支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平及其與氧化應激、哮喘控制效果的關系

洪友明，常佳軍，莫慧超

(深圳市龍華區中心醫院兒內科，廣東深圳 518000)

因受環境污染加劇及過敏性疾病日益增多的影響，我國小兒支氣管哮喘的發病率呈逐年升高趨勢[1]。該病主要是由變應原和肥大細胞、嗜酸性粒細胞等相互作用，引起一系列炎性介質釋放，導致氣道高反應的發生，從而促進氣道平滑肌收縮與黏液分泌增多，最終導致患兒出現反復喘息，且伴有不同程度的咳嗽與胸悶等癥狀，對患兒的生活質量造成了極大的影響[2]。隨著近年來相關研究的逐漸深入，越來越多的學者發現氧化應激狀態可能和哮喘存在密切相關，其可能通過促進細胞膜脂質過氧化及下調膜流動性的途徑，促進氣道的氧化損傷[3]。顆粒蛋白前體屬于促炎脂肪因子之一，廣泛表達于神經細胞、上皮細胞、巨噬細胞、軟骨細胞、脂肪組織及免疫細胞中，具有多種生理功能，在自身免疫性疾病、神經退行性疾病及腫瘤疾病的發生、發展過程中起著至關重要的作用[4]。然而，目前臨床上關于顆粒蛋白前體與支氣管哮喘患兒氧化應激狀態、哮喘控制效果關系的相關研究并不多見。鑒于此，本文通過研究支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平及其與氧化應激、哮喘控制效果的關系，旨在為支氣管哮喘患兒的臨床治療及預后評估提供新的靶點和思路，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年2月至2018年8月本院收治的支氣管哮喘患兒140例作為觀察對象，其中包括發作期75例與緩解期65例。納入標準：(1)年齡2～9歲；(2)均符合1998年全國兒科哮喘防治協作組制定的《兒童哮喘防治常規》[5]中所制定的相關診斷標準；(3)入院前均未接受相關治療；(4)所有患兒均存在明顯的反復發作性咳嗽、呼吸困難及喘鳴等癥狀。排除標準：(1)心、肝、腎等重要臟器存在病變者；(2)無法正常交流溝通或伴有精神疾病者；(3)正參與其他研究者。發作期組男性42例，女性33例，年齡2～9歲，平均年齡(5.23±1.05)歲；身高38～148 cm，平均身高(89.34±7.52)cm，體質量15.2～41.5 kg，平均體質量(26.38±6.49)kg；緩解期組男性38例，女性27例，年齡2～9歲，平均年齡(5.28±1.07)歲，身高34～150 cm，平均身高(89.55±7.58)cm，體質量15.1～41.7 kg，平均體質量(26.41±6.52)kg。另取同期于本院接受體檢的健康兒童60例作為健康對照組，男性34例，女性26例，年齡2～9歲，平均年齡(5.24±1.08)歲；身高41～142 cm，平均身高(89.19±7.44)cm，體質量15.0～41.8 kg，平均體質量(26.44±6.45)kg。3組在一般資料方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有兒童父母已知情同意，且醫院倫理委員會予以批準。

1.2方法

1.2.1標本采集 3組人員入院后均采集次日清晨空腹靜脈血5 mL，放于室溫下靜置30 min，以3 000 r/min的速率進行離心10 min，分別取血漿及血清保存于-80 ℃的冰箱中備用。

1.2.2采集方法 采用酶聯免疫吸附法檢測3組人員的血漿顆粒蛋白前體水平：具體操作嚴格根據試劑盒說明書進行，相關試劑盒由上海酶聯生物科技有限公司提供。

1.2.3氧化應激指標水平檢測 相關指標主要采用水溶性四唑鹽法(WST)、比色法與微板法檢測丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平：具體操作務必根據相關流程進行，保障質控符合實驗室標準。

1.3觀察指標 分別對比3組人員血漿顆粒蛋白前體表達水平，各項氧化應激指標水平。

2 結 果

2.13組人員血漿顆粒蛋白前體表達水平對比 急性期組、緩解期租、健康對照組血漿顆粒蛋白前體表達水平分別為(213.87±53.89)、(188.64±50.13)、(170.25±47.07)ng/mL，呈逐漸降低趨勢，差異有統計學意義(F=6.832,P<0.05)。

2.23組人員各項氧化應激指標水平對比 急性期組、緩解期組、健康對照組MDA水平呈逐漸降低趨勢；急性期組、緩解期組、健康對照組SOD、GSH水平呈逐漸升高趨勢，差異有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 3組人員各項氧化應激指標水平對比

