馬齒莧內生菌橘青霉和波蘭青霉中抗青枯菌的活性物質

張倩, 黎平, 何子康, 顏健

馬齒莧內生菌橘青霉和波蘭青霉中抗青枯菌的活性物質

張倩, 黎平, 何子康, 顏健*

(華南農業大學資源環境學院，農業農村部華南熱帶農業環境重點實驗室，廣州 510510)

為了挖掘農作物病害生物防治新資源，以藥用植物馬齒莧()為材料，通過培養基種植法分離和純化其根、莖、葉中的內生菌，以青枯菌()的抑菌試驗評價其活性，采用菌落形態觀察和ITS序列分析鑒定菌種。結果表明，從馬齒莧篩選出2種具有抑制青枯菌的內生菌橘青霉()和波蘭青霉()，采用液相與四極桿飛行時間串聯質譜(UPLC-QTOF-MS)鑒定2種內生菌的主要活性物質為橘霉素，其對青枯菌的抑制效果比鏈霉素更好。因此，這為植物青枯病的生物防治提供科學依據。

馬齒莧；橘青霉；波蘭青霉；橘霉素；青枯菌

青枯病是一種由青枯菌()引起的毀滅性土傳病害，發病植物莖葉萎蔫下垂直至全部枯死，是世界上危害最大、分布最廣、造成損失最嚴重的植物病害之一，至今尚沒有有效的化學農藥和防治辦法, 因此青枯病被稱為植物的“癌癥”。植物青枯菌可侵染40多科200多種植物，僅次于農桿菌()，包括番茄()、馬鈴薯()、花生()、甘薯()、煙草()、辣椒()、茄子()、生姜()、草莓()、香蕉()以及一些貴重藥材和花卉植物，青枯病已成為許多農產品生產的重要限制因素，在世界各地均有分布。青枯病菌是一個復雜的群體，有明顯的生理分化，不同地區和不同寄主來源的菌株，在寄主范圍、致病力、生化型、血清型等細菌學特性上差異很大，因此增加了對此病害防治研究的難度[1]。

近幾年來，人們從不同角度對青枯菌進行了多方面的研究，目前預防和治療青枯病的方法和手段主要有農業防治、藥劑防治和生物防治。農業防治包括實行輪作、改良土壤、優化栽培方式、培育壯苗、噴施微肥；化學防治是指在作物生長過程中或種植前噴灑特定藥劑；生物防治包括無致病力青枯菌菌株的利用[2]、有益根際微生物的利用、有益真菌的利用、噬菌體的利用、生物農藥的生產利用、抗性植株的構建等。但由于抗病品種抗性低且抗性容易喪失，以及一些農業防治的手段會受地域條件的限制而且農產品的農藥殘留和劇毒農藥會直接對人類生存環境造成嚴重污染，危及人類和其他生物的安全，所以擁有可持續農業和可持續植保觀念的生物防治越來越受到人們的重視，其研究和開發成為目前防治青枯病的重點和熱點。

植物內生菌是指一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內部的真菌或細菌，普遍存在于高等植物中，木本、草本植物，單子葉植物和雙子葉植物內均有內生菌，目前已成為生物防治中有潛力的微生物農藥、增產菌或作為潛在的生防載體菌而加以利用。植物內生菌在國外廣受關注，始于禾本科(Gramineae)植物內生真菌以及林木內生真菌的特殊作用。產紫杉醇的紅豆杉()內生真菌被報道后，植物內生菌研究在生理活性物質領域開始暴發式的增加[3]。

