艾絨的質量評價標準及其商品分級研究*

武 娟，萬定榮 △，趙百孝 ，陳 熙 ，江遠明 ，周 勝 ，徐滌新 ，徐 燃

（1.中南民族大學藥學院，湖北 武漢 430074； 2.北京中醫藥大學中醫學院，北京 100029； 3.湖北省蘄春縣市場監督管理局，湖北 蘄春 435300； 4.湖北輕工大學生物與制藥工程學院，湖北 武漢 430048）

艾灸療法是中醫傳統治療方法，具有溫通經脈、調和氣血、協調陰陽、扶正祛邪［1］的功效，廣泛用于治療疾病和康養保健。艾絨是菊科植物艾Artemisia argyiLévl.et Vent.的干燥葉經粉碎過篩制得的細軟絨狀物，常被加工制成艾條等灸用制品，用于艾灸治療與保健。艾絨的質量對艾灸療法的臨床效果至關重要。目前普遍認為，在一定范圍內艾絨純度越高，艾灸制品質量越好。商品艾絨的純度通常用多少kg艾葉可制成1 kg艾絨，即葉絨比來表示。但目前不同廠家的葉絨比標示多有虛夸成分，廠家間的比例標示也不統一；同時市場上時有用質次（低葉絨比）艾絨虛充優質（高葉絨比）艾絨，更有用五月艾Artemisia indicaWilld的葉等混偽品及艾莖稈等低劣原料混淆加工制作艾絨的現象。本研究中對不同純度或質量規格的正品艾絨進行了性狀、顯微、薄層色譜鑒別及主要化學物質（揮發油、黃酮類［2-4］）的含量測定，并通過與偽劣品比較，建立了艾絨質量評價標準，確定了經代表性艾絨生產廠家及艾灸師認同的艾絨等級分類。現報道如下。

1 儀器、藥材與試藥

1.1 儀器

CX41型顯微鏡（日本Olympus公司）；UV-1800PC型紫外-可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；揮發油提取器（武漢杰恒達工貿有限公司）；98-1-B型電子調溫電熱套，101-0AB型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 藥材

艾絨藥材共47批，從湖北、河南、寧夏、江蘇、山東、江西等省區收集或購買，樣品來源見表1（括號內比值為葉絨比，系各廠家或公司自行標注）。五月艾Artemisia indicaWilld原料樣品2批，自采于湖北建始縣和武漢市郊，由中南民族大學藥學院萬定榮教授鑒定。

1.3 試藥

硅膠G（青島海洋化工廠）；芹菜素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 11901-201102，含量99.6%）；氧化石竹烯對照品（天津一方科技有限公司，Lot：AB671C）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 性狀和顯微鑒別

2.1.1 方法

按2015年版《中國藥典（一部）》規定進行鑒別。其中顯微計量或計數時，觀察取樣量為1.0 mg；觀察的目標物面積0.14 mm2（即在4×10倍光學顯微鏡下，目標物占目鏡測微尺的長、寬各15小格）。

2.1.2 性狀

優質艾絨樣品呈絨團狀，表面為灰黃色、土黃色、淺褐黃色或帶灰綠色。散有許多至極多的黑色至綠黑色的葉片碎末小點，無或偶見淺黃色或綠黃色的粗纖維。質輕柔軟，手捻之不易散開而呈狹長橄欖形。氣微香，或具特異的濃香或清香氣，味微苦、微辛、微澀。點燃后不起火焰，散發芳香氣。

質量較次的艾絨中，其葉片碎末所占比例較大，且往往摻有艾的莖稈為原料制成。其絨團表面帶明顯的灰綠色或呈暗綠黃色，可見類白色的粗顆粒（莖髓小碎塊）及淺黃色粗纖維，手指揉捏有粗糙感甚至扎手。

