肥胖基因多態性與代謝綜合征痰證病位、病性兼雜規律及理化指標相關性研究

張萍 邵巖飛 林小鳳 張夢婷

摘要：目的 ?探討肥胖基因（FTO）多態性位點rs9939609（A/T）與代謝綜合征（MS）痰證病位、病性兼雜規律及理化指標的相關性。方法 ?選擇MS痰證患者199例，MS非痰證患者113例，健康人198名，采用證素辨證法分析各證素分布情況;采用SNPscanTM多重SNP分型技術方法檢測FTO單核苷酸多態性（SNPs）位點rs9939609的基因型頻率、等位基因頻率及其與痰證病位、病性兼雜規律的相關性。結果 ?FTO多態性位點rs9939609的3種基因型頻率3組比較差異有統計學意義（P<0.01）;痰證組、非痰證組基因型AA與AT頻率高于健康組（P<0.01）。FTO基因位點rs9939609健康組、痰證組等位基因T頻率高于非痰證組（P<0.01）。痰證組中，陰虛的TT基因型頻率高于非陰虛（P<0.01），AT基因型的男性比例高于女性（P<0.05），AT基因型的低密度脂蛋白（LDL-C）、肌酐（Cr）明顯高于TT基因型（P<0.05，P<0.01）。結論 ?FTO基因與MS形成有關，攜帶FTO基因多態性位點rs9939609基因型AA、AT和風險等位基因A會增加MS發生風險;FTO多態性位點rs9939609與MS痰證及兼雜病性陰虛的形成相關，FTO是MS痰證易感基因之一;在MS痰證組中，男性更易攜帶FTO基因多態性位點rs9939609 AT基因型;FTO基因多態性位點rs9939609與MS痰證的LDL-C、Cr代謝有關。

關鍵詞：代謝綜合征;痰證;單核苷酸多態性;證素;FTO基因

中圖分類號：R259.89 ???文獻標識碼：A ???文章編號：1005-5304（2019）11-0016-06

analyzed by syndrome differentiation. The SNPscanTM multiplex SNP typing technique was used to detect the genotype frequency and allele frequency of FTO single nucleotide polymorphism （SNPs） locus rs9939609. Meanwhile， the correlation between the FTO gene polymorphism locus rs9939609 and characteristic regularity of location as well as disease nature of MS with phlegm syndrome was analyzed. Results There was statistical significance among the genotype frequencies of the three FTO polymorphisms rs9939609 in the three groups （P<0.01）; the risk genotype homozygote AA and heterozygote AT in the phlegm syndrome group and non-phlegm syndrome group were significantly higher than those in the healthy group （P<0.01）. The FTO allele rs9939609 frequency of allele T in healthy group and phlegm syndrome group was higher than that in non-phlegm syndrome group （P<0.01）. In phlegm syndrome group， the frequency of TT genotype in yin deficiency was much higher than that of non-yin deficiency （P<0.01）; The proportion of males with AT genotype was higher than that of females （P<0.05）; AT genotype LDL-C and Cr were significantly higher than those of TT genotypes （P<0.05， P<0.01）. Conclusion FTO gene is related to the formation of MS. Carrying FTO gene polymorphism locus rs9939609 genotype AA and AT and risk allele A may increase the risk of MS; FTO polymorphism locus rs9939609 may be related to the formation of MS phlegm syndrome and yin deficiency of concurrent miscellaneous diseases; In MS phlegm syndrome， males are more likely to carry the FTO gene polymorphism locus rs9939609 AT genotype; FTO gene polymorphism locus rs9939609 may be related to the metabolism of LDL-C and Cr in MS phlegm syndrome.

