溶血、脂肪血及保存條件對HBVDNA、HIVRNA核酸檢測的影響

漆愛紅

【摘要】 目的 探討溶血、脂肪血及保存條件對乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV DNA）、人類免疫缺陷病毒核糖核酸（HIV RNA）核酸檢測的影響。方法 回顧性分析30份行HBV DNA、HIV RNA核酸檢測標本的臨床資料， 應用羅氏MPX V2.0試劑， 分別于4℃、25℃、37℃及-30℃的條件下測定4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周HBV DNA、HIV RNA的Ct值， 并在不同溶血及脂肪血中測定HBV DNA、HIV RNA的Ct值。結果 -30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時間及溫度下的Ct值， 差異有統計學意義（P<0.05）。高濃度TG并不影響核酸檢測（NAT）， 差異無統計學意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時出現NAT檢測抑制， 其他濃度無明顯影響， 差異有統計學意義（P<0.05）。結論 高血脂標本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血標本>34 g/L時需重新留取樣本， 血液標本檢測時間不宜超過72 h， 保存溫度以-30℃最佳。

【關鍵詞】 HBV DNA;HIV RNA;溶血;脂肪血;Ct值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.111

目前臨床對血液制品的檢測均采用核酸檢測技術（NAT）， 能有效檢出因病毒變異、隱匿性感染等因素， 導致的污染血液。但在實際工作中， 血液標本容易受到保存溫度、溶血、脂肪血等因素影響， 進而導致核酸檢測結果出現誤差[1]。羅氏MPX V2.0試劑說明書中也提出了相應的指導意見， 但各地區的實驗室對HBV DNA、HIV RNA檢測的影響因素不同。本研究進一步分析了溶血、脂肪血及保存條件對HBV DNA、HIV RNA核酸檢測的影響， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料來源 回顧性分析2018年1～12月在本中心行HBV DNA、HIV RNA核酸檢測的30例標本的臨床資料。所有血液標本經血清學檢測HBV DNA、HIV RNA均為陰性， 同時收集HBV DNA、HIV RNA 檢測陽性的血漿， 經病毒濃度定量檢測后， 加入血清學及NAT 檢測均為陰性的透亮血漿， 制成12～30倍的核酸試劑檢測下限濃度的HBV DNA、HIV RNA標本。

1. 2 方法 使用羅氏Z480熒光定量PCR儀核酸檢測系統。分別將標本置于-30℃、4℃、25℃、37℃的環境中放置4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周， 采用熒光PCR法檢測。收集血液標本中的紅細胞懸液、嚴重乳糜血漿， 將紅細胞懸液制成全溶血樣本， 將兩個樣本離心制成溶血樣本及脂肪血樣本， 然后將溶血樣本、脂肪血樣本、血清學及NAT檢測均為陰性的血漿標本、12～30倍核酸試劑檢測下限濃度HBV DNA、HIV RNA標本， 保持這兩個樣本的HBV DNA、HIV RNA最終濃度約為2～5倍核酸試劑檢測下限濃度[2];采用6混樣模式， 在全自動STAR加樣儀中混勻制成血紅蛋白（Hb）， 分為濃度97、34、17、8、5及3 g/L的溶血標準樣本， 以及TG濃度在7.93、3.80、2.63、1.83及1.49 mmol/L的脂肪血標準樣本， 分別行Hb濃度、TG濃度及NAT檢測。

1. 3 觀察指標 比較不同保存條件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值;比較不同Hb、TG濃度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 不同保存條件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比較

-30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時間及溫度下的Ct值， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 不同Hb、TG濃度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比較 高濃度TG并不影響NAT檢測， 差異無統計學意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時出現NAT檢測抑制， 其他濃度無明顯影響， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

Hb對核酸檢測的影響主要是通過卟啉環與Taq酶的不可逆結合， 抑制Taq酶活性[3-6]。脂肪血對核酸檢測的影響主要通過乳糜微粒屏蔽和吸收熒光， 產生熒光淬滅作用， 降低了熒光信號強度， 減少擴增效率[7-10]。本研究結果顯示， -30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時間及溫度下的Ct值， 差異有統計學意義（P<0.05）。說明HBV DNA在常溫下穩定性較高， 在37℃中可能有核酸降解的趨勢。HIV RNA在各個不同溫度下均很穩定。另外， 本研究中， 高濃度TG并不影響NAT檢測， 差異無統計學意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時出現NAT檢測抑制， 其他濃度無明顯影響， 差異有統計學意義（P<0.05）。

綜上所述， 高血脂標本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血標本>34 g/L時需重新留取樣本， 血液標本檢測時間不宜超過72 h， 保存溫度以-30℃最佳。

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[收稿日期：2019-03-27]