腦脊液細(xì)胞染色分類在有核細(xì)胞計(jì)數(shù)偏低時(shí)的臨床價(jià)值

溫小梅，林有東

（福建省立醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 福州350001）

腦脊液細(xì)胞染色分類法是目前檢測(cè)腦脊液細(xì)胞的金標(biāo)準(zhǔn),可診斷和鑒別診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病、腦血管病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤、轉(zhuǎn)移性腫瘤、白血病和淋巴瘤腦膜轉(zhuǎn)移等[1-4]。目前臨床上腦脊液細(xì)胞分類大部分醫(yī)院還采用顯微鏡分類法，即通過(guò)冰醋酸的作用下，在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞形狀和細(xì)胞核的形態(tài)進(jìn)行分類,共計(jì)數(shù)100個(gè)有核細(xì)胞，分別計(jì)算單個(gè)核和多個(gè)核所占比例，以百分?jǐn)?shù)表示。《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》腦脊液常規(guī)中提到如直接分類法不易區(qū)分細(xì)胞或臨床需要分類結(jié)果時(shí)才進(jìn)行細(xì)胞染色分類[5]；《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》第5版提到白細(xì)胞計(jì)數(shù)<30×106/L可不做分類計(jì)數(shù),且未強(qiáng)調(diào)一定需要細(xì)胞染色分類[6]。亦有文獻(xiàn)報(bào)道細(xì)胞染色分類形態(tài)學(xué)檢查具有很重要的臨床意義[7，8]。但是，我們?cè)谄綍r(shí)的工作實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),有核細(xì)胞計(jì)數(shù)偏低時(shí)還是需要對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞染色分類,仍具有極其重要的臨床價(jià)值。

因此，本文通過(guò)前瞻性地收集113例腦脊液有核細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)<20×106/L的標(biāo)本，進(jìn)行離心染色分類，探討腦脊液有核細(xì)胞偏低的細(xì)胞染色分類對(duì)臨床的參考價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 選取福建省立醫(yī)院2016年6月至2018年10月期間住院采集的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均在20×106/L以下的腦脊液標(biāo)本113例。同步通過(guò)住院信息系統(tǒng)收集患者的臨床病例資料，通過(guò)LIS系統(tǒng)收集同一份腦脊液標(biāo)本的葡萄糖、氯化物、血清腺苷脫氨酶（ADA）和總蛋白等生化檢驗(yàn)結(jié)果。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 腦脊液標(biāo)本采集2管，每管2ml送至檢驗(yàn)科后2h內(nèi)完成細(xì)胞染色分類和生化檢查。首先于Sysmex XE-5000儀器在體液模式下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后再充入牛鮑氏計(jì)數(shù)板，由兩位主管技師職稱以上的檢驗(yàn)師，在Olympus CX23顯微鏡下進(jìn)行人工核對(duì)有核細(xì)胞數(shù),選擇有核細(xì)胞數(shù)<20×106/L，紅細(xì)胞數(shù)<5×106/L的標(biāo)本，吸出300μl至Thermo細(xì)胞涂片離心機(jī) （Cytospin4）進(jìn)行1000r/min離心3min,收集細(xì)胞于玻片上，用珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的瑞氏－姬姆薩染液A和B染色10min（根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室SOP文件操作）,用Olympus CX23進(jìn)行分類100個(gè)有核細(xì)胞。同一患者的另一管腦脊液標(biāo)本3000r/min離心5min后按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程用貝克曼DXC800檢測(cè)，2h內(nèi)完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。各組患者百分率之間采用卡方檢驗(yàn)或者FISH精確檢驗(yàn)，生化結(jié)果用單向方差分析。兩側(cè)P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病人基本特征 腦脊液有核細(xì)胞計(jì)數(shù)<20×106/L的113例患者均已確診,見(jiàn)表1。

表1 病人基本特征

2.2 常見(jiàn)細(xì)胞染色分類情況和細(xì)胞形態(tài) 細(xì)胞染色后分類發(fā)現(xiàn)17例異常細(xì)胞，其中最常見(jiàn)的是轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，胃癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞有5例，占29.4%（5/17），肺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞4例，占23.5（4/17）；其次為淋巴瘤細(xì)胞3例，占17.6（3/17）。常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞和腦膜白血病細(xì)胞形態(tài)見(jiàn)圖1。113例患者中，淋巴細(xì)胞分類升高(>80%)有34例；單核細(xì)胞升高（>45%）有18例，1例出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞升高（>5%）。 見(jiàn)表 2。

