G試驗(yàn)對(duì)艾滋病患者合并真菌感染的診斷價(jià)值

曾江，彭海英，賴小菊

（贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州341000）

艾滋病（AIDS）是人體感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下所引起的一種傳染性疾病，隨著現(xiàn)代生活方式的改變，艾滋病感染者逐年增多[1]。HIV病毒感染人體后，破壞機(jī)體的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致患者抵抗力降低，極易發(fā)生各種機(jī)會(huì)性感染，而真菌感染是較為常見的感染，由于其臨床癥狀不明顯、影像學(xué)表現(xiàn)不典型，直接涂片鏡檢檢出率低以及培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等影響早期診斷，從而影響治療，病死率及致殘率較高[2,3]，因此，早期特異性的診斷對(duì)于改善預(yù)后意義重大。目前國(guó)內(nèi)外很多研究認(rèn)為，G試驗(yàn)對(duì)于真菌感染的快速診斷有較大的應(yīng)用價(jià)值,本研究旨在探討G試驗(yàn)對(duì)HIV患者合并真菌感染的臨床診斷價(jià)值,為真菌感染的早期診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 回顧性研究2017年1月至2017年12月在贛州市第五人民醫(yī)院住院疑似合并真菌感染的HIV患者31例。入組標(biāo)準(zhǔn)：⑴由贛州市疾病與預(yù)防控制中心檢測(cè)確診,并符合2011年版中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)艾滋病學(xué)組頒布的 《艾滋病診療指南》[4]。⑵臨床資料完整，且意識(shí)清楚，能與人正常交流者。所有患者中，男性19例，女性12例，年齡跨度為20~55歲。本研究所使用的病例經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)并取得所有患者知情同意并簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 真菌培養(yǎng) 收集患者的纖支鏡灌洗液進(jìn)行真菌培養(yǎng)。患者纖支鏡灌洗液標(biāo)本收集后接種于細(xì)菌培養(yǎng)瓶,常規(guī)培養(yǎng)出真菌后轉(zhuǎn)種至沙保羅培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)菌形態(tài)，并在高倍顯微鏡下進(jìn)行鑒定。

1.2.2 （1,3）-β-D葡聚糖的檢測(cè) 采集患者的靜脈血和纖支鏡灌洗液進(jìn)行G試驗(yàn)檢查，應(yīng)用丹娜（天津）生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑。⑴血標(biāo)本和灌洗液離心后取上清液作為樣品待用；⑵向微孔板標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)孔中加入60μl標(biāo)準(zhǔn)品a~e溶液制成標(biāo)準(zhǔn)曲線；⑶向微孔板樣品孔中加入20μl樣品和40μl處理液，震動(dòng)混勻后 37°C 孵育 10min；⑷向加有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的微孔板中加入100μl反應(yīng)主劑溶液，微孔板震動(dòng)5~10s后在37°C下，波長(zhǎng)405nm下進(jìn)行檢測(cè)40min，反應(yīng)結(jié)束后得出吸光度變化的平均速率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的的（1,3）-β-D葡聚糖含量。以（1,3）-β-D葡聚糖濃度＞95pg/ml判定為G試驗(yàn)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 檢驗(yàn)結(jié)果用SPSS17.0分析系統(tǒng)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理,以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)31例疑似合并真菌感染的HIV患者進(jìn)行灌洗液真菌培養(yǎng)、血G試驗(yàn)檢查以及灌洗液G試驗(yàn)檢查，見表1：真菌培養(yǎng)陽(yáng)性例數(shù)為15例，陽(yáng)性率為48.4%，其中馬爾尼菲青霉菌10例，念珠菌2例，新型隱球菌3例。血G試驗(yàn)陽(yáng)性例數(shù)為21例，陽(yáng)性率為67.7%，灌洗液G試驗(yàn)陽(yáng)性例數(shù)為23例，陽(yáng)性率為74.2%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，血G試驗(yàn)陽(yáng)性率高于真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.123），灌洗液G試驗(yàn)陽(yáng)性率高于真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.037），兩種G試驗(yàn)方法相比較，灌洗液G試驗(yàn)的陽(yáng)性率高于血G試驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.576）。

