原子吸收分光光度法測(cè)定鎮(zhèn)癇片中鈣含量

盧小蘭，王 健，黃富宏

（揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

鎮(zhèn)癇片由人工牛黃、朱砂、珍珠母等13味藥材組方，有鎮(zhèn)心安神、豁痰通竅功效，用于治療癲狂心亂、痰迷心竅、神志昏迷、四肢抽搐、口角流涎等癥。目前，該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］中無(wú)珍珠母的測(cè)定，也未見(jiàn)鎮(zhèn)癇片鈣含量檢測(cè)方法的報(bào)道，只有用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定鎮(zhèn)癇片中膽紅素的報(bào)道［2-3］。珍珠母主要成分為CaCO3（含量 ＞ 88% ）［4］，但 CaCO3在水中的溶解度很小。研究顯示，珍珠母煎煮后其煎出率最高約0.1%［5］。本品制法中珍珠母為水煎煮4 h，其他可能含有鈣元素的人工牛黃、朱砂等藥材為全粉入藥。本研究中通過(guò)原子吸收光譜法測(cè)定鈣含量來(lái)評(píng)估樣品原藥材質(zhì)量控制和工藝的穩(wěn)定性［6］。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PE AA800型原子吸收分光光度計(jì)（美國(guó)鉑金埃爾默公司，含火焰原子化器，精度 0.01 μg/mL）；MV3000型微波消解儀（奧地利安東帕有限公司）；BHW-09A型恒溫消解儀（上海博通有限公司）；Milli-Q型去離子水機(jī)（美國(guó)密理博有限公司）；MS204S型電子分析天平（美國(guó)梅特勒-托利多集團(tuán)）。

1.2 試藥

鈣元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，質(zhì)量濃度 1 000 μg/mL，定值時(shí)間 20180709）；硝酸（北京化學(xué)試劑研究所，BV-Ⅲ級(jí)，批號(hào)為20170902）；水為去離子水（自制）；氧化鑭（國(guó)藥試劑有限公司，高純?cè)噭?N，批號(hào)為20160918）；鎮(zhèn)癇片（長(zhǎng)春銀諾克藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20063511，批號(hào)分別為 20180201，20171002，20170902，規(guī)格為每片 0.4 g）。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器工作條件

微波消解儀消解程序見(jiàn)表1［7-10］。升壓速率為 0.3bar/s，溫度上限為180℃，壓力上限為40 bar。火焰原子吸收分光光度計(jì)儀器參數(shù)［11-12］：燈電流為 10 mA，狹縫為0.7 nm，燃?xì)饬髁繛?.0 L/min。

表1 微波消解程序

2.2 溶液制備

取鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液逐步稀釋?zhuān)渲坪}質(zhì)量濃度分別為0，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0 μg/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。取樣品10片，研細(xì)，取藥粉約0.2 g，精密稱(chēng)定，置聚四氟乙烯消解罐中，置電熱板上；加硝酸5 mL，110℃預(yù)消解至無(wú)棕紅色氣體產(chǎn)生，放冷至室溫；將預(yù)處理好的樣品裝入陶瓷套管中，置微波消解儀消解；消解完的樣品置恒溫消解儀，在125℃下趕酸至約1 mL，轉(zhuǎn)移至50 mL塑料離心管中，用去離子水定容至50 mL，搖勻；取5 mL置50 mL離心管中，加鑭溶液2.5 mL［13］，用去離子水定容，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：按2.1項(xiàng)下儀器參數(shù)測(cè)定，測(cè)定各質(zhì)量濃度溶液的吸光度，以吸光度（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X，μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.04044X-0.000 51，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，鈣質(zhì)量濃度的線性范圍為 0～6 μg/mL。

檢測(cè)限與定量限考察：按供試品溶液制備方法平行制備7份溶液，再按2.1項(xiàng)下儀器參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值，并計(jì)算SD值，以3倍和10倍SD值對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度分別作為檢測(cè)限和定量限。結(jié)果儀器檢測(cè)限為 0.041 μg/mL，定量限為 0.138 μg/mL［14］。

精密度試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180201）粉末1份，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下儀器參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣 6次，測(cè)定儀器響應(yīng)值。結(jié)果的RSD為0.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180201）粉末6份，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下儀器參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值并計(jì)算含量。結(jié)果樣品中含鈣平均值為5.55mg/g，RSD為0.9%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為20180201）粉末6份，各0.1 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，依法制備溶液并測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值并計(jì)算加樣回收率［15］。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取不同批次的樣品各2份，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下儀器參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，記錄儀器響應(yīng)值并計(jì)算樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

長(zhǎng)期使用抗癲癇藥物后，58%的患者骨密度異常，其中大部分為骨質(zhì)缺鈣［16］。因此，測(cè)定樣品鈣含量，有助于研究本品鈣含量與療效的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，所用方法可準(zhǔn)確測(cè)定鎮(zhèn)癇片樣品中鈣元素的含量。但要注意，鎮(zhèn)癇片中含有朱砂，導(dǎo)致樣品中汞含量較高，測(cè)定時(shí)要注意汞對(duì)環(huán)境的污染。尤其是消解罐在試驗(yàn)后要進(jìn)行隔離處理，避免污染其他汞測(cè)定試驗(yàn)。

鎮(zhèn)癇片中含珍珠母原藥材為每片640 mg，按0.1%煎出率計(jì)算，鈣含量最高為每片0.64 mg，本品規(guī)格為每片0.4 g，鈣含量應(yīng)為1.6 mg/g。現(xiàn)測(cè)得量遠(yuǎn)高于1.6 mg/g，說(shuō)明處方中人工牛黃及朱砂等藥材中也含有鈣，但由于未見(jiàn)人工牛黃及朱砂等藥材中鈣含量的文獻(xiàn)報(bào)道，無(wú)法確定成品中鈣含量是否與研究數(shù)據(jù)吻合，將進(jìn)一步研究。如果能研究得出本方中其他藥材含鈣最高量，可將總量與本研究測(cè)得量進(jìn)行比較，若測(cè)得量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)處方藥材中含鈣最高量，就可質(zhì)疑存在生產(chǎn)中用碳酸鈣原料替代珍珠母為原料投入的違法行為。

綜上所述，若本研究所用樣品完全合格，則研究所得數(shù)據(jù)就為可靠數(shù)據(jù)。基于該樣品鈣含量數(shù)據(jù)，說(shuō)明珍珠母在該方中微量元素的作用可能更重要，因此進(jìn)一步研究該方中其他微量元素的含量，將有助于推斷微量元素在治療癲癇中的作用。