馬齒莧()為馬齒莧屬一年生肉質草本植物，可做野生蔬菜食用，廣布全世界溫帶和熱帶地區。馬齒莧是常用的中草藥之一，據《本草綱目》記載，馬齒莧具有散血消腫、清熱解毒、止痢消炎等功效，有“天然抗生素”的說法。現代研究指出，馬齒莧還具有抑菌[4]、降血糖[5]、耐缺氧與防治病蟲害等生物學活性，這些功效與其含有多糖、生物堿、黃酮類、萜類、有機酸、多酚和蒽醌苷等生物活性成分有關[6-8]。幾乎每種植物都有內生菌，在自然選擇下會產生與宿主植物相同或相似的天然生理活性物質，如抗菌、抗病毒、抗癌、抗蟲、免疫抑制與抗氧化物質等次級代謝產物[9-13], 這些次級代謝產物大多具有重要的生物學作用，可廣泛用于醫藥、生物、農業與工業等領域，并越來越受到國內外研究者的關注[14]。本研究以藥食兩用植物馬齒莧為材料，發掘和篩選具有抑制青枯菌生長的內生菌，探明其作用的物質基礎，為農業的生物防治、綠色防治提供科學依據。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗材料 馬齒莧()采集于廣東省廣州市，青枯菌()由華南農業大學生態系蔡昆爭教授提供。

培養基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養基購買于廣東環凱微生物科技有限公司，每升含馬鈴薯300 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，氯霉素0.1 g。馬鈴薯葡萄糖水(PDB)購買于廣東環凱微生物科技有限公司，每升含馬鈴薯300 g，葡萄糖20 g。青枯雷爾氏菌培養基(CPG), 每升含胰蛋白胨10 g，葡萄糖10 g，酪蛋白水解物1 g (固體培養基硬膠另加18 g瓊脂粉，軟膠另加9 g瓊脂粉)。

設備 生化培養箱(上海一恒科學儀器有限公司)，ZHWY-103D恒溫培養箱(上海智城分析儀器制造有限公司)，G6540B液相與四極桿飛行時間串聯質譜儀(美國安捷倫科技有限公司)，色譜柱(ACQUITY UPLC, BEH C182.1 mm×50 mm i.d., 1.7m，美國沃特世科技有限公司)。

試劑 真菌基因組DNA快速抽提試劑盒(生工生物工程股份有限公司)，硫酸鏈霉素(生工生物工程股份有限公司)，色譜甲醇、乙腈、甲酸等(美國Fisher公司)，其他有機分析純試劑(廣州化學試劑廠)。

1.2 方法

內生真菌的分離、純化 莖、根、葉用自來水洗凈，晾干，75%酒精浸泡2 min，無菌水沖洗，0.1%氯化汞浸泡1.5 min (葉浸泡30 s)，無菌水沖洗。用最后的無菌水涂板(PDA)，作為空白對照, 根、莖、葉切成小塊接種于PDA培養基上，28℃培養箱培養[15]。無菌條件下用平板畫線法把菌落不斷挑純，直到變成單一菌落。

內生菌粗提物獲取及病原菌菌液獲取 將已純化的內生菌菌落挑入PDB培養基中, 在28℃，180 r min-1搖床上培養7 d，過濾取上清液，加入等體積的乙酸乙酯萃取，取有機相至250 mL圓底燒瓶中，置于旋轉蒸發儀上45℃蒸發濃縮，過0.22m濾膜，用色譜甲醇配制成10 mg mL-1貯存液。取保種的青枯菌，倒入CPG液體培養基中，在30℃, 220 r min-1搖床上培養24 h，用紫外分光光度計測其OD值[16]。

活性篩選 內生真菌的抗病原菌活性篩選采用雙層平板法，重復3次。在超凈工作臺上先于滅菌培養皿中倒一層CPG硬膠，軟膠涼至45℃ (不燙手時)與青枯菌(終濃度為OD600=0.05)混合倒于凝固的硬膠上，待培養基全部凝固，用直徑8 mm的打孔器在軟膠上打孔，在孔中加入10L內生菌粗提物貯存液，以1 mg mL-1的鏈霉素為陽性對照, 所有平板置于恒溫培養箱中28℃培養，觀察抑菌圈大小并用十字交叉法對抑菌圈直徑進行測量2 次, 取平均值，3個菌落再次取平均，以抑菌圈大小表示抗菌活性，分為4個等級：無抑菌圈為“-”，直徑小于1.0 cm為“+”，直徑1.1~1.5 cm為“++”，直徑大于1.5 cm為“+++”[15]。

