白細胞殘留量檢測方法的改進

胡海軍

【摘要】 目的 對白細胞殘留量檢測方法進行改進， 令結果更準確， 操作更快速。方法 利用血細胞計數儀使用的溶血素替代結晶紫染色液， 然后利用大容量 Nageotte血細胞計數盤在顯微鏡下計數。

結果 無需提前配置試劑， 試驗操作時間短， 溶血素對白細胞影響小， 對紅細胞和血小板溶解充分， 無背景的干擾， 令檢測結果更準確。結論 利用血細胞計數儀使用的溶血素替代結晶紫染色液， 能夠提高白細胞殘留量的檢測準確度和檢測速度。

【關鍵詞】 白細胞殘留量;溶血素;結晶紫染色液

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.103

隨著醫學科學的發展， 臨床成分輸血治療日益擴大， 人們對血液質量、輸血治療和輸血安全提出了更高層次的要

求[1]。目前的科學技術手段并不能制造出人造血液， 因此臨床用血只能選擇采集健康人體的血液， 輸血治療被廣泛的應用于外傷性失血、嚴重燒傷、產后大出血以及各種大型手術等。輸血技術在不斷的發展， 臨床常采用濾除白細胞后的血液制品作為主要的輸血產品。白細胞是血液中的主要成分之一， 其主要功能是防御作用， 根據種類可分為中性粒細胞、嗜堿粒細胞、嗜酸粒細胞以及單核細胞等， 根據種類的不同以不同的方式參與機體的防御反應， 例如中性粒細胞具有很強的吞噬性， 能夠對侵入機體的微生物病原體進行吞噬， 然后再進行自身降解， 并釋放出多種溶酶體酶類以溶解其周圍組織形成膿液， 最后達到清除微生物病原體的作用。而在輸血中， 白細胞是導致多種非溶血性發熱性發熱反應的主要因素， 因此在臨床的輸血過程中， 所選取的多為濾去大部分白細胞之后的血液制品， 使用去白細胞血液產品能夠有效的降低非溶血性發熱性發熱反應、急性肺損傷、輸血相關性移植物抗宿主病以及人白細胞抗原系統（HLA）同種免疫等不良反應的發生率， 去除白細胞可有效避免白細胞代謝產物引起的各種輸血反應已得到證實[2]， 《全血及成分血質量要求》GB 18469-2012已于2012年7月1日實施， 其中明確規定了各種成分血的白細胞殘留量的標準。《血站技術操作規程》2012版中附錄F9.1， 已提供推薦的白細胞殘留量的檢測方法， 即自行配制結晶紫染色液與待測樣本一定比例混合， 然后用大容量 Nageotte血細胞計數盤在顯微鏡下計數。該方法經過實際工作驗證， 發現存在一些不足， 比如每次試驗需要配制試劑， 操作繁瑣， 而且冰醋酸對紅細胞及血小板的溶解不充分， 過多的殘渣影響白細胞的計數， 結晶紫的染色效果也不佳等情況， 也直接影響白細胞的計數。為此， 作者設計了試驗， 對白細胞殘留量的檢測方法進行了改進， 取得了良好的效果， 檢測結果更加準確， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 上海光電醫用電子儀器有限公司生產的溶血素， 批號：18080672。

1. 2 儀器 德國進口大容量 Nageotte血細胞計數盤;奧林巴斯顯微鏡。

1. 3 方法

1. 3. 1 操作 50 μl血液標本加入450 μl溶血素中， 充分混勻。在Nageotte計數池中加入上述混合液， 將計數池置于帶蓋潮濕容器中， 于室溫放置5 min。在200倍顯微鏡下對計數池中兩個計數區（每區有20個長方形格）的白細胞計數， 40行相當于50 μl。

1. 3. 2 計算 白細胞數/μl=2個區域白細胞計數和×10/50 μl，

公式中：10為稀釋倍數， 50 μl為計數池2個區的容積。每袋中殘留白細胞數按下列公式計算：殘留白細胞數/袋=白細胞數/μl×去白細胞血液容量（ml）×1000。

2 結果

推薦方法中的結晶紫儲存液配置的保存期為6個月， 使用液每次現用現配且需要利用0.22 μm過濾器過濾， 改進的方法無需提前配置試劑， 溶血素的保存期一般為1年， 且血細胞計數儀為血站非常普及的儀器設備， 容易直接獲得溶血素， 試驗操作時間短， 溶血素對白細胞影響小， 對紅細胞和血小板溶解充分， 無背景的干擾， 方便顯微鏡下的人工計數， 令檢測結果更準確。