2.3 細(xì)胞染色分類法與影像學(xué)檢查 實(shí)體惡性腫瘤、淋巴瘤和白血病患者做細(xì)胞染色分類檢查檢出異常細(xì)胞的陽(yáng)性率均高于相近時(shí)間段的頭顱CT/MRI檢查。特別是對(duì)于實(shí)體惡性腫瘤，細(xì)胞染色分類檢查檢出異常細(xì)胞的陽(yáng)性率為71.4%（10/14）明顯高于CT/MRI檢查發(fā)現(xiàn)占位性病變的陽(yáng)性率21.4%（3/14）,兩種檢查方法有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021）。 見(jiàn)表 3。

不同臨床診斷患者之間葡萄糖、氯化物、ADA和總蛋白等生化檢驗(yàn)結(jié)果均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

表2 細(xì)胞染色分類異常結(jié)果

圖1 常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞和腦膜白血病細(xì)胞

表3 細(xì)胞染色分類法與影像學(xué)檢查

腦脊液的細(xì)胞形態(tài)學(xué)在臨床中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷和治療監(jiān)測(cè)上具有重要意義。隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的飛速發(fā)展,雖然目前腦脊液檢查有流式細(xì)胞分析技術(shù)、PCR基因擴(kuò)增技術(shù)和原位熒光等的應(yīng)用[9-14],但細(xì)胞形態(tài)學(xué)簡(jiǎn)單快速,成本價(jià)格低，而且結(jié)果直觀,因此腦脊液的細(xì)胞染色分類法仍然作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括轉(zhuǎn)移癌、隱球菌感染、淋巴瘤和白血病等主要的檢查手段[15-17]。如前所述《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》腦脊液常規(guī)中提到如直接分類法不易區(qū)分細(xì)胞或臨床需要分類結(jié)果時(shí)才進(jìn)行細(xì)胞染色分類[5]，因此在實(shí)際檢驗(yàn)操作中,本科室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）以及大多數(shù)福建省級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科均以細(xì)胞計(jì)數(shù)＜20×106/L作為不再染色分類的標(biāo)準(zhǔn),但本研究發(fā)現(xiàn)假如按操作規(guī)程檢驗(yàn)的話，113例患者中至少漏診17例患者,包括轉(zhuǎn)移性胃癌、轉(zhuǎn)移性肺癌、淋巴瘤和中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病。因此腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)＜20×106/L，細(xì)胞染色分類仍然非常必要,對(duì)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變?cè)缙谠\斷具有十分重要的意義,特別是懷疑腦膜轉(zhuǎn)移癌患者。以往較多文獻(xiàn)報(bào)道腦脊液腦膜癌檢出率一般為1%左右,本研究納入的標(biāo)本是有核細(xì)胞＜20×106/L的腦脊液標(biāo)本，檢出陽(yáng)性率為10.6%（12/113）,我們分析了陽(yáng)性率差異原因，標(biāo)本入選標(biāo)準(zhǔn)只有一條即有核細(xì)胞計(jì)數(shù)小于20×106/L的所有送檢的腦脊液標(biāo)本，因此不存在選擇性偏倚。陽(yáng)性率差異原因可能有如下兩個(gè)：一是113例入選患者中有64例有頭暈頭痛，是否因?yàn)榕R床癥狀已出現(xiàn)導(dǎo)致陽(yáng)性率高；二是本研究使用性能較好的Thermo細(xì)胞涂片離心機(jī),再加上有高年資的檢驗(yàn)技師復(fù)核結(jié)果可能降低了漏檢率。陽(yáng)性率差異原因需在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。

有學(xué)者報(bào)道34例腦膜癌患者中32例腦脊液檢出惡性腫瘤細(xì)胞,而CT/MRI檢查僅有23例出現(xiàn)腦膜損傷腦水腫等各種非特異性的影像學(xué)改變[18]。與以往的研究報(bào)道類似,本研究亦發(fā)現(xiàn)，腦脊液有核細(xì)胞計(jì)數(shù)＜20×106/L的患者細(xì)胞染色分類法對(duì)實(shí)體惡性腫瘤腦轉(zhuǎn)移、淋巴瘤腦轉(zhuǎn)移和中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病陽(yáng)性檢出率均高于CT/MRI檢查，腦脊液細(xì)胞染色分類法對(duì)這類疾病的診斷準(zhǔn)確性可能優(yōu)于影像學(xué)檢查。因此，對(duì)于懷疑這類疾病患者,腦脊液細(xì)胞染色分類法是非常重要的早期診斷手段。當(dāng)然,后續(xù)研究進(jìn)一步增加研究的樣本量是非常必要的。

綜上所述,腦脊液的細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查無(wú)論細(xì)胞計(jì)數(shù)多少均需要進(jìn)行細(xì)胞染色分類,特別是對(duì)于懷疑轉(zhuǎn)移性癌、淋巴瘤侵犯中樞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病患者,而且細(xì)胞染色分類檢查早期診斷作用可能優(yōu)于CT/MRI檢查。