注：與健康對照組比較，#P<0.05；與緩解期組比較，*P<0.05

2.3支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平與各項氧化應激指標水平的相關性分析 經Pearson相關性分析可得：支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平與MDA呈正相關關系，與SOD、GSH水平呈負相關(均P<0.05)。見表2。

表2 支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平與各項氧化應激指標水平的相關性分析

3 討 論

顆粒蛋白前體屬于脂肪因子之一，表達于脂肪組織，可通過調節白細胞介素-6信號通路參與高脂誘導的胰島素抵抗，從而增加了糖尿病及肥胖的發生風險[6-8]。隨著近年來相關研究的不斷深入，有學者發現顆粒蛋白前體屬于腫瘤壞死因子受體新配體，可通過與腫瘤壞死因子受體的胞外域結合，阻斷由腫瘤壞死因子α介導的核因子激活的B細胞的κ-輕鏈增強信號通路，發揮明顯的抗炎作用[9-11]。迄今為止，國內尚無關于顆粒蛋白前體與支氣管哮喘關系的相關研究，本文通過研究支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平及其與氧化應激及哮喘控制效果的關系，目的在于彌補國內小兒支氣管哮喘在上述方面的空白，同時為支氣管哮喘的治療提供新靶點[12]。

本文結果顯示急性期組、緩解期組、健康對照組血漿顆粒蛋白前體表達水平呈逐漸降低趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)。這表明了顆粒蛋白前體在支氣管哮喘患兒血漿中存在明顯高表達，且隨著患兒病情的不斷加重，其表達水平隨之升高。提示了在臨床工作中可能通過對顆粒蛋白前體表達水平進行檢測，從而有助于判斷支氣管哮喘患兒的臨床治療效果，繼而為臨床治療方案的調整提供理論依據。分析原因，筆者認為顆粒蛋白前體具有明顯的抗炎作用，其主要機制可能與以下幾點有關[13-15]：(1)通過和腫瘤壞死因子-α競爭腫瘤壞死因子受體2，從而阻斷了腫瘤壞死因子-α的信號通路；(2)通過調節白細胞介素-10信號通路，從而抑制腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-6等促炎因子的表達，進一步發揮抗炎作用。而炎性反應在支氣管哮喘的發生、發展過程中起著至關重要的作用。因此，筆者認為顆粒蛋白前體可能是通過影響機體內炎性反應，繼而介導支氣管哮喘的發生、發展。此外，急性期組、緩解期組、健康對照組MDA水平呈逐漸降低趨勢；急性期組、緩解期組、健康對照組SOD、GSH水平呈逐漸升高趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)。這與劉慧芳等[16]的研究報道相一致，說明了支氣管哮喘患兒存在明顯的氧化應激反應，且哮喘控制效果越好，氧化應激程度越低。究其原因，筆者認為MDA屬于膜脂質過氧化的主要產物之一，SOD則是重要的酶性抗氧化劑，谷胱甘肽屬于蛋白類抗氧化劑，三者均是臨床上應用較為廣泛的反映機體氧化應激狀態的敏感指標。而支氣管哮喘患兒普遍存在不同程度的炎性反應，其中炎性因子所引發的氧化應激會導致機體內氧化與抗氧化平衡被打破，加之ROS可通過損害線粒體繼而使得膜電位失衡，引起線粒體超微結構和呼吸鏈膜蛋白復合體蛋白的破壞，進一步使得線粒體功能異常，最終加重哮喘炎癥反應[17-21]。因此，氧化應激可能是參與支氣管哮喘發病的重要因素之一，值得進行更深入的研究。經Pearson相關性分析顯示：支氣管哮喘患兒血漿顆粒蛋白前體表達水平與MDA呈正相關(r=0.477,P=0.011)，與SOD、GSH水平呈負相關(r=-0.523、-0.581,P=0.000、0.000)。這提示了血漿顆粒蛋白前體表達水平與支氣管哮喘患兒的氧化應激狀態存在密切相關，即隨著血漿顆粒蛋白前體表達水平的不斷升高，患者氧化應激反應越明顯。其中主要原因可能與顆粒蛋白前體、氧化應激均與炎癥反應的發生存在密切相關有關。

4 結 論

綜上所述，血漿顆粒蛋白前體在支氣管哮喘患兒血漿中存在明顯高表達，且隨著哮喘控制效果的不斷提升，其表達水平隨之下降。同時，顆粒蛋白前體表達水平與支氣管哮喘患兒的氧化應激狀態存在密切相關，可作為臨床評估患兒氧化應激反應嚴重程度的有效指標之一。