培養菌液對青枯菌的抑制作用 在無菌環境下取PDA培養基上已純化的內生菌菌落，挑入PDB培養基中于28℃，180 r min-1搖床上培養7 d,用滅菌紗布過濾取上清液，取若干已滅菌的15 mL離心管, 分別吸取0、500、1 000、1 500、2 000L菌液與PDB培養基混合定容至總體積為8 000L后與青枯菌混合，使其終濃度為OD600=0.05，離心管置于30℃，220 r min-1搖床上培養24 h，用紫外分光光度計測其OD600值，記錄數據并分析。

內生真菌測序鑒定 將已純化的內生菌菌落挑入PDB培養基中, 在28℃，180 r min-1搖床上培養7 d，過濾取菌渣，加液氮研磨成粉末，按真菌基因組DNA快速抽提試劑盒上的方法提取內生真菌的DNA，然后進行PCR擴增。PCR反應體系總體積20L：包含2×Plus Master Mix，10.0L；5p ITS4，0.8L；5p ITS5，0.8L；DNA模板，1.0L (0.1g)；無菌水補足。PCR反應程序：95℃預變性5 min；95℃變性30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸30 s，72℃復性10 min，共35個循環。PCR產物采用凝膠電泳檢測，切割目的條帶進行純化并測序[17]。

活性內生菌的活性化合物 內生菌粗提物用色譜甲醇配置成1 mg mL-1的樣品溶液, 經0.22m濾膜過濾上質譜儀分析。分析條件為流動相0.1%甲酸水(A)和乙腈(B)，洗脫梯度：0~1 min, 90%A，1~ 3 min, 90%A~80%A, 3~5.5 min, 80%A~40%A; 5.5~ 7 min，40%A~10%A；7~9 min，10%A~5%A；9~ 10 min，5%A~90%A，流速為0.4 mL min-1，柱溫35℃，進樣體積5L。采用電噴霧離子化(ESI)；干燥氣溫度300℃；干燥氣體流量8.0 L min-1, 鞘氣溫度350℃；碎片電壓120 V, 檢測范圍為100~ 1 000的正負態模式，正負態的毛細管電壓分別設定為3.0 kV和2.5 kV。

化合物含量測定 無菌條件下將已純化的內生菌菌落挑入PDB培養基中，置于28℃，180 r min-1搖床上培養，每天取培養液1.5 mL存于-40℃冰箱, 共14 d，最后1 d將所有樣品室溫解凍后用0.22m濾膜過濾，用液質聯用儀檢測化合物含量。

2 結果和分析

2.1 馬齒莧內生菌的分離、鑒定和活性評價

分離獲得2株馬齒莧內生菌，用雙層平板法進行抗青枯菌試驗，顯示“+++”活性。利用No051 16S rDNA ITS (ITS4、ITS5)序列進行BLAST搜索, 選取與序列相近的種或菌株進行比對，確定菌株種名, 分別是橘青霉(, 圖1)和波蘭青霉(, 圖2)，都是青霉屬菌。對青枯菌抑制作用試驗結果表明，橘青霉和波蘭青霉粗提物濃度越高或培養液體積越大，抑菌效果越明顯(圖3, 4, 表1)。

2.2 橘青霉和波蘭青霉的活性成分

取10 mg mL-1的貯存液，用色譜甲醇配制成1 mg mL-1的樣品溶液，經0.22m濾膜過濾，用液質聯用儀分析粗提物，得到橘青霉和波蘭青霉的液相質譜圖。2種內生菌提取物中的共有峰1含量相對較高，尤其在波蘭青霉中是主要成分，推測峰1可能為主要的活性成分。經高分辨質譜分析，正負態準分子離子峰251.092 3 [M + H]+和249.077 1 [M - H]-, 及正離子加鈉離子273.073 6為[M + Na]+，確定峰1的分子式為C13H14O5。根據菌種鑒定結果，查閱Scifinder數據庫和同屬報道的化學成分，化合物橘霉素的分子式與峰1的分子式相同，進一步用液相質譜對比分析橘霉素標準品與峰1，具有相似的保留時間和離子碎片，因此，確定峰1為化合物橘霉素(圖5)。

圖1 橘青霉和ITS序列

圖2 波蘭青霉、孢子和ITS序列

圖3 橘青霉粗提物及培養菌液抑制青枯菌效果。*: P<0.05; **: P<0.01。

圖4 波蘭青霉粗提物及培養菌液抑制青枯菌效果。*: P<0.05; **: P<0.01。

表1 橘青霉粗提物對青枯菌的抑菌活性

不同的小寫字母表示差異顯著(<0.05);=3。下表同。

Data followed different letters indicate significant difference at 0.05 level,=3. The same is following Table.