2.1.3 顯微特征

優質艾絨樣品T形毛眾多，大多相互纏結成亂團狀。其頂細胞細長，彎曲、扭曲或相互纏結，直徑5～18 μm，長 210～960 μm，極少可達 1 000 μm 以上，末端漸尖，中部可見類圓形、卵圓形或橢圓形的柄細胞脫落痕；柄細胞大多碎落，殘留者具1～3（最多6）個類方形或長方形細胞，有的中部略膨大。長方形、類方形或不規則葉肉碎塊（柵狀細胞、海綿組織）少見、常見或眾多，呈棕黃色、黃棕色、暗棕色或類黃色。碎塊中有的可見細長的螺紋導管，稀見具緣紋孔導管及網紋導管，導管多相聚或與纖維相伴，直徑 5～30 μm；有的碎塊密布直徑為 3～12 μm的細小草酸鈣簇晶，并少見細胞成對排列的鞋底形腺毛（頂面觀）；碎塊中纖維少見或偶見，直徑 7 ～20 μm，末端漸尖。表皮碎片（表面觀）偶見或可見，具不定式氣孔。艾絨顯微特征模式圖見圖1 A，高純度的純絨顯微特征見圖1 B。不同純度或質量規格的艾絨中葉肉碎塊量存在明顯不同。艾絨純度越低，其葉肉碎塊所占比重越大。

表1 不同艾絨樣品（葉絨比系廠家標示）揮發油、總黃酮含量測定結果

圖1 艾絨顯微模式圖

五月艾絨與正品艾絨的性狀無明顯差異，但兩者顯微特征有顯著差異：五月艾絨T形毛頂細胞極細長，明顯扭曲或相互纏結，直徑 5～10 μm，長達 1 000 μm 以上者常見，最長可超2000μm；草酸鈣簇晶更為細小，直徑僅3～6 μm；并可見副衛細胞脫離后的氣孔散在，有的氣孔的保衛細胞呈電話筒形及啞鈴形。詳見圖2。

圖2 五月艾絨中的氣孔顯微圖

2.2 薄層色譜鑒別

取艾絨樣品1.0 g，置燒瓶中，加石油醚（60～90℃）15 mL，置水浴上加熱回流30 min，冷卻，濾過，濾液揮干，殘渣加正己烷0.5 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。取氧化石竹烯對照品2.5 mg，溶解于5 mL正己烷中，作為對照品溶液。吸取上述2種溶液各5 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-甲苯-丙酮（10 ∶8 ∶0.5，V/V/V）為展開劑展開，取出，晾干，噴顯色劑（取20%硫酸溶液10 mL，緩緩加至10 mL冰冷的冰醋酸中，加4-甲氧基苯甲醛1 mL，再加20%硫酸溶液20 mL，混勻）后，在105℃下加熱至斑點顯色清晰。在自然光下，將供試品溶液色譜斑點的數目、位置比移（Rf）值和顏色與對照品色譜比較，進行鑒定分析。結果所有不同純度或質量規格的供試品溶液色譜均有6個紫紅色的主斑點。Rf值均分別為0.09，0.16，0.38，0.54，0.68，0.95。在與氧化石竹烯對照品色譜斑點相同的Rf值處，顯示出1個對應的紫紅色斑點。詳見圖 3。

圖3 艾絨樣品薄層色譜圖

2.3 含量測定

2.3.1 揮發油

參照2015年版《中國藥典（四部）》通則“2204揮發油測定法”進行測定，其中艾絨供試品的取樣量為40.00 g，加水量為600 mL。結果見表1。

2.3.2 總黃酮

溶液制備：取芹菜素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含0.05 mg的對照品溶液。取剪碎的樣品約1 g（精確至0.000 1 g），置100 mL圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定質量，85℃水浴回流1 h，放冷，再次稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容，搖勻，即得供試品貯備液。精密量取1 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇定容，搖勻，即得供試品溶液。

方法學考察：精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均小于2%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫下12 h內穩定，且方法重復性良好。

測定與計算：以70%甲醇為空白，在338 nm波長處測定吸光度并計算，按干燥品計算總黃酮（以芹菜素計）含量。結果見表1。可見，不同產地艾葉原料所含揮發油、總黃酮含量存在差異性［5］，導致艾絨揮發油和總黃酮含量也存在差異，其中葉絨比越高，揮發油和總黃酮的含量越低。說明艾絨的毛絨部分中這兩類成分的含量低于同批艾絨制作時產生的葉肉碎末中兩類成分的含量。

