牛骨骼標本制作新技術

符宏銀 蔣松健 譚燕梅 李堅仲 寧振旭 凌丁

(廣西農業職業技術學院,南寧 530007)

雖然不同種類動物因為存在外部形態、骨骼形態及骨骼硬度等許多不同而要求其骨骼標本制作需要采取不同的方法,但牛等大型動物骨骼標本的傳統制作工序比較固定,一般主要包括致死、分離軟組織、脫脂、漂白、干燥、組裝、上漆、保存等步驟,制作過程大約需要30d左右,其中軟組織分離、脫脂、漂白等環節耗時最多,同時還使用大量有害物質。為了解決牛骨骼標本制作存在的時間過長、使用有害物質較多等問題,本課題組改進了牛骨骼標本的制作方法,現報告如下：

1 物品準備

屠宰刀具、電熱水鍋、電熱恒溫干燥箱、塑料貯物箱、解剖盤、檢疫刀、手術刀、手術剪、鑷子、細棉繩、細網袋、刷子、骨鋸、細竹枝、電鉆、鉗子、鐵絲(線)、螺絲刀、膠水、注射器、洗衣粉、工業用雙氧水、固體氫氧化鈉、清漆等[1]。

2 牛只選擇

選擇身體健康、骨骼健壯的成年牛(黃牛、水牛不限,公母均可)。

3 方法步驟

制做散骨標本前,應先熟悉牛的骨骼位置和形態,制定工作方案、計劃,以避免在制作過程中受到不必要的損失。

3.1 處死牛只

用大錘打擊牛枕部,將牛敲昏;切開頸動脈、靜脈放血,收集牛的血液。

3.2 清潔牛體

用清水沖洗牛身體表皮膚上以及地板上殘留的污物和血漬,保持牛體清潔。

3.3 剝離牛皮

調整牛體肢勢,用磚頭、木頭等物品墊支牛背側,仰臥固定牛體。在腕關節、跗關節處,分別切斷腕骨與前臂骨、跗骨與小腿骨之間的聯系,分離前肢蹄部和后肢蹄部。自下頜起沿腹部正中線切開皮膚,至臍部后將切線分為兩條,繞開生殖器,最后在尾根會合,再沿四肢內側的正中線切開皮膚,到腕關節和跗關節處;再繞著口腔切開上下頜粘膜。按照腹剖、背部、前肢、后肢、頭部、尾部順序逐一剝離牛皮。

3.4 分離內臟

剝皮完成后,在下頜間隙分離牛舌、咽喉;在頸部分離食道、氣管等;沿胸骨與肋軟骨連接處切開左右兩邊的肋軟骨,取下胸骨;沿腹部正中線切開腹腔體壁,切斷膈肌與體壁聯系;拉住牛舌、氣管、食管往后扯,逐步分離肺、膈肌以及腹部內臟與軀體的聯系,取出全部內臟,另作進一步處理;用清水將體腔沖洗干凈。

3.5 剔除肌肉

分離前肢、頭、頸、胸、腰、后肢、骨盆、尾等各部位的聯系。按照先剔大塊肌肉后剔小塊肌肉的原則,逐一剔除附著在各部位骨骼上的肌肉等軟組織,同時分離舌骨周圍組織,取到舌骨。在剔除肋骨、肋軟骨上肌肉時,要從背部肋骨上端向肋軟骨方向下端剝離,剔到肋軟骨時要小心,避免割斷軟骨求[2]。

3.6 拆分骨骼

分離肋骨與胸椎聯系,為便于后期進行骨骼組裝,用細棉繩按照肋骨排列順序一一綁住固定肋骨。用細棉繩穿過椎管,分別綁住固定頸椎、胸椎、腰椎,確保各部分的椎骨排列順序不亂,以利后期的骨骼組裝,當然要注意細棉繩不能綁得過緊。分離肩胛骨與臂骨的聯系;分離臂骨與前臂骨的聯系;分離髖骨與薦骨的聯系;分離股骨與髂骨的聯系;分離股骨與小腿骨的聯系。用火槍噴燒四肢蹄部及牛角,再用大刀刀背敲打脫離蹄匣、牛角外殼。

3.7 清除軟組織

為了避免骨骼丟失及后期組裝骨骼,分別對腳骨及頭、軀體骨等進行處理。

3.7.1 腳骨除筋肉 將卸下的前腳和后腳放入高壓蒸汽鍋內達到壓力狀態后維持10min,自然冷卻后,取出剝離皮膚、筋膜及肌腱,反復2～3次,直至蹄骨上的筋膜及其它軟組織被全部清除干凈為止。注意：每次水煮之前要將每個牛腳(腕骨、掌骨和指骨)和(跗骨、跖骨和指骨)骨骼分別用細網袋存放,并做好標記,以利各個蹄部骨骼的重新拼裝。

3.7.2 軟骨、扁骨、牛尾等骨骼除筋肉 將骨骼大鍋進行水煮(對于牛尾部等有小骨骼的部分要用細網袋另外包裝),大火燒開水小火煮15～20min后,逐一取出并剔除骨骼上的筋腱和軟組織,如此反復2～3次,直至將骨骼上的筋膜及其它軟組織全部清除干凈為止。分離后的尾骨等用細棉繩按照自然順序綁串在一起。

3.7.3 大快、厚實骨骼剔除筋肉 對于頭骨、椎骨、

骨盆骨、四肢骨骼等大快、厚實骨骼,先將骨骼大鍋進行水煮15～20min后,逐一取出并剔除骨骼上的筋腱和軟組織(牛腦可先用細竹枝攪碎后再用高壓水沖出),如此反復2～3次。對于有強壯筋健的骨骼,要將其浸泡在65～85℃水12h左右,再取出仔細剔除附著在骨骼上的筋腱,直至將骨骼上的筋膜及其它軟組織全部清除干凈為止。