2.3 活性化合物抑菌活性

為探討橘青霉和波蘭青霉代謝產物橘霉素的抑菌活性，將橘霉素標準品配制成0、1、2.5、5和10 mg mL-1溶液，以1 mg mL-1鏈霉素為陽性對照，用雙層平板法進行抑制青枯菌試驗，結果表明, 1 mg mL-1的橘霉素抑菌圈直徑為(3.01±0.102) cm, 比陽性對照[(0.89±0.167) cm]大(表2)，說明橘霉素具有比鏈霉素更強的抑制青枯菌活性。另外，橘青霉培養時間越長，化合物橘霉素含量越高，培養10 d達最大值(14.45±2.813) mg mL-1(圖6)，這對后期獲得高濃度的化合物具有重要的參考價值。

圖5 UPLC-QTOF-MS分析內生菌的活性成分

表2 橘霉素對青枯菌抑菌活性

圖6 橘霉素在橘青霉培養過程中的含量變化

3 結論和討論

從植物不同組織部位分離獲得的內生菌種類不同，分離頻率不同也可能得到不同的內生菌種類。目前從馬齒莧分離的內生真菌有附球菌屬()、鐮刀菌屬()、青霉菌屬()、毛殼菌屬()、彼得殼屬()[18]；內生細菌有腸桿菌()、短小芽孢桿菌()、無色桿菌(spp.)、類芽孢桿菌屬()、賴氏細菌屬()和[19], 這些菌可以抵抗金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌[15]。本研究首次從馬齒莧中分離得到內生菌橘青霉和波蘭青霉，豐富了馬齒莧內生菌的種類。

橘青霉用途廣泛，可以生產殼聚糖[20]、內葡聚糖酶[21]、角蛋白[22]、工業核苷酸[23]、纖維素酶[24]以及抗腫瘤的抗生素[25]；另外，橘青霉可以刺激辣椒()生長并誘導對炭疽病的抗性[26]，以及用于廢水處理等[27]。而對波蘭青霉的研究則相對較少，波蘭青霉的活性物質也具有多種生物活性，如抗肝癌、體外增加葡萄糖攝取的作用[28-29]；還有抑制單胺氧化酶家族的作用，單胺氧化酶抑制劑是治療抑郁癥的處方藥，使用歷史悠久，也可治療帕金森病等[30]。另外，高效可見光誘導波蘭青霉合成的銀納米粒，對血清型傷寒沙門氏菌、鮑曼不動桿菌具有抑制作用[31-32]。這些表明橘青霉和波蘭青霉具有廣闊的應用前景，還有待于深入研究。

目前對橘霉素的活性功能研究相對較少，主要活性是對革蘭氏陽性菌有抗菌作用，而對革蘭氏陰性菌無抗菌作用，還具有抗梨形四膜蟲[33]和結核桿菌的作用，其他方面未見報道。本研究首次報道橘霉素具有抗青枯菌活性。但有報道橘霉素具有一定毒性，大量注射或口服可以致死[34]。關于橘霉素是否能夠應用于實際生產生活中，應從其是否能被植物吸收，通過食物進入人體后的影響等方面來考慮，還有待深入研究。

[1] GAO H L. The research progress of[J]. Legal Syst Soc, 2009(12): 354. doi: 10.19387/j.cnki.1009-0592.2009.12.244. 高歡樂. 論青枯菌病害的研究進展[J]. 法制與社會, 2009(12): 354. doi: 10.19387/j.cnki.1009-0592.2009.12.244.

[2] LI T W. Advances in biological control of[J]. Plant Doct, 2009, 22(5): 4-6. doi: 10.3969/j.issn.1007-1067.2009.05. 001. 李土文. 青枯病的生物防治研究進展 [J]. 植物醫生, 2009, 22(5): 4-6. doi: 10.3969/j.issn.1007-1067.2009.05.001.