Keywords： metabolic syndrome; phlegm syndrome; single nucleotide polymorphism; syndrome element; FTO gene

代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是以胰島素抵抗為基礎，包括中心性肥胖、糖耐量減低、糖尿病、高血壓、脂代謝紊亂等一系列病癥的代謝紊亂綜合征，是心血管疾病及其他慢性疾病發生發展的危險因素。Li等[1]研究發現，我國18歲以上的人群MS發病率為24.5%。目前多認為MS是基因、環境及生活方式共同作用的結果，肥胖及遺傳因素對其影響最為顯著。中心性肥胖既是MS診斷標準之一又是致病因素。中醫學有“肥人多痰”理論，本課題組前期研究表明，“痰”是MS易患病性證素，遺傳因素影響痰證的病位及兼雜特征[2-4]。肥胖基因（fat mass and obesity associated gene，FTO）是與肥胖相關的“第一基因”，FTO基因單核苷酸多態性（SNPs）不但與肥胖相關，還與代謝紊亂及肥胖引起的相關疾病有關[5-6]，前期研究表明，MS痰證不同證候群中醫證素的形成與FTO基因多態性關系密切[7]。為進一步探討FTO基因對MS痰證形成及中醫證素的影響，本研究對FTO基因多態性位點rs9939609與MS痰證病位、病性兼雜規律及理化指標進行相關性研究。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

選擇2013年11月-2016年7月福建中醫藥大學附屬晉江中醫院、福建中醫藥大學附屬第二人民醫院體檢中心、福州市中西醫結合醫院MS痰證患者199例，MS非痰證患者113例。選取同期健康人198名。本研究經福建中醫藥大學醫學倫理委員會審查批準[（2012）福中醫倫理審字第（004）號]，臨床血液樣本不違背倫理原則。

1.2 ?診斷標準

參照《中國2型糖尿病防治指南（2013年版）》[8]MS診斷標準。具備以下各項中的3項及以上即可診斷。①腹型肥胖：男性腰圍≥90 cm，女性腰圍≥85 cm;②空腹血糖（FPG）≥6.1 mmol/L或餐后2 h血糖（2 h PG）≥7.8 mmol/L和/或已確診為糖尿病并治療者;③血壓≥130/85 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）和/或已確診為高血壓并治療者;④空腹三酰甘油（TG）≥1.70 mmol/L;⑤空腹高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）<1.04 mmol/L。

1.3 ?中醫證素診斷標準

采用證素辨證方法[9]，痰的病理積分≥100分者歸為痰證組，痰的病理積分<100分者歸為非痰證組。

1.4 ?納入標準

①符合上述MS診斷標準及中醫證素診斷標準;②年齡18～70歲;③受試者為無血緣關系的中國福建常駐漢族人群;④可配合完成中醫四診及相關病史采集;⑤簽署知情同意書。

1.5 ?排除標準

①1型糖尿病、妊娠期糖尿病、繼發性高脂血癥、繼發性肥胖、繼發性高血壓;②伴嚴重的心、肝、腎系統疾病;③精神病患者;④急慢性呼吸系統疾病。

1.6 ?觀察指標

1.6.1 ?臨床資料

由2名經過嚴格培訓的中醫專業人員按規范采集患者身高、體質量、血壓及四診信息。

1.6.2 ?中醫證素提取

采用《四診資料采集量表》進行嚴格規范的四診資料收集，采用證素辨證[9]，以各個癥狀貢獻度和閾值法確定各個證要素的權重。每一癥狀的輕重以中等程度為準，癥狀重時其定量診斷值乘1.5，輕時乘0.7。各證素的診斷確定以100為通用閾值，當各癥狀對某一證素貢獻度之和≥100時即可確定。

1.6.3 ?FTO基因rs9939609 A/T多態性

清晨采集患者空腹靜脈血1 mL，用中量全血基因組DNA提取試劑盒（溶液型，北京百泰克生物技術有限公司）提取外周血白細胞DNA，測定DNA濃度，-80 ℃冰箱保存?；蚍中筒捎肧NPscanTM多重SNP分型技術。采用直接計數法計算各基因型，基因頻率（%）=陽性基因數÷樣本數。

1.6.4 ?理化指標

由病例收集醫院檢測患者收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、FPG、總膽固醇（TC）、TG、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、HDL-C、尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr），計算體質量指數（BMI），BMI（kg/m2）=體質量÷身高2。

