化學發光免疫分析法與酶聯免疫法檢測艾滋病病毒抗體的效果比較

李永剛, 李 寧, 易福凌

(陜西省西安市第一醫院, 檢驗科, 陜西 西安, 710002)

艾滋病(AIDS)是危害極大的傳染病，由感染人類免疫缺陷病毒(HIV)引起，HIV可攻擊機體免疫系統，大量破壞淋巴細胞，使患者喪失免疫功能，從而更易感染各類疾病，病死率較高[1]。AIDS傳播速度快、潛伏期長、危害范圍廣，采取有效方法診斷及監測HIV對控制病毒傳播、指導治療及判斷預后意義重大[2]。檢測HIV抗體是判斷HIV感染的重要指標，國內現階段初篩HIV主要應用雙抗體夾心法，其中酶聯免疫吸附法(ELISA)操作復雜、檢測周期長，而電化學發光免疫法(ECLIA)具有簡便、快捷的優勢[3]。本研究比較ELISA與ECLIA篩查HIV抗體的效果，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 血樣來源

選取2017年1月—2018年6月本院進行HIV檢測的血液樣本12 457份。受檢者男7 218例，女5 239例; 年齡18～60歲，平均(31.27±7.09)歲。

1.2 儀器與試劑

ELISA應用Bio- Rad 680型酶標儀及新創試劑; ECLIA應用Caris 200電化學發光全自動免疫分析儀及其配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 ELISA檢測: 將待檢血液以800 轉/min離心，分離血清，嚴格按照HIV抗體檢測試劑盒說明進行操作。取出酶標板，設置3孔陽性對照、2孔陰性對照、1孔空白對照、1孔樣品，并進行標記。每孔(除空白孔)分別加對應陽性、陰性對照品及樣品各100 μL。孵育(30min)、洗板(6次)、拍干。每孔(除空白孔)加酶標記抗原100 μL, 再次孵育(20 min)、洗板(6次)、拍干。加底物液，避光反應15 min后加終止液終止反應。應用酶標儀讀取各孔吸光度(OD)值, cut- off值=陰性對照OD均值+0.1, 樣品OD值>cut- off值為陽性。

1.3.2 ECLIA檢測: 將待測樣品與生物素抗HIV- 1p24單克隆抗體孵育成抗原- 抗體復合物，應用磁石收集磁微粒，除去未反應物質，加抗HIV抗原[經堿性磷酸酶(ALP)標記]與磁微粒的HIV抗體反應，再次應用磁石收集磁微粒，除去未反應物質，加入發光底物攪拌，分散磁微粒，添加清洗劑。檢測復合物發光強度，計算cut- off值。

2 結 果

2.1 檢測陽性率

12 457份血樣中, ELISA檢出陽性標本35份，檢測陽性率為0.28%; ECLIA檢出陽性標本32份，檢測陽性率為0.26%; 經HIV確認中心檢測確認共30份陽性。ELISA與ECLIA檢測HIV抗體陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 符合情況

ELISA檢出陽性血樣的OD/CO值(CO為cut- off值)多在1.35～1.80范圍內(P<0.05), 占全部陽性檢出標本的62.86%(22/35), 且ELISA的OD/CO值越大，與確認結果的符合率越高; ECLIA檢出陽性血樣的cut- off值多在150.00～220.00(P<0.05), 占全部陽性檢出標本62.50%(20/32), 且ECLIA的cut- off值越大，與確認結果的符合率越高。見表1、2。

表1 ELISA檢測結果與確認結果符合情況

與OD/CO值1.35～1.80比較, *P<0.05。

表2 ECLIA檢測結果與確認結果符合情況

與cut- off值150.00～220.00、220.00～300.00比較, *P<0.05。

3 討 論

國內AIDS篩查的主要方法是血清病毒抗體檢測，同時輔之以病毒及抗原檢測，其中HIV抗體檢測是診斷AIDS的重要指標。多數HIV感染可持續終生，且HIV潛伏期較長，AIDS患者發病前可無癥狀地生活多年[4]。ELISA及ECLIA均是中國檢測HIV的常用方法，本研究比較2種檢測方法在HIV抗體檢測中的效果。研究結果顯示, ELISA檢出陽性標本35份，檢測陽性率為0.28%; ECLIA檢出陽性標本32份，檢測陽性率為0.26%; 2種方法檢測陽性率無顯著差異。

ELISA是將抗原或抗體吸附于固相載體表面并應用酶標記抗原抗體反應的技術，具有載體易于標準化等優點[5]。但ELISA需分離游離抗原、抗體及結合態抗原、抗體，需反復加樣、洗板，操作步驟繁瑣，造成誤差的概率較大，且酶標板的孔間差異也可導致變異系數增高，增加了臨床診斷難度[6]。研究[7]指出，對于低濃度HIV標本, ELISA可因靈敏度低等原因造成假陰性。ECLIA是電化學發光、免疫測定相結合的技術，包含磁性微珠包被、生物素- 親和素技術等多種先進技術，具有靈敏度高、可自動化、線性范圍寬、標記物有效期長等優點，可大幅度提高HIV抗體檢測準確率[8-9]。

本研究應用羅氏Caris 200電化學發光全自動免疫分析儀，實現了檢測自動化、標準化，有助于降低批內、批間誤差。本研究中2種檢測方法檢測的陽性血樣經HIV確認中心確認后有30份為陽性。ELISA檢出陽性血樣的OD/CO值多在1.35～1.80范圍內, ECLIA檢出陽性血樣的cut- off值多在150.00～220.00范圍內，且隨ELISA、ECLIA檢測的OD/CO值或cut- off值增大，與確認結果的符合率越高。在較低濃度下, ECLIA檢測HIV抗體與確認結果的符合率較ELISA更高，提示ECLIA檢測HIV抗體準確率優于ELISA, 與韓春俐等[10]研究結論一致。

ECLIA包括電化學反應及化學發光過程，標記抗原與抗體發生特異性結合后啟動電發光過程，且電化學反應、化學發光過程可循環進行，因此ECLIA具高靈敏性特點[11]。本研究中, ECLIA測定在封閉的流動系統中進行，有效降低交叉污染，同時保證了試劑的穩定性，測定結果準確可靠。ECLIA完成僅需20 min左右，而ELISA需1～2 h方可出結果, ECLIA較ELISA大幅縮短了初篩時間，有助于提高臨床工作效率。研究[12]提出ECLIA較傳統抗體分析法可提前發現HIV感染，縮短診斷窗口期。ELISA的優點眾多，但其成本相對較高，基層醫院較難普及，同時任何檢測方法均無法完全排除樣本品不存在低濃度抗體，ECLIA檢測陰性同樣不能完全排除HIV感染的可能性，臨床應用需結合多方面情況考慮。