APR3蛋白在卵巢上皮腫瘤組織內的表達特點及臨床意義

相元翠，栗浩然，劉會敏，王雅莉

（鄭州大學附屬鄭州中心醫院婦產科，河南 鄭州450000）

卵巢癌的發生率具有一定的上升趨勢，流行病學研究證實，我國部分地區2010-2017年卵巢癌的平均發病率可達273～492/10萬人左右[1]。臨床上卵巢癌的發生能夠導致患者高腫瘤負荷表現，影響患者的生活質量和生存預后水平[2]。

在探討卵巢癌的發生病因的過程中可以發現，不同的腫瘤相關蛋白的表達，能夠影響到卵巢生發上皮細胞的生物學特征,進而影響到了卵巢癌的發生過程。凋亡相關蛋白3（APR3）是凋亡調控家族的重要成員，APR3的表達能夠通過抑制癌細胞的凋亡，降低癌細胞程序性凋亡的比例，進而促進癌細胞的持續性擴增過程。同時APR3的表達還能夠影響癌細胞的細胞周期,導致上皮細胞周期調控的紊亂[3]。部分研究者探討了APR3在乳腺癌或者甲狀腺癌患者中的表達情況，認為APR3的表達陽性率的上升與乳腺癌患者的臨床預后的惡化密切相關[4,5]，但對于APR3蛋白的表達與卵巢癌的關系研究不足。為了揭示APR3與卵巢癌的發生關系,從而為臨床上卵巢癌患者的診療和預后評估提供理論方面的參考,本次研究選取我院2011年1月至2015年3月收集的卵巢上皮癌組織94例，探討了APR3蛋白的表達情況，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2011年1月至2015年3月收集的卵巢上皮癌組織94例（卵巢癌組）、卵巢良性腫瘤組織60例（對照組）。

卵巢癌組,年齡 36～67歲,平均為 53.5±9.5歲，分化程度：高分化28例、中分化44例、低分化32例；FIGO分期：Ⅰ期23例、Ⅱ期37例、Ⅲ期22例、Ⅳ期8例；發生淋巴結轉移42例。對照組，年齡38～65歲，平均為55.0±10.2歲，其中漿液性囊腺瘤32例、粘液性囊腺瘤21例、畸胎瘤7例。兩組患者的年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：⑴卵巢癌的診斷標準參考人民衛生出版社第八版《婦產科學》中的標準；⑵經病理學檢查證實；⑶患者接受了隨訪觀察；⑷在獲取標本前，患者未接受放化療及免疫治療；⑸本研究獲得醫院醫學倫理委員會的批準。

排除標準：⑴伴有其他類型的惡性腫瘤；⑵資料缺失、無法進行統計分析；⑶精神疾病患者；⑷免疫疾病。

1.2 免疫組化染色檢測方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片,厚度約為4μm,采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法(strep avidin—biotin complex,SABC法)染色,二氨基聯苯胺(diamionben zidene,DAB)顯色。APR3蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照,高倍顯微鏡下觀察APR 3蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 免疫組化判斷標準 免疫組化結果判定：APR3蛋白的陽性著色表達于細胞漿，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽性；總分<3 分：“-”表達；為 3～5 分，“+”表達；為 6～9 分，“++”表達；>9 分，“+++”表達。

2 結果

2.1 兩組標本中的APR3蛋白陽性表達率比較 卵巢癌組中的APR3蛋白陽性表達率69.15%顯著高于對照組的28.33%,差異具有統計學意義 （P<0.05）；見表 1。

表1 兩組標本中的APR3蛋白陽性表達率比較

2.2 不同病理學特征的卵巢上皮癌患者APR3蛋白陽性表達率比較 低分化、FIGO分期 （Ⅲ期、Ⅳ期）、發生淋巴結轉移、伴有腹水的卵巢癌組織中的APR3蛋白陽性表達率均高于高中分化、FIGO分期（Ⅰ期、Ⅱ期）、未發生淋巴結轉移、不伴有腹水的上皮卵巢癌組織,差異具有統計學意義 （P<0.05）；見表 2。

2.3 APR3蛋白表達與上皮性卵巢癌患者預后的關系分析 94例上皮卵巢癌患者，隨訪36個月,失訪7例,死亡59例、存活28例，3年存活率為32.18%；采用Cox比例風險回歸模型分析,低分化、FIGO分期增高、發生淋巴結轉移、APR3蛋白陽性表達是上皮卵巢癌患者不良預后的獨立危險因素（P<0.05）；見表 3。

