雞傳染性喉氣管炎病毒的分離和鑒定

李偉，劉冬冬，吳丹，李春輝

（⒈吉林省動物疫病預防控制中心 長春 130062；⒉永吉縣西陽鎮畜牧獸醫站 吉林吉林 132100）

雞傳染性喉氣管炎（ILT）是一種接觸性病毒性傳染病，主要是通過呼吸道和消化道感染，患病雞和帶毒雞是主要的傳染源，雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）感染后有6～12 d 的潛伏期，病程達7～15 d，感染康復后的雞可以長期帶毒排毒，成為本病的重要傳染源[1]。臨床上雞傳染性喉氣管炎病毒在同群傳播較快，所以，發病雞一定要早期隔離和診斷，本文成功分離并鑒定了一株雞傳染性喉氣管炎病毒，將分離和鑒定過程介紹如下。

1 發病情況

某蛋雞場飼養蛋雞2,000 只，2019 年5 月，開始出現蛋雞產蛋下降，病雞出現呼吸困難，流鼻液和眼淚，咳嗽，呼吸道有帶血的黏液，蛋雞采食下降，精神沉郁，產蛋品質下降，蛋殼薄，雞蛋形狀不規則，發病雞死亡率10%左右。

2 病理剖檢

取病死蛋雞剖檢可見喉頭黏膜有出血點，氣管黏膜充血、出血并有大量黏液，肺充血、出血，肝臟具有出血點，其它臟器病變特征不明顯。

3 實驗室診斷

3.1 PCR 檢測

無菌取病死雞的喉頭和氣管等病變組織，按1:3 比例加入滅菌生理鹽水，用研磨器研磨成組織勻漿，離心機12,000r/min 離心15 min。吸取上清液做PCR 檢測，并保存一部分上清液用于病毒分離。按照參考文獻[2]的方法進行雞傳染性喉氣管炎病毒的PCR檢測，PCR 產物跑核酸電泳觀察，結果表明PCR 擴增片段大小690 bp 左右，與預期大小一致，說明雞傳染性喉氣管炎病毒核酸陽性。

3.2 病毒分離

將上面保存的組織上清液用0.45 μm 濾膜過濾除菌，尿囊膜途徑接種10 日齡SPF 雞胚10 枚，0.2 mL/胚，同時選擇10 枚SPF雞胚接種滅菌生理鹽水作為空白對照，接種后的雞胚放置在37 ℃溫箱培養，每天照蛋觀察雞胚存活情況，死胚隨時取出，剖檢死胚的病變情況，接種后144 h 收集接種病毒雞胚的尿囊膜和尿囊液，作為第1 代分離毒，按照同樣的方法連續接種SPF 雞胚并傳至第3 代分離毒。每一代雞胚分離毒經PCR 檢測均雞傳染性喉氣管炎病毒核酸陽性，每一代雞胚分離毒在雞胚尿囊膜上均呈現出痘斑病變，尿囊膜增厚明顯，胚體表面有出血點，氣管粘膜有出血和充血，而接種生理鹽水的對照組雞胚沒有死亡和病變。

4 討論

雞傳染性喉氣管炎病毒在自然情況下主要感染雞，各種雞都易感，根據臨床表現分為喉氣管炎型和結膜型。喉氣管炎型的主要臨床表現為呼吸困難，咳嗽帶血，血痰，喉頭出血。結膜型的主要臨床表現為眼結膜紅腫，發炎，流淚，眼部有膿性分泌物，蛋雞產蛋下降[3]。發生雞傳染性喉氣管炎病毒感染后應該及時隔離病雞，應用抗生素治療防止發生繼發感染，健康雞群及時接種雞傳染性喉氣管炎病毒疫苗，養雞場內外徹底消毒，防止病毒擴散傳播。雞傳染性喉氣管炎病毒疫苗一般采用滴鼻、點眼的方式進行疫苗免疫接種，在進行疫苗免疫接種時防止發生遺漏，在沒有發生過雞傳染性喉氣管炎病毒感染的養雞場可以不進行疫苗免疫接種，在雞傳染性喉氣管炎病毒高發地區應該做好疫苗的免疫接種工作，疫苗免疫接種應該嚴格按照操作說明進行，確保免疫劑量，以免發生免疫失敗[4]。雞傳染性喉氣管炎病毒在一年四季都可以發生，成年雞感染后癥狀較重，雛雞感染后臨床表現輕，為了預防雞傳染性喉氣管炎病毒感染，一定要加強雞群的飼養管理，采取全進全出的養殖模式，早期診斷對于防控雞傳染性喉氣管炎病毒十分重要，所以要定期觀察雞群的臨床表現，出現呼吸困難的病雞要立即隔離，并采集病雞的喉頭氣管分泌物送實驗室進行PCR 診斷，PCR 檢測方法是進行早期診斷的最好方法，可以對潛伏感染期的病毒進行檢測，有助于雞傳染性喉氣管炎病毒的早期診斷。雞傳染性喉氣管炎病毒的發生與雞舍的養殖環境密切相關，雞舍要定期通風換氣，降低飼養密度，降低舍內粉塵和氨氣濃度[5]。由于康復雞可以帶毒排毒，所以康復雞不能與易感雞群混合飼養，康復后也應該淘汰處理。總之，雞傳染性喉氣管炎病毒是一種嚴重的急性呼吸道病毒傳染病，其發生和流行十分普遍，目前呈世界性分布，在養殖場發病后會導致雞死亡和蛋雞產蛋下降，嚴重危害養雞業發展，造成巨大經濟損失，所以在規模雞場一定要做好雞傳染性喉氣管炎病毒的防控，嚴防本病的發生和流行。