健體酒的安全性評價研究

張成香，李世芬，環 飛，嚴 婷，朱雪峰

（南京醫科大學江蘇省醫藥農藥獸藥安全評價與研究中心，公共衛生學院，江蘇南京 211166）

人參、黃精、馬鹿茸、淫羊藿等是我國傳統的中藥材，它們的化學成分非常復雜，且具有增強體質的功能。健體酒以人參、馬鹿茸、黃精、淫羊藿等為主要原料研制而成。按照我國衛生部《保健食品檢驗與評價技術規范》 （2003年版） 的要求，對受試物進行安全性毒性試驗，為進一步研究提供了試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和受試物

受試物是健體酒，它的人體推薦劑量為6 mL/人/日（16.7倍濃縮液，體重按60 kg計）；清潔級小鼠，揚州大學比較醫學中心提供，生產許可證號SCXK（蘇） 2012-0004，合格證編號201601435；清潔級SD大鼠，上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，生產許可證號SCXK（滬） 2013-0016，合格證編號2008001660090。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性經口毒性

用最大耐受量（MTD）法行小鼠急性毒性試驗，設計劑量為25.200 g/kg·bw。動物檢疫3 d，試驗前動物禁食16 h，可自由飲水。樣品直接采用16.7倍濃縮液進行灌胃，樣品比重為1.26，按最大灌胃量（20 mL/kg·bw），一次性給樣，受試物給予劑量為25.200 g/kg·bw。給樣后連續觀察14 d，觀察小鼠中毒表現及死亡情況。

1.2.2 遺傳毒性試驗

（1） Ames試驗。鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102為試驗模型。活化系統是多氯聯苯誘導的大鼠肝S-9。S-9以5 000，1 000，200，40，8 μg/皿5組活化并試驗，每個劑量組重復6次，采用平板摻入法。

（2）小鼠骨髓細胞微核試驗。試驗取用60只成年健康ICR小鼠，按體重隨機分為6組，每組10只，雌雄各半。受試物按15%乙醇的酒基配制，高、中、低劑量組分別含受試物（預處理濃縮液）質量分數為100%，50%，25%，以10 mL/kg·bw灌胃，使用30 h給受試物法。30 h后，常規制片，固定染色。每只鼠統計200個嗜多染紅細胞和成熟紅細胞數（NCE），并計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞比值（PCE/NCE）。

（3） 小鼠精子畸形試驗。選取體重25～35 g ICR種的清潔級性成熟雄性小鼠30只，適應環境3 d后進行試驗。隨機分為6組，每組5只小鼠。受試樣品用15%乙醇的酒基配制，低、中、高劑量組分別含受試樣品（預處理濃縮液） 質量分數為25%，50%，100%，以10 mL/kg·bw連續5 d灌胃，每天1次。于第35天處死小鼠，制備精子涂片并計算小鼠精子畸形發生率。

1.2.3 30 d喂養試驗

SD大鼠100只隨機分為5組，每組20只，雌雄各半。根據受試樣品供應方提供的人體推薦劑量，分為3.0，6.5，10.0 mL/kg這3個劑量組，另設空白對照組（0 mL/kg，無菌水） 和溶劑對照組（0 mL/kg，含15%乙醇酒基）。試驗30 d期間，動物可自由飲水進食，每天至少觀察動物1次，每周稱重1次、檢測2次食物攝入量。30 d后，處死試驗大鼠，并行常規血液學檢查和血液生化學檢查。取腎臟、肝臟、脾臟、卵巢或睪丸等臟器，計算臟器系數；取高劑量及對照組的大鼠脾臟、肝臟、胃、腎臟、十二指腸、睪丸或卵巢，組織固定后制成石蠟切片行組織病理學檢查。

1.2.4 統計分析方法

統計軟件為SPSS23.0，微核試驗結果采用Poisson分布U檢驗統計。滿足方差齊要求的數據，用單因素方差分析方法中的多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法統計；非正態分布或方差不齊的數據，進行變量轉換后統計；仍然不齊則用秩和檢驗進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 小鼠急性毒性試驗

健體酒雌、雄性小鼠急性經口MTD＞25.2 g/kg·bw，根據急性毒性劑量分級標準，該樣品屬于無毒級。

2.2 小鼠Ames試驗

該受試樣本對鼠傷寒沙門氏菌TA97，TA98，TA100，TA102這4株試驗菌株，在加與不加活化系統S-9的情況下，均未見致基因突變的作用，即污染物致突變性檢測（Ames試驗）結果為陰性。

