藍莓花青素的提取及抗氧化性分析

摘要：本文借助正交試驗以及單因素試驗獲得提取藍莓花青素的最佳條件，分別是80%甲醇，1：10的料液比，80°C的溫度，30min的時間以及3.5的pH值。在濃縮提取物之后，借助聚酰胺樹脂純化從藍莓中提取出來的花青素，能夠獲得較高純度的樣品。純化完成后，測定所得花青素抗氧化性，經由試驗可知，其能夠有效清除DPPH自由基以及OH自由基。

關鍵詞：藍莓;花青素;提取;抗氧化性;甲醇

1.實驗材料以及方法

1.1材料、儀器與試劑

采購適量的市售藍莓漿果、紫外可見分光光度計、旋轉蒸發儀、酶標儀、高速離心機以及花青素標品。實驗所用的分析純主要有乙醇、甲醇、香草醛以及鹽酸等。此外還會應用Vc、聚酰胺吸附樹脂以及DPPH自由基等。

1.2預處理聚酰胺樹脂

向三角瓶中放適量聚酰胺樹脂，隨后加濃度為95%的乙醇（4倍體積）進行浸泡，并且過夜放置，繼而將浸泡液清理掉，完成厚用濃度為95%的乙醇將其洗到洗滌液內，并將3倍體積的水添加其中，直至不會有白色的渾濁物，最終用水進行清洗，確保不再有醇的味道后進行抽濾、抽干，處理后留下以備后用。

1.3藍莓預處理

選出一部分藍莓，在此過程中應當將破碎以及沒有成熟的藍莓處理掉，隨后把選好的樣品放到冰箱里（設置-20°C的溫度），等到實驗需要的時候將樣品取出來，取出之后對其進行搗碎，直至其呈現出勻漿的狀態。

2.實驗方法

2.1配置試劑

以甲醇為主要溶劑配置有1∶1顯色劑體積的兩類試劑：第一種試劑為1%濃度的香草醛溶液，第二種試劑為8%濃度的鹽酸溶液，試劑都是在需要的時候進行現配，隨后配置有0.1%濃度鹽酸以及濃度不同、pH值3.5甲醇混合液。

2.2提取藍莓花青素的主要程序

1.破碎藍莓鮮果;2.浸提甲醇;3.過濾;4.離心處理;5.獲得藍莓花青素的提取液;6.吸附聚酰胺樹脂;7.洗脫60%的乙醇;8.旋蒸處理;9.純化藍莓花青素;10.萃取石油醚;11.石油醚的回收處理;12.展開顯色研究。

2.3配置標準溶液、制作相應曲線

以甲醇為主要溶劑對藍莓花青素的標液進行配制，標液擁有1.2g/L的濃度。隨后移取1-5ml溶液五份，分別用甲醇溶劑進行定容，最終定為10mL。完成定容之后，分別取出1mL溶液并且各自加入到顯色劑（5ml）當中，將其搖勻，并進行避光處理，隨即將其放入恒溫水浴當中進行30min的保溫處理，進而將其放置到500nm的波長當中對吸光值進行測定，最后對藍莓花青素標液標準曲線進行繪制。

2.4藍莓花青素的提取率受提取條件的影響

選出藍莓5g，將其粉碎，隨后將適量鹽酸-甲醇混合液添加其中，并且在相應溫度環境中進行攪拌和提取，對提取液進行30min離心處理，將上清液提取出來并利用聚酰胺樹脂對其進行純化處理，最終展開研究。對藍莓花青素進行提取的時候，要在超聲功率、料液比、浸提液的濃度、時間與溫度等都不同的條件下進行，各做平行試驗3個，對相應提取率進行考察。

2.5純化藍莓花青素

對花青素進行提取、抽濾，所得提取液為紫紅色，隨后純化提取液，選用的洗脫劑是60%濃度的乙醇溶液，對樣品進行采集。

2.6測定純度

定容提取液至100mL，借助標準曲線對花青素濃度進行計算，隨即將相應質量以及純度計算出來。

3.分析和探討

3.1確定最大的吸收波長

在室溫環境下借助鹽酸-香草醛溶液對藍莓花青素的標準樣品展開避光處理，隨后于分光光度計當中展開300-700nm波長范圍內的掃描，能夠獲得500nm的最大吸收波長，其屬于藍莓花青素特征吸收的相應波長。

3.2開展單因素試驗

香草醛和花青素產生反應的最終產物，一旦受到光照便會呈現出不穩定的狀態，所以在進行相應檢測的時候，檢測人員應該進行避光處理。

3.3確定最佳提取工藝條件

通過觀察試驗以及方差分析的相應結果可知，溫度有最大極差，由此可見，溫度對提取效果有較大影響，位列其后的分別為料液比、提取時間以及甲醇溶液的濃度。最終結合前文實驗獲知，最佳提取條件為1∶10料液比、80°C提取溫度、30min提取時間以及80%濃度甲醇溶液，此時擁有高達4.4%的得率以及約86%的純度。

基金項目：

2019浙江經貿職業技術學院院級科研項目“不同采收期條斑紫菜中總硒含量調查研究”（編號：19YB09）;2020省屬高校基本科研業務費項目“藍莓中花青素類檢測關鍵技術研究與應用”（編號：20KCTD01）

作者簡介：

凌云（1982.1-），女，漢族，江蘇南通人，畢業于南京師范大學，碩士研究生，高級工程師，研究方向：食品質量安全與營養檢測。