食用菌栽培實驗教學中存在的問題與解決措施

李艷芳 張立偉 王相剛

摘要 ? ?本文對食用菌栽培課程實驗中的標本制作、顯微觀察、培養基容器密封及裝袋接菌種過程中存在的問題進行了闡述，并給出了相應的解決措施，以提升實驗教學效果。

關鍵詞 ? ?食用菌栽培;實驗教學;問題;措施

中圖分類號 ? ?G642 ? ? ? ? 文獻標識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2019）18-0238-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

Abstract ? ?The problems in specimen making，microscopic observation，medium container sealing and bagging for the cultivation of edible fungi were expounded in this paper.The corresponding solutions were given to improve the experimental teaching effect.

Key words ? ?edible fungi cultivation;experimental teaching;problem;solution

隨著食用菌產業的迅猛發展，產業對人才的需求量大增，高層次、復合型食用菌人才愈加緊缺。因此，國內很多涉農專業或微生物相關專業相繼開設了食用菌栽培技術等相關課程。由于食用菌栽培技術課程實踐性強的特點，課程的開設往往是理論與實驗一體化教學[1]。各院校在教學過程中也探索了各種教學方法[2-3]和教學模式[4]，并對教學實踐中存在的問題進行了分析[5]，但對實驗教學中有關實驗操作的問題討論較少。筆者在教學實踐中尤其在實驗課程教學中發現了一些操作問題。這些問題雖不大，卻阻礙了實驗教學的順利進行。本文對此類問題進行了歸類并采取了解決措施，對實驗的順利進行起到了很好的輔助作用，取得了良好效果。

1 ? ?標本制作

1.1 ? ?存在的問題

由于食用菌是大型真菌，屬于微生物學的分支學科，食用菌課程現有的實驗教材及參考資料中有關菌體觀察、菌種分離純化等操作均參考微生物學中成熟的方法。如在食用菌菌絲及有害雜菌的顯微觀察實驗中，多采用微生物學實驗中的水浸片法、插片法及簡易制片法等。水浸片法是挑取菌落邊緣的菌絲體，小心放在載玻片上再加蓋蓋玻片，然后進行光學顯微觀察。由于菌絲纖細脆弱的特性，在挑取過程中易破壞菌絲自然生長狀態，使菌絲變形甚至扭結斷裂，導致觀察效果很差。插片法在制片過程中易感染其他有害雜菌，導致培養失敗。簡易制片法使挑取的菌絲分散開，同樣會破壞菌絲的自然生長狀態。

1.2 ? ?解決措施

利用培養皿（直徑90 mm或120 mm）培養菌絲體，在向培養皿內注入培養基時較正常量減少至1/3或1/2，使培養基在培養皿底形成薄層即可。接種待培養菌種時，待菌落長至培養皿直徑的1/2時取出，去掉培養皿蓋，直接放置在顯微鏡下，不必加蓋蓋玻片，因利用低倍鏡觀察時物鏡完全觸碰不到菌絲體表面，可觀察菌絲自然生長狀態，如觀察時其他物鏡有影響則可卸掉。也可將培養皿上的菌絲體用刀劃成所需的塊狀，小心移至載玻片上進行染色觀察。此種方法不適用于油鏡觀察，只適用于物鏡接觸不到菌絲體表面的顯微觀察。在食用菌生產中，雜菌的觀察與鑒定采用此種方法，效果很理想，都能呈現完整的、自然的菌體形態結構特征。

2 ? ?培養基容器密封

2.1 ? ?存在的問題

在食用菌實驗中經常會涉及培養皿及試管的使用，將固體培養基倒入培養皿或試管內，封口滅菌后接入菌種，并將培養皿或試管密封后放置在所需環境下培養。密封培養皿一方面保證無其他雜菌進入培養皿內引起感染，另一方面防止培養基中水分蒸發流失，影響菌物培養效果。一般密封培養皿的方法是利用培養皿密封條進行密封，在實際實驗中所用密封條數量較多，價格也較貴。另外，在食用菌實驗課中裝培養基試管封口一般采用棉花塞，優點是廉價、方便，缺點是試管內培養基水分通過棉塞蒸發過快，使培養基干縮，致使試管菌保存時間不長，低溫環境下只有2～3個月。

2.2 ? ?解決措施

經實驗發現，利用保鮮膜作為培養皿密封完全能達到課程實驗需求。具體用法：將筒形保鮮膜橫截成3～5 cm寬（可根據培養皿直徑調整），待培養皿接入菌物完畢蓋上培養皿蓋，一手托起培養皿并保持平放時狀態（防止待接菌塊因重力滑落，脫離接菌點），另一手用保鮮膜將培養皿蓋與底環繞密封，環繞時稍用力，利用保鮮膜的粘附性使其粘附在培養皿體上，并可根據培養皿直徑確定纏繞圈數。經此密封的培養皿完全適宜菌類培養物的培養需求，選擇保鮮膜時注意選擇韌性和粘附性較好的產品，該法同樣適用于其他需要培養皿密封培養的場合。利用棉塞封口培養試管菌種時，也可將試管口和棉塞部分利用保鮮膜纏繞，可有效延緩因水分透過棉塞蒸發而使培養基干枯，延長試管菌種的保藏期至3～6個月。由于保鮮膜廉價、易購、使用方便，因而應用廣泛。

