高效液相色譜法測定熏燒烤肉中16種多環芳烴

□ 鹿文婷 萬 潔 寧 霞 濟南市章丘區疾病預防控制中心

多環芳烴（PAHs）是指2個或2個以上苯環以稠環形式相連的一類化合物，包括萘、蒽、菲與芘等150余種化合物，具有慢性毒性和致癌、致畸、致突變作用[1]。人類暴露于多環芳烴的主要途徑是食物，尤其是在熏燒烤肉制品中，屢有檢出。多環芳烴的檢測分析一般采用液相色譜法和氣相色譜－質譜聯用法，氣—質聯用法的定性能力強于液相色譜法，但對多環芳烴的定量能力不強[2]。本文采用乙腈—正己烷—超聲提取，固相萃取柱凈化，高效液相—二極管陣列—熒光檢測器串聯檢測，建立了一種高效、準確、能夠同時測定熏燒烤肉制品中16種多環芳烴的高效液相色譜法。

1 試驗

1.1 儀器與試劑

電子天平（Sartorius Quintix224—1CN，德國）；超聲波清洗儀（KQ—250DB，昆山市超聲儀器有限公司）；氮吹儀（Organomation N—EVAP112，美國）；渦旋混勻器（Scientif i c Industries VORTEX—GENIE2，美國）；低溫高速離心機（ThermoFisher，美國）；高效液相色譜儀（Waters e2695，美國），配備二極管陣列及熒光檢測器；超純水儀（Millipore Rios8，美國）。弗羅里硅土固相萃取柱（Waters，美國）；乙腈（HPLC，德國Merck公司）；二氯甲烷（GR，天津市大茂化學試劑廠）；正己烷（HPLC，天津市科密歐化學試劑有限公司）。

16種多環芳烴混合標準物購自DIKMA公司，包含萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a，h]蒽、苯并[g，h，i]苝與茚并 [1，2，3—c，d]芘。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品處理

按照 GB 5009.265—2016《食品安全國家標準 食品中多環芳烴的測定》[3]進行試樣前處理。

1.2.2 分析條件

色 譜 柱：PAH C18柱（25 mm×4.6 mm×5 μm）；流動相：A為乙腈，B為水；洗脫程序：0～20 min，50% ～ 100%A；28～ 32 min，100%～ 50%A； 流 速：1.5 mL/min。用二極管陣列檢測器檢測苊烯，波長為230 nm；其他15種PAHs用熒光檢測器檢測，激發波長和發射波長見表1。

2 結果與討論

2.1 色譜圖與條件優化

采用二極管陣列檢測器在20～400 nm對標準溶液進行光譜掃描，發現苊烯在230nm波長下響應值最高，因此紫外吸收檢測波長為230nm。這與高慧[4]等人的檢測數據相吻合。

表1 PAHs激發波長、發射波長及切換色譜時間檢測參數

配制濃度為100 ng/mL的16種PAHs混合標準溶液，選用PAHs專用色譜柱進行分離檢測，分離效果良好，見圖1和圖2。

2.2 線性范圍與檢出限

在1.0～100 ng/mL線性范圍內，16種PAHs的回歸方程均呈現良好的線性關系（R＞0.999）。一般以方法檢出限作為其檢出限，稱取試樣2.0 g，定容體積為1.0 mL，16種PAHs的檢出限為：蒽、苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a，h]蒽、苯并[g，h，i]苝和茚并[1，2，3—c，d]芘 0.66 μg/kg，菲 4.0 μg/kg，萘6.6 μg/kg，熒蒽1.0 μg/kg，苊、芴、芘和苊烯 1.3 μg/kg。

2.3 方法的準確度與精密度

稱取適量陰性樣品，分別添加濃度為2.0、10.0、50.0 ng/mL的PAHs混合標準溶液，每個樣品平行6份，按色譜分析條件測定，加標回收率在71.5%～97.2%，RSD為1.6%～14.5%。

2.4 樣品分析

采用本法抽樣分析20份熏燒烤肉，16種PAHs均有不同程度檢出，檢出范圍為1.2～106 μg/kg，其中苯并[a]芘超標一份，合格率為95.0%。

3 結論

通過對色譜條件的優化，將二極管陣列與熒光檢測器串聯使用，實現了HPLC對16種PAHs完全分離的檢測，建立了一種高效、準確、能夠同時測定熏燒烤肉中16種PAHs的高效液相色譜方法。

圖1 15種PAHs標準色譜圖

圖2 苊烯標準色譜圖