3 討論

目前， 臨床的用血量仍在不斷的增加， 輸血醫學也在不斷的發展中， 人們對于輸血引發的不良反應以及并發癥危害的關注程度也越來越高， 如何在合理應用血液資源的同時盡量減少因輸血引發的一系列不良反應是目前輸血界與臨床醫療部門所共同關注的熱點話題。當前已經確認血液中的白細胞是引發輸血嚴重不良反應的主要原因。白細胞是人體免疫機制的重要細胞種類， 主要為粒細胞、單核細胞以及淋巴細胞三個種類， 在病菌侵襲人體時， 白細胞能夠通過變形以穿過毛細血管壁并在病菌入侵部位聚集， 對病菌進行包圍后吞噬， 從而達到清除病菌的目的， 因此， 血清白細胞數量增高提示可能有炎癥發生。白細胞一般在組織中發揮作用， 其可以伸出偽足進行變形運動從毛細血管內皮細胞的間隙擠出并進入血管周圍組織內， 之后通過變形運動在組織內進行游走， 找到病原體或組織碎片并吞噬， 從而參與對炎癥和免疫反應的調控。

白細胞計數升高一般分為病理性和生理性， 病理性升高的最常見病因為感染， 但老年患者由于反應性較低， 因此在發生感染時白細胞計數升高不明顯;生理性升高常見劇烈運動、飽餐、情緒緊張以及妊娠末期等。白細胞計數降低的常見原因為病毒感染， 如水痘、流行性感冒以及病毒性肝炎等。因此， 臨床在對患者進行血常規檢查時， 常需要對血清中的白細胞含量進行計數以為臨床診斷提供一定的依據， 而在血站則需要檢測白細胞的殘留量以避免白細胞代謝產物引起的各種輸血反應， 同時臨床輸血也已將濾除白細胞的血液或少白細胞懸浮紅細胞作為主要的血液制品選擇。

去白細胞血液產品的白細胞殘留量的控制質量具有非常重要的意義， 若不濾去懸浮紅細胞液中的白細胞， 那么大量的白細胞在被輸入到患者的體內后會對其造成較大的代謝負擔， 從而可能導致患者發生非溶血性發熱性輸血反應， 不利于患者的機體健康與疾病的治療[4， 5]。常用的檢測白細胞殘留量的方法為流式細胞儀與Nageotte血細胞計數盤計數兩種。流式細胞儀是一種具有穩定、有效、準確等優點的檢測方法， 但所需的設備以及檢測費用均較為昂貴， 不利于在臨床廣泛應用。而若是按照我國目前規定的使用Nageotte血細胞計數盤進行計數， 則所需的計數時間較長且檢測樣品的過程較為復雜， 在較短時間內只能檢測有限量的樣品， 因此反應產品的情況就受到了一定的局限。目前所公認的標準為濾除后血液的白細胞數量降低至5×108個/L時即可避免因白細胞抗體所導致的非溶血性發熱性輸血反應（FNHTRs）， 當殘留的白細胞數<5×107個/L時可有效降低輸血后移植物抗宿主病的危險， 當殘留的白細胞數<5×106個/L時可有效預防HLA抗體所導致的同種免疫以及與白細胞攜帶病毒相關疾病的傳播[6， 7]。影響濾除后血液中白細胞數量的因素有白細胞濾器的選擇、過濾前全血的保存時間、過濾前血液是否混勻以及白細胞濾除過程時間的長短等。

對白細胞殘留量檢測方法的改進， 一定程度上提高了準確度和檢測速度， 但在實際工作中， 手工操作很難實現標準化操作， 重復性差， 給檢測結果帶來誤差， 并且操作繁瑣， 費時長。目前來說， 如果用血細胞計數儀來檢測去白細胞懸浮紅細胞中的白細胞殘留量， 顯然靈敏度不夠， 因為血細胞計數儀檢測的對象都是正常人群及患病人群的血液， 稀釋比例也是按照這個濃度來設計的， 試想一下， 如果血細胞計數儀廠家， 能夠根據血站的需要， 對程序稍加改動， 針對成分血液的特點設計不同的稀釋模式， 從而來完成各種成分血的血細胞計數， 就能夠實現標準化操作， 重復性和準確度會大大提高， 且人為因素干擾小。屆時， 率先實現這一功能的廠家一定會在血站占有一定的市場。

參考文獻

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[收稿日期：2019-03-25]