1.7 ?統計學方法

采用SPSS21.0統計軟件進行分析。計量資料符合正態分布以±s表示，行兩樣本t檢驗或單因素方差分析;不符合正態分布以M（QR）表示，行兩樣本或多組秩和檢驗。各等位基因證素分布比較采用卡方檢驗。各基因型證素分布比較采用無序多分類Logistic回歸分析。Hardy-Weinberg平衡定律分布采用似然比卡方檢驗。采用Logistic回歸分析相對危險度（OR）及其可信區間（CI）表示各組與等位基因的關聯度。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 ?結果

2.1 ?遺傳平衡定律檢測

FTO基因rs9939609位點基因型頻率在3組中分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，表明本樣本的群體代表性較好。見表1。

2.2 ?FTO基因rs9939609基因型分布

FTO基因位點rs9939609 AA、AT、TT基因型頻率分布3組比較差異有統計學意義（P<0.01）。其中，痰證組、非痰證組基因型AA和AT比例高于健康組（P<0.01），痰證組與非痰證組比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3 ?FTO基因rs9939609等位基因分布

對3組等位基因分布頻率進行比較，FTO基因位點3組比較差異有統計學意義（P<0.01）。FTO基因位點rs9939609健康組、痰證組等位基因T頻率高于非痰證組（P<0.01），痰證組、非痰證組風險等位基因A頻率高于健康組（P<0.01）。見表3。

2.4 ?各組與等位基因A、T的關聯程度

以T等位基因作為參照，結果顯示，攜帶FTO基因rs9939609位點A等位基因的個體，MS痰證及非痰證的風險分別是健康人的2.82、3.99倍（P<0.01）;攜帶FTO基因rs9939609位點T等位基因的個體，MS痰證的風險是非痰證的1.41倍（P<0.05）。見表4。

2.5 ?痰證組FTO基因位點rs9939609基因型與病位、病性無序多分類Logistic回歸分析

FTO基因位點rs9939609 AA、AT、TT基因型的分布在痰證病位證素肝、脾、肺、腎、膽、胃和病性證素濕、熱、氣滯、血瘀、氣虛、血虛、陽虛比較差異無統計學意義（P>0.05）。以AA基因型作為參照，與非陰虛比較，攜帶FTO基因TT基因型的陰虛患者是其8.381倍（P<0.01）。見表5、表6。

2.6 ?各組一般資料及理化指標比較

各組理化指標比較，差異有統計學意義（P<0.05，P<0.01）。痰證組BMI明顯高于非痰證組，非痰證組HDL-C明顯高于痰證組（P<0.05）。見表7。

2.7 ?痰證組不同基因型患者一般資料及理化指標比較

痰證組FTO基因rs9939609位點3種基因型年齡、BMI、SBP、DBP、FPG、TC、HDL-C、UA、BUN比較，差異無統計學意義（P>0.05）。AT基因型男性比例高于女性（P<0.05）。AT基因型LDL-C、Cr明顯高于TT基因型（P<0.05，P<0.01）。見表8。

3 ?討論

肥胖是MS的主要臨床表現之一。中醫學認為痰濕之體是引起肥胖的主要原因。本課題組前期研究發現，痰是MS的中醫病理基礎，并貫穿于MS始終[2-4，10]。近年來，中醫學者也對痰的先天因素做了相關研究[11-12]。本課題組前期發現，LPL基因多態性位點rs10503669與MS痰證的形成有關，可能與MS痰證兼雜病性濕的形成相關[3-4]。

人FTO基因位于16號染色體（16q12-q24），含有9個外顯子，基因長度為410.50 kb，主要在下丘腦、脂肪組織、胰島等廣泛表達。研究表明，FTO基因多態性與BMI、MS、糖尿病等顯著關聯[13-16]。本研究分析FTO基因多態性位點rs9939609與MS痰證病位、病性兼雜規律及理化指標的相關性，探討MS痰證及其不同兼雜可能的遺傳學基礎。