2.3 小鼠骨髓微核試驗

受試樣品的各劑量組微核率與陰性對照組相比，無顯著差異（p＞0.05），而陽性對照組則顯著高于陰性對照組（p＜0.01）。未見健體酒對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核形成及嗜多染紅細胞與成熟紅細胞比值（PCE/NCE） 產生影響。

2.4 小鼠精子畸形試驗

各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較，無顯著差異（p＞0.05），而陽性對照組的小鼠精子畸形率較陰性對照組有顯著提高（p＜0.01）。因此，受試物對小鼠精子畸形率不產生影響。

2.5 大鼠30 d喂養試驗

2.5.1 健體酒對大鼠體重的影響

受試樣品各劑量組雌、雄大鼠的體重增長情況良好，與對照組比較均無顯著差異。各劑量組雌、雄大鼠的增重、進食量及食物利用率與對照組比較差異均無顯著性。結果表明，該健體酒對大鼠體重增長、進食量及食物利用率均未見明顯影響。

2.5.2 健體酒對大鼠血液和血生化的影響

受試樣品各劑量組大鼠的血液生化學指標均在正常參考范圍內，與對照組比較，均無統計學差異（p＞0.05）。

健體酒對大鼠血液學指標的影響（X±SD） 見表1，健體酒對大鼠部分血生化的影響（X±SD）見表2。

2.5.3 健體酒對大鼠臟器絕對重量及相對重量的影響

各劑量組的各項指標與0 mL/kg·bw/d（溶劑對照組） 比較，均無統計學差異（p＞0.05）。空白對照組與溶劑對照組比較，差異無統計學意義（p＞0.05）。

健體酒各組大鼠臟器絕對質量及相對質量（X±SD） 見表 3。

2.5.4 病理學檢查

試驗各組大鼠整體解剖均未見結構異常。顯微鏡觀察結果顯示，未見由該受試樣品引起的腎、肝、胃、脾、十二指腸、睪丸或卵巢臟器毒性病理性改變。

因此，在試驗條件下，大鼠30 d喂養試驗各項指標均無異常，給予動物人體推薦劑量100倍的健體酒，未觀察到有害作用。

3 結論

健體酒是按一定比例將人參、馬鹿茸、淫羊藿等提取物混合研制而成。人參是多年生的草本植物，味甘微苦性溫，是中藥中的珍品。人參皂苷為人參的主要活性成分，已被證明有提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降低血糖、健胃、保護心血管等功能[1-5]，且適合長期服用。已有的研究證明，鹿茸含有多種人體必需的氨基酸、磷脂及微量元素[6]。鹿茸血酒可增加有氧代謝能力和乳酸代謝，并增加肝糖原的儲備量。鹿茸血酒的抗疲勞作用與肝糖原的儲備直接相關。肝糖原儲備的增加可在較長時間里維持血糖水平，從而為機體提供更多的能量。在進行劇烈體力活動后，鹿茸血酒可降低糖原的消耗利用，進而增強體能和耐力，緩解體力疲勞[7]。淫羊藿含有多糖、黃酮類、萜類化合物及微量元素等多種活性物質，具有強筋骨、補腎壯陽、祛風除濕的功效。已有文獻表明，淫羊藿苷對于提高大鼠運動能力有促進作用[8]，且具有調節細胞增殖、抗腫瘤、防治骨質疏松等作用[9-11]。

表1 健體酒對大鼠血液學指標的影響（X±SD）

表2 健體酒對大鼠部分血生化的影響（X±SD）

表3 健體酒各組大鼠臟器絕對質量及相對質量（X±SD）

小鼠急性毒性試驗是評價藥物安全性的一項重要指標，污染物致突變性檢測（Ames試驗）、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗是評估遺傳毒性試驗的重要指標，而大鼠30 d喂養試驗則用來評估受試物的短期毒性[12-14]。結果表明，健體酒屬于無毒級，同時未觀察到有致突變作用，30 d喂養對大鼠各觀察指標均未產生明顯影響。因此，在推薦劑量內服用健體酒是安全可靠的，該產品在保健食品開發領域具有較好的前景。