高效液相色譜法測定復方依美辛膠囊中3種成分含量

郭社民，王 靜

（河南省濮陽市食品藥品檢驗檢測中心，河南 濮陽 457000）

復方依美辛膠囊是由馬來酸依那普利、酒石酸美托洛爾、辛伐他汀、阿司匹林、氫氯噻嗪等組成的醫院制劑，臨床多用于治療高脂血癥、高血壓、缺血性心臟病和腦卒中等癥。原質量標準中僅對酒石酸美托洛爾進行了含量測定，為更有效地控制制劑質量，確保臨床療效，本研究中參考文獻［1-10］建立了同時測定制劑中氫氯噻嗪、阿司匹林和酒石酸美托洛爾含量的高效液相色譜法。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；UVIKONxl型紫外分光光度計（法國Secoman公司）；CPA225D型電子分析天平（德國 Sartorius公司）；SK2200H型超聲清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）。

1.2 試藥

氫氯噻嗪對照品（批號為1000309-201404，含量99.7%），阿司匹林對照品（批號為100113-201706，含量99.8%），酒石酸美托洛爾對照品（批號為100084-201403），均購自中國食品藥品檢定研究院；復方依美辛膠囊（濮陽市第一人民醫院制劑室，批號分別為20180226，20180421，20180619，規格為每粒含馬來酸依那普利20 mg、酒石酸美托洛爾50 mg、辛伐他汀40 mg、阿司匹林75 mg、氫氯噻嗪12.5 mg）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：XBridge C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：醋酸鹽緩沖液（取醋酸銨3.9 g，加水810 mL溶解，加三乙胺 2.0 mL，冰醋酸10.0 mL，磷酸3.0 mL，搖勻）-乙腈（87 ∶13，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：275 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：取氫氯噻嗪對照品15.25 mg、阿司匹林對照品90.19 mg、酒石酸美托洛爾對照品60.25 mg，精密稱定，置同一20 mL容量瓶中，加甲醇-乙腈（1 ∶1，V/V）5 mL，超聲 5 min，加流動相適量，超聲（功率 100 W，頻率 53 kHz，下同）處理 10 min，使其溶解，放冷，加流動相定容，搖勻，作為對照品貯備液（每1 mL含氫氯噻嗪0.760 2 mg、阿司匹林4.500 5 mg、酒石酸美托洛爾3.012 5 mg），量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相定容，搖勻，作為混合對照品溶液。

供試品溶液：取樣品20粒，將內容物混勻，取適量（約相當于氫氯噻嗪7.6 mg），精密稱定，置200 mL容量瓶中，加甲醇 -乙腈（1 ∶1，V/V）5 mL，超聲處理5 min后加流動相適量，再超聲處理10 min使其溶解，放冷，加流動相定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按復方依美辛膠囊處方比例及制備方法制備不含氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾的陰性樣品，并依法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取上述混合對照品溶液、供試品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定。結果各待測成分峰形良好、分離度均大于1.5，理論板數以氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾峰計均大于3000。色譜圖見圖1。

專屬性試驗：取對照品溶液、陰性對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。結果，陰性對照品溶液在與混合對照品溶液保留時間相同處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關系考察：分別精密量取混合對照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置 20 mL 容量瓶中，加流動相定容，搖勻，制成系列對照品溶液。取10 μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（X，mg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾回歸方程分別為Y1=1.346 1×105X1+42.13（r1=0.999 9，n=7），Y2=1.106 2×104X2+59.36（r2=0.999 9，n=7），Y3=9.187 5 ×103X3+86.52（r3=0.999 9，n=7）。結果表明，氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾檢測質量濃度分別在 0.015 2～0.095 0 mg/mL，0.090 0～0.562 6 mg/mL，0.060 2～0.376 6 mg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取混合對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾峰面積的RSD分別為0.42%，0.48%，0.53%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品（批號為20180421）溶液，分別于室溫下放置 0，2，4，6，8，10 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾峰面積的RSD分別為0.63%，0.71%，0.75%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置10h內基本穩定。

重復性試驗：取同一批（批號為20180421）樣品，依法制備供試品溶液，共5份，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結果氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾的平均含量分別為99.8%，101.3%，101.7%，RSD分別為 0.70%，0.64%，0.68%（n=5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知各成分含量的同一批（批號為20180421）樣品內容物適量，共9份，分別加入低、中、高質量濃度的待測成分對照品溶液適量，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取樣品適量，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜峰面積并計算含量。結果見表2。批號20180226 20180421 20180619

3 討論

溶劑選擇：氫氯噻嗪在水中不溶解，阿司匹林微溶解，酒石酸美托洛爾極易溶解，三者的溶解性差異較大，氫氯噻嗪需要選擇有機溶劑進行溶解。預試驗結果表明，先加甲醇-乙腈（1∶1，V/V）適量溶解氫氯噻嗪后，再加流動相適量溶解其余2種成分，并進行超聲處理，可使3種成分均得到充分溶解。

流動相選擇：曾試用0.1 mol/L磷酸二氫鈉-乙腈、醋酸鹽緩沖液-甲醇、醋酸鹽緩沖液-乙腈等系統及不同比例，試圖用1種流動相同時分離和測定該制劑中各種主藥成分，結果以文中溶液為流動相，能同時使氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾3種成分很好地分離，且峰形較好、無干擾。

檢測波長選擇：在200～400 nm波長范圍內，對氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾對照品溶液分別進行全波長掃描，結果氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾的最大吸收波長分別為273，276，275 nm，且酒石酸美托洛爾的響應值較小，故選用275 nm作為檢測波長。

綜上所述，本研究中所建方法簡便、準確、重復性好，可用于復方依美辛膠囊中氫氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛爾的含量測定。