3.7.4 骨骼脫脂 用骨鋸分別在各大塊骨骼上開一個1cm2小洞口,用細竹枝插入骨髓腔攪爛骨髓并配合高壓水流沖洗清除大部分的骨髓;將所有骨髓放入0.5%～1.0%的燒堿溶液中浸泡4h左右,取出用大量清水沖洗,用洗衣粉水反復搓洗,再用清水沖洗干凈,如此反復3～4次(浸泡次數及燒堿溶液濃度視骨骼大小、厚薄不同而有所增減),直至將骨骼中的油脂清除干凈為止。

3.8 骨骼漂白

將脫脂后的骨骼攤放在太陽之下暴曬2d,讓骨骼中的水分盡量揮發掉。將干燥后的骨骼放入4%的過氧化氫浸泡24h后,取出并用洗衣粉水反復搓洗后用清水沖洗干凈;再將骨骼攤放在太陽之下暴曬2d,再次將干燥后的骨骼放入4%的過氧化氫浸泡24h后,取出并用洗衣粉水反復搓洗后用清水沖洗干凈;將沖洗干凈的骨骼攤放在通風處進行涼干,最后將的骨骼放入40℃的電熱恒溫干燥箱烘干12h。

3.9 骨骼組裝

參照牛體的自然結構,在骨鉆、鐵鉗等工具的幫助下,使用鐵線、銅線、螺絲釘以及膠水分別將牙齒、下頜骨、頸椎、胸椎、腰椎、尾椎胸骨、肋骨及肋骨弓、四肢骨上部骨、四肢蹄骨和骨盆等逐一進行組裝。

3.10 骨骼保存

將拼接固定好的骨骼刷上清漆,待清漆完全晾干后,在各骨骼顯眼位置貼上標簽,注明骨骼名稱;將骨骼分類分別放置在塑料標本盒、玻璃盒內并放入標本室進行保存[3]。

4 體會

傳統的骨骼標本制作方法,只是強調在骨骼特別是厚重骨骼上鉆洞以利脫脂,所耗費時間過長。本次標本制作,創新性地用骨鋸在厚重骨骼上鋸開1cm2左右的方洞,用機械方法取出骨髓,取得了很好的效果。小方洞的切割,不僅讓燒堿溶液充分浸泡骨髓腔,大大縮短了脫脂時間,而且還非常有利于實訓教學中學生對骨骼特別是長骨結構的認知,可謂是一招多用。

傳統骨骼標本制作使用的腐蝕劑多數是燒堿,本次骨骼標本制作仍然燒堿只是在使用量上做了調整。在對1%燒堿濃度使用的預試驗中,出現用小部分蹄骨(如腕骨、跗骨)浸泡12h后被腐蝕、溶解的現象,這應該是燒堿濃度偏高及先放骨骼后放燒堿導致燒堿溶液濃度不均勻、局部濃度過高且浸泡時間過長造成的,后來將燒堿濃度降低為0.5%并先稀釋均勻燒堿溶液再放入骨骼且適當縮短浸泡時間就沒出現骨骼損壞的現象,說明局部高濃度燒堿可以嚴重腐蝕骨骼,制作骨骼標本時一定要選擇的燒堿濃度并均勻地溶解好后才能放入骨骼,同時還要根據骨骼的大小,選擇合適的浸泡時間。

傳統骨骼標本制作過程中需要用脫脂劑是二甲苯、汽油、燒堿,前兩種物質因具有易燃或有致癌可能,后一種具有腐蝕性。為了減少這些有害物質的用量,提高標本制作安全性,本次骨骼標本制作不用二甲苯、汽油,只用少量燒堿,同時在漂洗過程中多次使用洗衣粉替代常規的脫脂劑,取得了很好的效果,大大減少了傳統脫脂劑的用量。洗衣粉是含有一定量的純堿、三聚磷酸鈉及表面活性劑,如烷基苯磺酸鈉、烷基磺酸鈉、脂肪醇硫酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚、環氧乙烷和環氧丙烷的共聚物等多種化學成分組成的,其中純堿能將脂肪污垢皂化而將污垢除去,三聚磷酸鈉還對微細的脂肪微滴具有分散、乳化、膠溶作用,從而提高去油污能夠力,各種化學物質相互促進,相互彌補,從而達到去油脂的效果。而且洗衣粉隨用隨取,使用方便,學生使用安全,但成本比燒堿高。因此,骨骼標本制作過程中可用洗衣粉取代脫脂劑二甲苯、汽油。

漂白也是在骨骼標本制作過程中的一個環節,常用藥品是過氧化氫,其濃度的選擇,要根據動物骨骼的大小,氣溫的高低,骨骼的堅硬度及浸泡的時間進行考慮,最好是做預試驗,制作過程中要經常觀察骨骼的發白程度如發現有嚴重的氧化現象要及時將骨骼取出進行沖洗。

保存護理也是制作散骨標本的重要環節,用專門的標本塑料箱保存,各部分骨骼名稱要貼上牢固的標簽,以防丟失,更方便學生學習。保存時箱內放入干燥劑,箱外可以大量使用天然的樟腦丸和精苯丸作為驅避劑,而且要定期更換。

傳統的骨骼標本制作需要幾十天時間,而本次骨骼標本制作因改進了方法,讓制作時間縮短15d左右,整個過程用時不超過傳統制作的一半,對其他動物骨骼標本的制作應該有很好的借鑒意義。