[3] WANG Z W, JI Y L, CHEN Y G. Studies and biological significances of plant endophytes [J]. MicrobiolChina, 2015, 42(2): 349?363. doi: 10.13344/j.microbiol.China.130815.王志偉, 紀燕玲, 陳永敢. 植物內生菌研究及其科學意義 [J]. 微生物學通報, 2015, 42(2): 349-363. doi: 10.13344/j.microbiol.China. 130815.

[4] CHEN W P. Experimental study on the antibacterial effect ofextract liquid [J]. Lishizhen Med Mat Med Res, 2007, 18(9): 2205-2206. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2007.09.078.陳萬平. 馬齒莧提取液體外抑菌作用的實驗研究 [J]. 時珍國醫國藥, 2007, 18(9): 2205-2206. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2007.09.078.

[5] FAN Y S. Study on the hypoglycemic activity of polysaccharides isolated fromL. [D]. Yangling: NW Agric For University, 2008: 1-66. 范玉生. 馬齒莧多糖降血糖作用研究 [D]. 楊凌: 西北農林科技大學, 2008: 1-66.

[6] HE G P. Pharmacological action and clinical application ofL. [J]. Chin J Drug Abuse Prev Treat, 2009, 15(4): 243-245. doi: 10.15900/j.cnki.zylf1995.2009.04.002.何國萍. 馬齒莧的藥理作用與臨床應用[J]. 中國藥物濫用防治雜志, 2009, 15(4): 243-245. doi: 10.15900/j.cnki.zylf1995.2009.04.002.

[7] LIU H, LI Y P, ZHOU C L, et al. Study on extraction and bioactivity ofL. flavonoids [J]. Lishizhen Med Mat Med Res, 2010, 21(11): 2866-2867. doi: 10.3969/j.issn.1008-0805.2010.11.069.劉華, 李玉萍, 周春麗, 等. 馬齒莧黃酮提取及生物活性研究[J]. 時珍國醫國藥, 2010, 21(11): 2866-2867. doi: 10.3969/j.issn.1008- 0805.2010.11.069.

[8] QIN X Z, WANG D, ZHANG H Y, et al. Study on the anti-inflam- mation, analgesia effects and the toleration oxygen deficit of the porslane [J]. Chin J Hosp Pharm, 2010, 30(22): 1909-1911. 秦孝智, 王丹, 張紅英, 等. 馬齒莧不同提取物的抗炎鎮痛耐缺氧作用[J]. 中國醫院藥學雜志, 2010, 30(22): 1909-1911.

[9] LI W K, HU Z B. Endophytes and natural medicines [J]. Chin Nat Med, 2005, 3(4): 193-199. 黎萬奎, 胡之璧. 內生菌與天然藥物[J]. 中國天然藥物, 2005, 3(4): 193-199.

[10] JIA L, CHEN S Y, ZHAI Y G, et al. Recent advances in studies on endophytes and their associated bioactive products [J]. Chin Trad Herb Drugs, 2007, 38(11): 1750-1754. doi: 10.3321/j.issn:0253-2670.2007. 11.053.賈栗, 陳疏影, 翟永功, 等. 近年國內外植物內生菌產生物活性物質的研究進展[J]. 中草藥, 2007, 38(11): 1750-1754. doi: 10.3321/j. issn:0253-2670.2007.11.053.

[11] Stierle A, Strobel G, Stierle D. Taxol and taxane production by, an endophytic fungus of Pacific yew [J]. Science, 1993, 260(5105): 214-216. doi: 10.1126/science.8097061.

[12] REN A Z, GAO Y B. Endophytic fungi, a kind of resource micro- organism with broad application prospect[J]. MicrobiolChina, 2001, 28(6): 90-93. doi: 10.3969/j.issn.0253-2654.2001.06.022.任安芝, 高玉葆. 植物內生真菌——一類應用前景廣闊的資源微生物[J]. 微生物學通報, 2001, 28(6): 90-93. doi: 10.3969/j.issn.0253- 2654.2001.06.022.

