食品中微生物檢測能力驗證結果

□ 謝靜玲 靖邊縣食品檢驗檢測中心

1 材料方法

1.1 檢測樣品

檢測對象是3個冷凍干燥樣品，分別是PTA菌落總數、沙門氏菌PTB—1，沙門氏菌PTB—2[1]。分別在樣品中加入10 mL生理鹽水，混合均勻即為待測原液。培養基包括平板計數瓊脂（PCA）、沙門氏菌顯色培養基等；細菌微量鑒定管包括賴氨酸生化管、氰化鉀對照管、蛋白胨水等；腸炎沙門氏菌陽性標準菌株，由中國工業微生物菌種保管中心提供；革蘭氏陰性菌鑒定卡，來源于法國梅里埃公司；沙門氏菌診斷血清，來源于天潤藥物公司。

1.2 儀器設備

檢測儀器包括生物安全柜、細菌鑒定儀、生化培養箱、全自動微生物鑒定/藥敏分析系統等。

1.3 PTA菌落數計數方法

在PTA菌落總數原液中，取1 mL菌液加入9 mL生理鹽水，均勻混合制成1×10—1稀釋液；經梯度稀釋制成1×10～1×10—67個稀釋樣品。使用無菌吸管，從每個稀釋液中取出1 mL，置于無菌平皿中，并吸取1 mL空白稀釋液作為對照。每個平皿傾注15～20 mL的PCA，冷卻處理后，在凝固瓊脂表面覆蓋一層薄PCA，防止彌漫菌落生長。瓊脂凝固后，翻轉平板，在36 ℃條件下培養48 h，取出后計數。

1.4 沙門氏菌鑒定方法

按照指導書將10 mL樣品原液轉到225 mL的BPM增菌液上，并進行陽性對照，在36 ℃條件下培養18 h。取1 mL前增菌培養物，在10 mLTTB內進行轉種，在42 ℃條件下培養18 h；另取1 mL前增菌培養物在10 mL SC內進行轉種，在36 ℃條件下培養18 h。分離時，使用接種環取TTB、SC增菌液各一環，接種在BS、HE瓊脂、XLD瓊脂以及沙門氏菌顯色培養基上，在36 ℃條件下培養18 h。

2 結果分析

2.1 PTA菌落數

選擇菌落數在350～700 CFU/mL的10—1稀釋度平板4個，計算平均值作為菌落總數，結果顯示為580 CFU/mL。檢測操作時，使用的平板計數瓊脂來源于2個廠家，每個稀釋度做4個平板，可在菌體濃度未知時，防止漏檢現象，保證檢測結果的準確性[2]。取4個培養基的平均值，即580 CFU/mL，得到比分值（Z）為0.8，滿足|Z|≤2的要求，是滿意的結果。

2.2 沙門氏菌

2.2.1 培養結果

PTB—1在HE上培養出粉紅色菌落，在BS平板上培養出灰黑色菌落，在XLD平板上培養出黃白色菌落。PTB—2在BS平板上培養出黑色菌落，在HE平板上培養出黑色菌落，在XLD平板上培養出黑色菌落。

2.2.2 生化試驗

按照國家標準“食品微生物檢驗—沙門氏菌檢驗”，開展生化試驗，分離菌株的結果見表1，其中陽性為“+”，陰性為“—”。分析可知，PTB—1初步鑒定為非沙門氏菌，PTB—2、陽性對照組初步鑒定為沙門氏菌屬。

2.2.3 生化鑒定

在沙門氏菌顯色培養基上，挑選至少3個典型的可疑菌落，接種TSI、NA，在36 ℃條件下培養18 h，利用全自動微生物生化鑒定/藥敏分析系統進行鑒定。取 PTB—1、PTB—2、陽性對照菌株，接種在TSA平板上，在37 ℃條件下培養18 h，使用生理鹽水制成菌懸液，測定菌液濃度，并進行系統鑒定。結果顯示，全自動細菌鑒定儀的報告中，PTB—2是沙門氏菌書的可能性為97%，鑒定等級是相當好；PTB—1是腸桿菌，可能性為99%，鑒定等級是相當好；陽性標準菌株是沙門氏菌屬，可能性為98%，鑒定等級是相當好。

表1 沙門氏均屬生化反應初步鑒定表

2.2.4 血清學鑒定

取少量純培養被檢菌苔，使用沙門氏菌診斷血清進行鑒定，開展玻片凝集試驗，結果顯示完全符合。

2.2.5 鑒定報告

綜合生化鑒定、血清學鑒定結果，得出結論：樣品PTB—1沙門氏菌，未檢出；樣品PTB—2沙門氏菌，檢出。本次檢測結果和CNAS指定值是滿意的結果。

3 結語

本次檢測能力驗證中，采用多種檢驗方法，例如多平行樣本、多稀釋度樣品，保證了檢驗結果的準確性。檢測中心的結果，均和CNAS指定值符合，檢驗中的經驗總結如下：①PTA菌落數檢驗中，使用不同廠家生產的PCA，且稀釋度樣品要均勻混合；平板計數瓊脂凝固后，再覆蓋一層薄瓊脂，能避免菌落蔓延；②沙門氏菌屬檢驗中，要注意觀察不同平板上的菌落特征，避免漏檢；③同時使用顯色培養基、全自動衛生區生化鑒定/藥敏分析系統，能進一步提高檢驗結果的準確性。通過本次驗證，可增強實驗室的檢驗能力和競爭力，不斷提升檢驗技術水平。