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并嚴重基礎性疾病、感染等；③妊娠期或哺乳期婦女；④無對應手術指征、存在手術禁忌證。取患者手術切除胃癌組織(127例)及距腫瘤5～10 mm處癌旁組織(50例)石蠟標本進行研究。

1.2 方法采用免疫組化法檢測全部標本中Podoplanin、VEGF-C水平，操作如下：組織切片常規脫蠟至水，其中Podoplanin于乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復液(pH 9.5)、VEGF-C于枸櫞酸組織抗原修復液(pH 6.5)中使用高陽加熱進行抗原修復(3 min)。修復結束后采用免疫組化三步法進行染色(所有染色操作嚴格參照試劑盒說明進行)→免疫組化顯色→蘇木精復染→中性樹脂封片→光鏡下觀察。本研究均用PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照則為已知陽性胃癌組織切片。所有試劑盒均購于北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3 觀察指標觀察Podoplanin、VEGF-C在胃癌及癌旁組織中表達情況及與病理參數(年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、分化程度、漿膜浸潤、淋巴結轉移)關系。Podoplanin采用微淋巴管密度(LVD)表示，LVD計數方式參照Weidner法[6]：1個淋巴管為棕黃色染色的單個內皮細胞或細胞簇，先在低倍鏡(40倍鏡)下觀察，再選擇高密度區在高倍鏡(200倍鏡)隨機選擇5個視野內淋巴管進行計數，記錄平均值。VEGF-C表達陽性率并由3名高年資主治醫師雙盲閱片，并協商一致后進行記錄。具體方法[5]：采集切片圖像，并在顯微鏡下觀察陽性區域(10倍鏡)及陽性細胞計數(40倍鏡)。陽性區域標準[6]：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性計數比例標準：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，50%以上為3分；總評分：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中陽性(++)，6分為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法采用SPSS 17.0統計學軟件處理數據。計量資料比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平比較胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平均高于癌旁正常組織(P< 0.05)，見表1。

表1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平比較

2.2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平與臨床病理參數關系不同年齡、性別、腫瘤大小的胃癌患者癌組織中Podoplanin表達水平差異無統計學意義(P> 0.05)，臨床分期高、分化程度低、存在漿膜浸潤及淋巴結轉移的患者Podoplanin表達水平較高(P< 0.05)。不同年齡、性別、腫瘤大小、分化程度的胃癌患者癌組織中VEGF-C表達陽性率差異無統計學意義(P> 0.05)，臨床分期高、存在漿膜浸潤及淋巴結轉移患者VEGF-C表達陽性率較高(P< 0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達水平與臨床病理參數關系

3 討論

胃癌是一類起源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，高發于50歲以上男性，且與患者飲食結構、工作壓力及幽門螺桿菌感染相關，隨著近年社會生活方式不斷轉變，使得胃癌呈年輕化趨勢[7]。目前，胃癌治療主要以手術治療為主，但術后仍存在較高復發和轉移率，而淋巴結轉移是胃癌手術治療失敗的主要原因之一，且影響胃癌患者預后。

Podoplanin蛋白作為淋巴管內皮標志物的跨膜唾液酸蛋白，主要表達部位為淋巴管內皮細胞，而在血管內皮上不表達，且在多種惡性腫瘤及瘤旁組織中均有表達，現已成為新型免疫組織化學標志物，與惡性腫瘤侵襲、遷移及轉移密切相關[8]。腫瘤細胞自身可分泌促進淋巴管生成的Podoplanin蛋白，對腫瘤性淋巴管生成具有一定促進作用，同時癌細胞可通過增多的淋巴管向外散播和轉移，進而促進腫瘤細胞沿淋巴結轉移。本文研究結果顯示，胃癌癌組織中Podoplanin表達水平明顯高于癌旁正常組織，其高表達可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤及淋巴結轉移有關，這與郭海等[9]研究類似，提示癌組織中淋巴管密度明顯高于正常組織，臨床可通過抑制或阻斷Podoplanin蛋白表達，降低新生淋巴管形成，進而抑制腫瘤細胞增殖、浸潤等。

VEGF是一種強大的內皮調控因子，主要誘導內皮細胞增殖，同時可促進腫瘤內外管脈生成，其在胃癌組織血管內皮細胞及淋巴管內皮細胞分裂和增殖過程中起著較為關鍵的作用。VEGF-C作為其中之一，是促進腫瘤淋巴管生成的重要因子之一，其可誘導淋巴內皮細胞增殖、遷移，并形成淋巴竇，同時與腫瘤轉移和侵襲密切相關。VEGF-C誘導腫瘤轉移及侵襲機制包括：誘導淋巴管生成促進腫瘤轉移；激活淋上皮細胞釋放腫瘤趨化因子，進而促進腫瘤浸潤生長及淋巴轉移；通過調節淋巴管收縮增加淋巴滲透范圍[10]。腫瘤組織中癌細胞可通過自分泌或旁分泌產生VEGF-C，使其作用與腫瘤周圍組織，進而刺激并誘導新生淋巴管的形成及擴張，對惡性腫瘤淋巴轉移有一定促進作用[11]。本研究結果顯示，胃癌癌組織中VEGF-C陽性率明顯高于癌旁正常組織，且VEGF-C陽性表達與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤及淋巴結轉移有關，這與修麗娟等[12]研究結果類似。

綜上所述，胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C均呈高表達狀態，兩者高表達均增加胃癌淋巴結轉移風險，其中Podoplanin高表達可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤情況有關，而VEGF-C高表達可能與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤有關。