通過分析3組的基因型頻率發現，FTO多態性位點rs9939609的3種基因型頻率在3組間有顯著差異（P<0.01）;痰證組、非痰證組基因型AA與AT頻率明顯高于健康組（P<0.01）;痰證組、非痰證組風險等位基因A頻率遠高于健康組（P<0.01）。同時以T等位基因作為參照，分析攜帶FTO基因rs9939609位點A等位基因的個體，發現患MS痰證和非痰證的風險分別是健康人的2.82倍和3.99倍。研究表明，攜帶FTO基因多態性位點rs9939609基因型AA、AT和風險等位基因A與痰證及非痰證的形成均有關，即與MS的形成有關，這與其他學者研究[14]一致。此外，課題組前期研究發現，FTO基因多態性與MS痰證不同癥候群的中醫證素形成有關[7]。本研究發現，健康組、痰證組等位基因T頻率高于非痰證組（P<0.01）;攜帶T等位基因的個體，患MS痰證的風險是非痰證的1.41倍（P<0.05）;痰證組陰虛患者基因型TT的風險是非陰虛者的8.381倍（P<0.01）。中醫學認為，痰濁蘊結，郁而化火，灼傷津液，從而導致陰津受損。研究結果表明，FTO基因多態性位點rs9939609等位基因T與MS痰證的形成有關，也與MS痰證兼雜病性陰虛有關。

本研究比較各組理化指標發現，痰證組、非痰證組的年齡明顯高于健康組（P<0.05）。隨著年齡增加，細胞、組織器官糖代謝能力、結構和功能均呈現退行性變化，更容易受到各種慢性病的侵襲[17-18]，因此MS患者多數為中老年[19-20]。BMI是國際公認衡量一般成年人肥胖程度的客觀指標，本研究結果表明痰證組的BMI顯著高于非痰證組，與課題組前期研究結果一致[3]。同時，痰證組HDL-C低于非痰證組（P<0.05）。有研究發現，體型肥胖、血液黏稠及血液營養物質過剩是痰證的主要中醫病理內涵，脂代謝異?？勺鳛樘底C的共性指標[21-22]。因此，BMI及HDL-C可作為MS痰證診斷的微觀參考指標。

臨床研究表明，MS痰證患者不同理化指標具有差異性[23]。《泰定養生主論》有“素稟痰證”之說，認為痰證與先天稟賦有關，基于此，我們通過比較痰證組患者FTO基因rs9939609位點基因型與理化指標的關系，發現男性AT基因型比例高于女性（P<0.05），表明在MS痰證中男性更易攜帶AT基因型。同時，痰證組AT基因型的LDL-C顯著高于TT基因型（P<0.05）。此外，研究結果還表明痰證組AT基因型的Cr也顯著高于TT基因型（P<0.05），Cr可在一定程度上反映腎小球濾過功能的損害程度。腎主水液代謝，腎的功能失常會導致水濕津液停滯積聚而成痰?？梢?，在MS痰證的形成過程中，FTO基因rs9939609位點基因型AT與LDL-C、Cr的代謝有關，且其微觀作用機制與中醫學理論一致。

本研究從FTO基因多態性水平初步探討了MS痰證及其兼雜的本質，為中醫證的研究提供了思路和方法，后續可從基因功能入手，深入探討其作用機制。

參考文獻：

[1] LI R， LI W， LUN Z， et al. Prevalence of metabolic syndrome in Mainland China：a meta-analysis of published studies[J]. BMC Public Health，2016，16：296.

[2] 熊紅萍，李燦東，高碧珍，等.代謝綜合征的中醫易患因素[J].中華中醫藥雜志，2010，25（11）：1858-1859.

[3] 林小鳳，陳繼承，丁珊珊，等.KCNJ11基因多態性與代謝綜合征“痰證”病位、病性兼雜規律的相關性研究[J].時珍國醫國藥，2016，27（8）：2013-2016.

[4] 張夢婷，莊耀東，王永發，等.LPL基因多態性與代謝綜合征“痰證”病位、病性兼雜規律的相關性研究[J].中華中醫藥雜志，2017，32（7）：3126-3131.