3 討論

卵巢生發上皮細胞的持續性病變,能夠顯著促進不同類型來源的卵巢惡性腫瘤的發生,特別是在合并有家族史的患者中,卵巢癌的發生風險更高，治療后的生存時間或者五年生存率等指標更差[6]。現階段臨床上手術及放化療等綜合性措施治療后，卵巢癌患者的病情緩解率仍然不足35%，治療后的無瘤生存時間不足32個月[7,8]。另外，現階段臨床上缺乏對于卵巢癌血清學診斷的可靠性指標,雖然CA125或者人附睪蛋白的檢測能夠提高卵巢癌的血清學診斷水平,但其診斷的總體靈敏度仍然較低。而本次研究對于卵巢癌患者體內APR3蛋白水平的研究，具有下列幾個方面的現實價值：⑴能夠為臨床上卵巢癌的免疫靶向性治療提高新的研究靶點;⑵能夠為臨床上卵巢癌的早期血清學診斷提供理論依據。

表2 不同病理學特征的卵巢上皮癌患者APR3蛋白陽性表達率比較

表3 Cox比例風險模型分析結果

APR3蛋白作為凋亡相關因子，其四級空間結構上包含了多個糖蛋白配體區域,其能夠通過結合癌細胞膜上的跨膜受體,進而影響癌細胞內的信號通路的激活[9]。APR3蛋白對于癌細胞內的AKT信號通路的激活,能夠顯著促進癌細胞轉錄活性的加強，抑制了癌細胞的凋亡。APR3還能夠通過直接結合癌細胞核周邊轉錄基因,降低了癌細胞內染色體末端端粒結構的穩定性,導致癌細胞凋亡比例明顯的下降[10]。基礎方面的研究也認為，APR3蛋白的表達能夠導致癌細胞的生物學特征的改變，增加了癌細胞的浸潤和粘附能力[11]。部分研究者探討了APR3蛋白在卵巢癌患者中的表達情況,認為APR 3蛋白表達陽性率可明顯的上升,但缺乏對于APR 3蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系研究。

本次研究對于卵巢癌患者體內的APR3蛋白分析研究可見，APR3蛋白在卵巢癌患者中的表達陽性率明顯的上升，高于卵巢良性組患者，差異較為明顯，提示了APR3蛋白的高表達可能參與到了卵巢癌的發生發展過程。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要由于APR3蛋白的下列幾個方面的作用有關[12-14]：⑴APR3蛋白的上升能夠導致癌系G1/S期細胞比例的上升,提高了癌細胞快速跨越G0期的能力；⑵APR3蛋白陽性率的上升，還能夠提高癌細胞的凋亡風險,促進卵巢干細胞持續性自我增殖的能力。Kurata S等[15]研究者也認為，在卵巢癌病灶組織中，APR3蛋白的表達陽性率可平均上升35%以上,特別是在合并有明顯的腹水或者高腫瘤負荷表現的患者中，APR3蛋白表達陽性率的上升更為明顯。對于APR3蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系研究可見,發生了淋巴結轉移、臨床分期較晚、細胞分化程度較差或者合并有明顯的腹水的患者中，APR3蛋白的表達陽性率可明顯的上升，提示APR3蛋白的表達與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要由于APR3蛋白的表達能夠促進癌細胞對于盆腔內淋巴結內皮細胞的粘附,并能夠導致癌細胞浸潤盆腔內臟器組織能力的增強。但部分研究者并不認為APR3蛋白的表達與卵巢癌患者盆腔內淋巴結轉移有關，認為APR3蛋白的表達只與卵巢癌患者的臨床分期相關，存在相關的臨床結論的差別，主要考慮與卵巢癌患者的病情差別較大、APR3蛋白檢測靈敏度的不同有關。對于卵巢癌患者臨床預后的分析可見,低分化、FIGO分期增高、發生淋巴結轉移、APR3蛋白陽性表達是上皮卵巢癌患者不良預后的獨立危險因素，提示APR3蛋白與卵巢癌患者的臨床預后密切相關，推測這主要由于APR3能夠參與卵巢癌的遠期復發和轉移過程,進而影響卵巢癌的臨床預后水平。

綜上所述，在卵巢癌患者病灶組織中，APR3蛋白的表達的明顯的上升，同時APR3蛋白的表達與卵巢癌患者的臨床病理特征和臨床預后密切相關。