[13] LIU J H, YU B Y. Isolation of endophytic fungi fromand the screening method of antitumor secondary meta- bolite produced by the fungi [J]. J Plant Resour Environ, 2004, 13(4): 6-10. doi: 10.3969/j.issn.1674-7895.2004.04.002.劉吉華, 余伯陽. 喜樹內生真菌的分離及其抗腫瘤活性代謝產物的篩選方法[J]. 植物資源與環境學報, 2004, 13(4): 6-10. doi: 10.3969/j. issn.1674-7895.2004.04.002.

[14] ZHANG J C, WANG Z M, ZHANG H Y, et al. The summarize about recent research process on fern endophyte [J]. Chin Agric Sci Bull, 2010, 26(20): 70-72. 張君誠, 王錚敏, 張杭穎, 等. 蕨類植物內生菌研究進展 [J]. 中國農學通報, 2010, 26(20): 70-72.

[15] GONG J. Isolation and anti-microbial activity of endophyte inL. [J]. Food Ind, 2014, 35(7): 144-147. 鞏健. 馬齒莧內生菌分離及其抑菌效果研究 [J]. 食品工業, 2014, 35(7): 144-147.

[16] ZHAO F F, HAN B J, LI P P, et al. Extracts from tendrils and leaves ofLinn.: Components analysis and activity to three types of agricultural pathogenic fungi [J]. Chin J Trop Crops, 2019, 40(1): 115- 122. doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.01.017.趙方方, 韓丙軍, 李萍萍, 等. 胡椒蔓和葉粗提物成分分析及對3種農業病原真菌活性研究 [J]. 熱帶作物學報, 2019, 40(1): 115-122. doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2019.01.017.

[17] XIAO Y R, WANG Y S, LI N Z, et al. Isolation and identification of a blinin-producing endophytic fungus fromH. Lév [J/OL]. Genom Appl Biol, 2019: 1-8. [2019-04-04] http://kns.cnki.net/kcms/ detail/45.1369.Q.20190403.1421.004.html.肖義蓉, 王寅生, 李南臻, 等. 金龍膽草產苦蒿素內生真菌的篩選鑒定 [J/OL]. 基因組學與應用生物學, 2019: 1-8. [2019-04-04] http://kns.cnki.net/kcms/detail/45.1369.Q.20190403.1421.004.html.

[18] ZHANG Y. Isolation of endophytic fungi fromand study on their infulence on hosts growth [D]. Hohhot: Inner Mongolia Agricultural University, 2015: 1-39. 張瑜. 馬齒莧內生真菌的分離、鑒定及其對宿主生長的影響 [D]. 呼和浩特: 內蒙古農業大學, 2015: 1-39.

[19] WU Y, SHANG S H, YANG Q, et al. Isolation and identification of endophytes from[J]. J Shanxi Agric Univ (Nat Sci), 2014, 34(2): 117-120. 武燕, 尚世輝, 楊倩, 等. 馬齒莧內生細菌的分離鑒定 [J]. 山西農業大學學報(自然科學版), 2014, 34(2): 117-120.

[20] Namboodiri M M T, Pakshirajan K. Sustainable and green approach of chitosan production frombiomass using industrial wastewater as a cheap substrate [J]. J Environ Manage, 2019, 240: 431-440. doi: 10.1016/j.jenvman.2019.03.085.

[21] Ouephanit C, Boonvitthya N, Theerachat M, et al. Effi- cient expression and secretion of endo-1,4--xylanase fromin non-conventional yeastdirected by the native and the preproLIP2 signal peptides [J]. Protein Expr Purif, 2019, 160: 1-6. doi: 10.1016/j.pep.2019.03.012.

[22] Nikitina Z K, Gordonova I K. Exogenous regulation of produ- ctivity of-keratinase producer [J]. Probl Biol Med Pharm Chem, 2016, 19(9): 8-12.

[23] Chen X Y, Wang B, Pan L. Heterologous expression and charac- terization ofnuclease P1 inand its application in the production of nucleotides [J]. Protein Expr Purif, 2019, 156: 36-43. doi: 10.1016/j.pep.2018.12.004.

[24] Muthukrishnan S. Optimization and production of industrial important cellulase enzyme fromin Western Ghats of Sathuragiri hills soil sample isolate [J]. Univ J Microbiol Res, 2017, 5(1): 7-16. doi: 10.13189/ujmr.2017.050102.