3 ? ?標本顯微觀察

3.1 ? ?存在的問題

在食用菌實驗課程中需要進行食用菌菌絲、孢子的形態和結構顯微觀察，影響食用菌生長的雜菌以及病蟲害鑒定時也需要進行顯微結構觀察，觀察設備以光學顯微鏡為主。由于觀察的樣本數量較多，需要不停用眼，長時間集中觀察致使眼睛疲勞，而且普通光學顯微鏡觀察到的圖像無法進行保存。

3.2 ? ?解決措施

經過查閱資料，網購電子目鏡數碼產品，直接代替顯微鏡目鏡。其工作過程是在顯微鏡目鏡筒上安裝電子目鏡，調整物鏡將顯微鏡下的圖像通過USB數據線傳輸到電腦，觀察者通過電腦顯示器進行標本觀察。不僅能夠減輕眼疲勞，并且可以通過該類產品提供的軟件對標本進行拍照、攝像等功能，還可以對照片進行編輯，例如對照片中的特定目標進行測量、標注等。同時，可以實現多人同時通過計算機顯示器觀察，單位時間內可觀察的標本數量更多，更可對觀察到的照片及某些目標的動態等進行永久保存。此類數碼產品使用便捷，相當于將普通光學顯微鏡升級成為簡易數碼顯微鏡，唯一缺點是觀察時需連接計算機。此類數碼產品完全能滿足教學與精度不高的科研需求，具有小巧、經濟、實用等優點，可拓展至任何適宜光學顯微鏡觀察的實驗操作中。如對放大倍數要求不高且需外出時使用也可購買手機版微型顯微鏡，安裝于手機攝像頭位置，在手機上即可觀察目標物體的微觀狀態。

4 ? ?裝袋接菌種

4.1 ? ?存在的問題

在食用菌栽培實驗中，由于受教學場地、原材料等條件限制，經常會用到比實際生產中直徑小且短的各種規格小菌袋，在進行裝袋操作時無法利用裝袋機進行機器裝袋（或受場地限制無法購買裝袋機），只能進行手工裝袋。許多食用菌相關的科研實驗為了精準稱量也會進行手工裝袋操作。由于菌袋直徑小，導致手工填裝培養料操作費時費力，很不方便。

在超凈工作臺轉接試管菌種是實驗中最常見的操作，接種過程中菌種試管口需傾斜放置使試管口朝向酒精燈火焰方向，以保持母種試管口呈無菌狀態，避免試管菌感染。實驗室鐵架臺配加試管夾可滿足需求，但每次操作需擰動螺絲且鐵架臺占據空間大，移動和轉換過程中有諸多不便。

4.2 ? ?解決措施

用改裝的礦泉水瓶可解決以上問題。具體做法：將空礦泉水瓶（塑料材質，500 mL，帶蓋）瓶底剪除，使瓶身呈漏斗型，再將漏斗剪成一側比另一側低的形狀。加蓋瓶蓋后便成為一個簡單方便又經濟實用的裝料小工具，比購買的勺鏟等工具更適合裝料入菌袋。

利用空礦泉水瓶還可實現對試管菌種的固定操作。具體方法：用塑料袋裝細沙扎緊并裝入空的礦泉水瓶內（裝沙容量為瓶容積的1/2），以便使瓶身站立時更穩定，在瓶身上方對向兩側用常用規格的空試管燙孔，燙孔時將試管底部在酒精燈火焰上加熱，用灼熱的試管底將礦泉水瓶身上部對側方向上燙出孔洞（燙孔前選好試管傾斜的角度），以適宜試管傾斜穿過瓶身，即可實現對試管的固定，并可隨意進行試管朝向轉動、穿入方向上移動等操作。使用時將母種試管穿入孔洞中，使試管口朝向酒精燈火焰方向即可。一般實驗中使用的試管規格是固定的，能長期使用，也可在瓶身不同高度上穿孔使一個瓶體滿足不同規格試管的使用需求。

5 ? ?結語

根據教學實踐，總結出幾種簡單實用方法，在食用菌栽培課程的應用中，有些方法中材料的選用或就地取材或物美價廉，滿足了實驗的需要，反饋結果好。在實驗中既減輕了學生的負擔，又加快了實驗進度，使實驗順利進行。在實際應用中學生們也體會到一些看似不起眼的方法，往往能達到事半功倍的效果，直接激發學生勤思考，用簡單易行的方法達到理想的實驗目標。今后在實踐教學中還將繼續深入探索，為實驗和科研做好基礎工作。

6 ? ?參考文獻

[1] 羅青.以實驗為主線的食用菌栽培學教學改革[J].河南農業，2014（24）：21.

[2] 李好，張顏，張顯.食用菌栽培學教學改革的探索與實踐[J].教育教學論壇，2017（12）：157-158.

[3] 范可章，王魏根，姜雙林，等.提高食用菌栽培學課程教學質量的研究與探討[J].阜陽師范學院學報（自然科學版），2013，30（1）：96-98.

[4] 劉俊華，陸玉建，王宏國，等.食用菌栽培課程實踐育人教學探索[J].教育教學論壇，2018（26）：162-163.

[5] 杜愛玲，吳祖峰.食用菌栽培課程實踐教學存在的問題及教學方法探索[J].華中農業大學學報（社會科學版），2005（增刊1）：200-201.