2.4 艾絨分級

2.4.1 分級思路

由于不同葉絨比的艾絨具有不同程度的性狀、顯微特征差異性，結合其主要化學物質含量的差異，可將常規艾絨商品質量等級分為一、二、三級。為避免艾絨商品中混入過多的葉片碎末，有必要建立不同等級艾絨中揮發油和總黃酮成分的最高含量限度。但作為臨床公認為質量較好的陳艾絨，這兩類化學物質的含量較低，故不對各艾絨等級或規格作揮發油和總黃酮含量的下限要求。

2.4.2 等級特征

一級品：絨團表面呈灰黃色、淺褐黃色、土黃色，有許多黑色至綠黑色的葉片碎末。質輕柔綿軟，手指揉捏無粗糙感且不扎手。氣微香，味苦或微苦，并具極微弱或微弱的辛澀味。在顯微鏡下主要為相互纏繞的T形毛，其柄部幾乎全部脫落，偶見柄細胞殘段。葉肉碎塊較少，體較小，長1000 μm以上者僅偶見或極少見，面積在0.14 mm2以上者較少，不超過20個（見圖4）。其揮發油含量不應高于每100 g含0.40 mL，總黃酮含量不應高于2.50%。

圖4 艾絨一級品特征圖

二級品：絨團表面呈灰黃色、暗黃色或略帶暗綠色，偶見或極少見淺黃色的粗纖維及類白色的粗顆粒，有較多至大量的黑色至綠黑色的葉片碎末。質輕柔軟，手指揉捏有粗糙感但不扎手。氣香，味苦、辛或微辛、微澀。在顯微鏡下多為相互纏繞的T形毛，T形毛的柄部絕大多數脫落，極少數保留柄細胞殘段。葉肉碎塊多或眾多，體較大，長度1000μm以上者常可見，面積在0.14mm2以上者較多，但不超過50個（見圖5）。其揮發油含量不應高于每100 g含0.60 mL，總黃酮含量不應高于3.20%。

圖5 艾絨二級品特征圖

三級品：絨團表面呈暗綠黃色或帶灰綠色，少見淺黃色或綠黃色的粗纖維及類白色的粗顆粒，有極多黑色至綠黑色的葉片碎末。質輕較柔軟，手指揉捏有明顯糙手感并可有扎手感。氣濃香或清香特異，味苦或極苦、辛、微澀。在顯微鏡下主要為葉肉碎塊及T形毛。葉肉碎塊極多，體較大，長1 000 μm以上者多見，最長者可達2 000 μm以上，面積在0.14 mm2以上者更多。T形毛的柄部大多數脫落，少數保留柄細胞殘段（見圖6）。其揮發油含量不應高于每100 g含0.80 mL，總黃酮含量不應高于3.90%。

圖6 艾絨三級品特征圖

3 討論

商品艾絨中，除了有用儲存不足1年的新艾葉所加工成的新艾絨和儲存1年以上的陳艾葉所加工成的陳艾絨外，還有用傳統手工藝制成的手工絨，以及經反復粉碎過篩而得到的純度極高且呈土黃色的“黃金絨”。研究發現，新艾絨有時帶灰綠色，揮發油與總黃酮含量較高；陳艾絨的揮發油與總黃酮含量水平較低；黃金絨顏色較純正，多呈土黃色，因純度極高，顯微鏡下極少見葉肉碎塊；傳統手工絨有分等級與不分等級之別，其中不分等級者在顯微鏡下主要為葉肉或葉片碎塊，T形毛相對較少，且揮發油含量和總黃酮含量可分別高于每100 g含0.80 mL和3.90%。

艾絨是艾灸療法的直接原材料，其真偽及質量優劣對艾灸療法的醫療應用至關重要。本研究結果證明，對艾絨進行性狀、顯微及薄層色譜鑒定及主要化學物質的含量測定是目前對其真偽鑒別和質量分級的可靠手段。在對艾絨商品進行質量分級，建立等級鑒定方法的基礎上，形成了艾絨的質量評價與等級標準。這對于規范以艾絨為原料的艾灸產品的質量，維護消費者權益，保障艾絨制品應用的安全性與有效性，進而促進艾產業的規范發展，具有積極作用。