[25] Qader M M, Kumar N S, Jayasinghe L, et al. Production of antitumor antibiotic GKK1032B by, an endo- phytic fungus isolated fromfruits [J]. Med Aromat Plants, 2016, 5(1): 1000225. doi: 10.4172/2167-0412.1000225.

[26] MANI P G, AUDIPUDI A V. Growth stimulation and induction of systemic resistance in chilli against anthracnose disease byAVGE5 [J]. Int J Adv Res, 2016, 4(5): 419-426.

[27] Alves A M, de Moura R B, Carvalho A K F, et al.whole-cells catalyst for the treatment of lipid-rich wastewater [J]. Biomass Bioenergy, 2019, 120: 433-438. doi: 10.1016/j.biombioe. 2018.12.004.

[28] Wen Y Z, Lv Y B, Hao J, et al. Two new compounds of, an endophytic fungus fromDecne [J/OL]. Nat Prod Res, 2019, [2019-02-13] doi: 10.1080/14786419. 2019.1569003.

[29] Fatima N, Sripisut T, Youn U J, et al. Bioactive constituents from an endophytic fungus,NFW9, associated with[J]. Med Chem, 2017, 13(7): 689-697. doi: 10.2174/ 1573406413666170216145121.

[30] Elsunni M A, Yang Z D. Secondary metabolites of the endophytic fungiand their monoamine oxidase inhibitory activity [J]. Chem Nat Compd, 2018, 54(5): 1018-1019. doi: 10.1007/ s10600-018-2540-7.

[31] Neethu S, Midhun S J, Sunil M A, et al. Efficient visible light induced synthesis of silver nanoparticles byARA 10 isolated fromand its antibacterial efficacy againstserovar[J]. J Photo- chem Photobiol B, 2018, 180: 175-185. doi: 10.1016/j.jphotobiol. 2018.02.005.

[32] Neethu S, Midhun S J, Radhakrishnan E K, et al. Green synthesized silver nanoparticles by marine endophytic fungusand its antibacterial efficacy against biofilm forming, multidrug-resistant[J]. Microb Pathog, 2018, 116: 263-272. doi: 10.1016/j.micpath.2018.01.033.

[33] Hayes A W, Birkhead H E, Hall E A. Antiprotozoal activity in citrinin [J]. Bull Environ Contam Toxicol, 1976, 15(4): 429-436. doi: 10.1007/BF01685067.

[34] WANG Y. Citrinin [J]. Sci China, 1951, 2(4): 433-454.汪猷. 橘霉素[J]. 中國科學, 1951, 2(4): 433-454.

Bioactivity Metabolite from the EndophyticsandofAgainst

ZHANG Qian, LI Ping, HE Zi-kang, YAN Jian*

(College of Natural Resources and Environment, South China Agricultural University; Key laboratory of Agro-Environment in the Tropics, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Guangzhou 510510, China)

To investigate the diversity of endophytics in medicinal plantand explore potential biological resources to prevent and control crop diseases, the endophytes from its roots, stems and leaves were isolated by medium cultivation method, their bioactivities were evaluated against, and they were identified by colonial morphology and ITS sequence. The results showed that the crude extracts of two endophyticsanddisplayed strong activities against the phytopathogen. One of active metabolite (citrinin) was identified based on UPLC-QTQF-MS. Moreover, the activity of citrinin had more strong antibacterial property than that of streptomycin, which was a common agent in agriculture to prevent bacterial wilt. So, these would provide scientific basis for biological control of bacterial wilt.

;;; Citrinin;

10.11926/jtsb.4065

2019-03-14

2019-04-18

中醫藥公共衛生服務補助專項(財社[2017]66號)；廣東省自然科學基金項目(2017A030310283)資助

This work was supported by the Special Project for Chinese Medicine Public Health Services (Grant No. [2017]66), and the Natural Science Foundation in Guangdong (Grant No. 2017A030310283).

張倩(1996~ )，女，碩士研究生，研究方向為化學生態學。E-mail: 617951045@qq.com

Corresponding author. E-mail: yanjian78@scau.edu.cn