[5] XI B， ZHANG M， WANG C， et al. The common SNP （rs9939609） in the FTO gene modifies the association between obesity and high blood pressure in Chinese children[J]. Mol Biol Rep，2013，40（2）：773-778.

[6] LUCKY M H， BAIGS， ZIL-E-RUBAB H D， et al. Association of rs9939609 FTO gene variant with obesity among Karachi adolescent[J]. EurJ Biotech Biosci，2014，2（6）：20-24.

[7] 林小鳳.代謝綜合征“痰證”不同癥候群中醫證素特點及其與IGF2BP2、FTO基因多態性的相關性研究[D].福州：福建中醫藥大學，2017.

[8] 中華醫學會糖尿病學分會.中國2型糖尿病防治指南（2013年版）[J].中國糖尿病雜志，2014，22（8）：2-42.

[9] 朱文鋒.證素辨證學[M].北京：人民衛生出版社，2008：200.

[10] 熊紅萍，李燦東，高碧珍，等.代謝綜合征的中醫痰證病理與血糖、血胰島素及胰島素抵抗的相關性研究[J].中華中醫藥雜志，2010，25（5）：763-765.

[11] 洪永敦，莫鴻輝，朱會英，等.ApoE血清水平及基因多態性與冠心病痰瘀證候關系的研究[J].新中醫，2009，41（2）：42-44，8.

[12] WU Y， CUN Y， DONG J， et al. Polymorphisms in PPARD， PPARG and APM1 associated with four types of traditional Chinese medicine constitutions[J]. J Genet Genomics，2010，37（6）：371-379.

[13] 吳燕明，李衛國，盛秋明，等.FTO基因rs9939609位點多態性與兒童肥胖的相關性研究[J].臨床兒科雜志，2014，32（6）：547-550.

[14] 萬茜茜，周波，范晶，等.FTO基因變異與生活方式的交互作用對代謝綜合征的影響[J].解放軍醫學雜志，2010，35（5）：513-516.

[15] 楊黛稚，梁豐，鄧洪容.亞洲人群中FTO基因多態性與2型糖尿病關系的系統評價[J].中國保健營養（上旬刊），2013（10）：5514-5515.

[16] AL-ATTAR S A， POLLEX R L， BAN M R， et al. Association between the FTO rs9939609 polymorphism and the metabolic syndrome in a non-Caucasian multi-ethnic sample[J]. Cardiovasc Diabetol，2008， 7：5.

[17] 朱學云，王建安，計振民.江蘇省機關老年人代謝綜合征患病率及相關疾病的分析[J].實用老年醫學，2011，25（6）：454-456.

[18] 張鈺聰，關紹晨，吳曉光，等.北京市老年人代謝綜合征與心腦血管病的關系及其性別差異和隨齡變化[J].中華老年多器官疾病雜志，2010， 9（1）：56-60，64.

[19] 郭艷芳，彭績，劉崢，等.深圳市寶安區18～69歲居民代謝綜合征檢出情況及相關因素分析[J].中國當代醫藥，2018，25（20）：153-156.

[20] 江美花，賴善榕，林少凱，等.福建省成年居民膳食模式與代謝綜合征的關系研究[J].營養學報，2018，40（5）：439-444.

[21] 廖凌虹，王永發，游建勇，等.代謝綜合征患者中痰證與非痰證人群的生理生化指標觀察及社會網絡分析[J].中華中醫藥雜志，2017，32（7）：2956-2960.

[22] 廖凌虹，李燦東，汪欣，等.514例體檢者生化指標與中醫痰證的相關性分析[J].中華中醫藥雜志，2013，28（7）：2078-2080.

[23] 許珈齊，廖凌虹，陳繼承，等.代謝綜合征“痰證”患者不同病位證素與生化指標關系[J].山西中醫學院學報，2015，16（2）：38-40，43.

（收稿日期：2019-03-14）

（修回日期：2019-04-08;編輯：季巍?。?/p>