表1 真菌培養(yǎng)與G實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性率比較

3 討論

艾滋病是嚴(yán)重危害人民群眾健康的公共衛(wèi)生問題，我國(guó)AIDS疫情嚴(yán)峻，流行范圍較廣，且越來越年輕化，已經(jīng)嚴(yán)重影響到國(guó)家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)穩(wěn)定[5]。艾滋病病毒感染人體后，大量破壞CD4+T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致機(jī)體免疫力低下，從而使人體因喪失對(duì)各種疾病的抵抗能力而發(fā)病[1]。由于艾滋病患者免疫力低下，極易合并病毒、細(xì)菌、真菌等多種病原菌感染，且通常伴有二重或多重感染，因此艾滋病合并真菌感染患者臨床癥狀多表現(xiàn)為非特異性，易被誤診或漏診[6]。臨床上常用的真菌感染的確診方法有賴于真菌培養(yǎng)，該方法不僅能明確病原菌，還能做相應(yīng)的藥敏檢測(cè)。雖然其診斷準(zhǔn)確，因其耗時(shí)長(zhǎng)，無(wú)法在感染早期做出診斷，從而延誤治療。因此，找出一種快速，靈敏及特異的真菌感染的檢查方法尤為重要。

G試驗(yàn)檢測(cè)是真菌細(xì)胞壁的多糖成分 （1,3）-β-D葡聚糖，作為真菌抗原成分具有較高特異性的（1,3）-β-D葡聚糖，廣泛存在于除隱球菌和接合菌（毛霉菌）以外的所有真菌細(xì)胞壁中。當(dāng)巨噬細(xì)胞吞噬或消化侵入人體組織或血液中的真菌后，（1,3）-β-D葡聚糖就能持續(xù)釋放進(jìn)入血液或其他體液，極易被檢測(cè)出來[7,8]。而在淺部真菌感染中，（1,3）-β-D葡聚糖不被釋放,其血液濃度也不高，因此臨床將血液或其他體液中檢測(cè)到的 （1,3）-β-D葡聚糖作為深部真菌感染的標(biāo)志[9,10]。本研究結(jié)果顯示,血G試驗(yàn)和灌洗液G試驗(yàn)的陽(yáng)性率都高于真菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率,表明G試驗(yàn)的敏感性高于真菌培養(yǎng)，而灌洗液G試驗(yàn)的陽(yáng)性率高于血G試驗(yàn)。可能由于本研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較少,血G試驗(yàn)與真菌培養(yǎng)之間以及兩種G試驗(yàn)方法之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

真菌培養(yǎng)是真菌鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，但真菌培養(yǎng)也存在假陰性。同樣，G試驗(yàn)也存在一定的假陰性，本研究中有1例真菌培養(yǎng)陽(yáng)性的患者血G試驗(yàn)和灌洗液G試驗(yàn)都陰性,可能是因?yàn)檫@類真菌數(shù)量較少，經(jīng)巨噬細(xì)胞吞噬、消化后，（1,3）-β-D 葡聚糖從細(xì)胞壁釋放太少有關(guān)[9,11]。當(dāng)然，G試驗(yàn)也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,分析原因包括：靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；接受香菇多糖和以真菌為原料制成的抗菌藥物；鏈球菌血癥；血液透析者1周內(nèi)進(jìn)食真菌類食物等，都會(huì)造成（1,3）-β-D葡聚糖的假陽(yáng)性[12,13]，因此，檢測(cè)時(shí)要排除這些干擾。

綜上所述,真菌培養(yǎng)法雖然為真菌感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但因其培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，培養(yǎng)陽(yáng)性率低，不能區(qū)分定植菌、感染菌和污染菌，且感染初期不容易取得陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果[14,15]，因此影響了艾滋病合并真菌感染的早期診斷。而G試驗(yàn)作為一種輔助診斷方法，有較高的敏感性,主要是檢測(cè)時(shí)間短，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的不足,為艾滋病合并真菌感染的早期診斷和早期治療提供了條件,改善患者預(yù)后。