TASwako i30全自動免疫儀檢測儀性能評價

徐建，許亮亮，喻海忠

南通市中醫(yī)院，江蘇 南通 226001

原發(fā)性肝癌目前是我國第四位的常見惡性腫瘤以及第三位的腫瘤致死病因，其嚴重威脅生命和健康。原發(fā)性肝癌主要包括肝細胞肝癌、肝內(nèi)膽管細胞癌和肝細胞肝癌以及肝內(nèi)膽管細胞癌混合型三種不同的病理類型。其好發(fā)于沿海地區(qū)，我市的啟東市就是肝癌的高發(fā)區(qū)，而目前原發(fā)性肝癌的診斷主要是靠檢測血清AFP及進行影像學(xué)檢測，70%-90%原發(fā)性肝癌患者AFP含量增高，睪丸癌、卵巢腫瘤、惡性畸胎瘤等患者AFP含量也增高、同時在一些良性肝臟病變中AFP也輕、中增高，因此迫切需要一種檢測靈敏度更高的方示用于篩選原發(fā)性肝癌,研究發(fā)現(xiàn)肝癌細胞產(chǎn)生的甲胎蛋白與肝細胞良性增生時產(chǎn)生的甲胎蛋白不同。肝癌細胞產(chǎn)生的甲胎蛋白與小扁豆凝集素有很強的結(jié)合力，檢測這種甲胎蛋白的異質(zhì)體在甲胎蛋白中的比值升高（＞10%）可用于區(qū)分是原發(fā)性肝癌還是肝良性病變，異常凝血酶原（PIVKA-II）是維生素K缺乏或拮抗劑-II誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)，可出現(xiàn)于維生素K缺乏或肝細胞肝癌（HCC）患者的血清中，是診斷HCC的另一個重要指標(biāo)，中國的《慢性乙肝防治指南》已將PIVKA-II列為診斷原發(fā)性肝癌的重要指標(biāo)，而日本和光公司是世界上首位采用化學(xué)法檢測AFP異質(zhì)體和PIVKA-II的公司。而μTASwako i30全自動免疫檢測儀是由Wako Pure Chemical Industries.Ltd生產(chǎn)的全自動免疫檢測儀就是針對檢測這三個項目的專用設(shè)備。該儀器使用LBA法（Liquid-phase Binding Assay），無需固相，在液相中進行抗原抗體反應(yīng)后，分離并檢測形成的免疫復(fù)合體聯(lián)合檢測，可在一臺儀器上同時檢測AFP AFP-L 3%及PIVKA-II聯(lián)合檢測的結(jié)果。為了保證儀器的性能可靠，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)，我院現(xiàn)對該儀器進行性能評價以保證臨床結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 材料和方法

儀器與試劑：μTASwako i30全自動免疫檢測儀。甲胎蛋白及其異質(zhì)體比率：原測定試劑盒生產(chǎn)商日本和光，批號TQ659。甲胎蛋白及其異質(zhì)體比率校準(zhǔn)液 生產(chǎn)商日本和光，批號0123。甲胎蛋白及其異質(zhì)體比率質(zhì)控品（高值）生產(chǎn)商日本和光，批號0125。甲胎蛋白及其異質(zhì)體比率質(zhì)控品（低值）生產(chǎn)商日本和光，批號0124。芯片盒生產(chǎn)商日本和光，批號TR711。樣本稀釋液生產(chǎn)商日本和光，批號TP942。清洗液生產(chǎn)商日本和光，批號TP941。

2 主要性能評價方法

2.1 儀器質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控主要的目的是為了提高每個標(biāo)本測定結(jié)果的可靠性，而最有效的也是常用的質(zhì)控方法是質(zhì)控品檢驗法[1]。每天做標(biāo)本之前拿已知濃度的高、低值質(zhì)控品進行檢測，對比其測定值是否在控，只有結(jié)果在控后方可進行樣本的檢測。

2.2 精密度 儀器的精密度驗證包括批內(nèi)精密度和批間精密度。批內(nèi)精密度：取高、低兩個濃度水平的血清標(biāo)本作為待測樣品，分別同時檢測20次，計算其平均值，標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)，評價批內(nèi)精密度。批間精密度：用這兩濃度分裝-20℃保存，連續(xù)檢測4天，每天重復(fù)檢測5次，計算其平均值，標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)，評價批內(nèi)精密度評價、批間精密度。

2.3 線性范圍 取一高值血清樣本（盡可能接近廠商的檢測限）按1:0、1:1、1:3、1:19、1:199、0:1的比例用配套稀釋液稀釋后重復(fù)檢測2次，計算均值。將實測值與理論值作比較，參照CLSI的EP-6A2文件進行線性評估。

2.4 準(zhǔn)確性 在2份已知濃度的血清樣本中加入AFP-L3校準(zhǔn)品作為待測樣本，每份樣本重復(fù)檢測3次取均值，并與理論值進行比較計算回收率。回收率應(yīng)在80%-120%區(qū)間。

2.5 樣本比對 使用5份血清樣本有高值與低值，在本院該設(shè)備上檢測的結(jié)果與其他醫(yī)院檢測的結(jié)果進行比對。

2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 用EXCEL表對數(shù)據(jù)進行整理分析，用SPSS 17.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果

3.1 質(zhì)控 每天質(zhì)控良好，見表1

表1 質(zhì)控

3.2 精密度 批內(nèi)精密度結(jié)果見表2，批間精密度見表3。

表2 μTASWAKO i30 AFP批內(nèi)精密度數(shù)據(jù)

表3 μTASWAKO i30 AFP批間精密度數(shù)據(jù)

3.3 線性關(guān)系 AFP的線性驗證結(jié)果第一次顯示：y=0.9956x-1.5868 R=0.997。

第二次線性：y=0.9961x+0.8903 R=1 a滿足1±0.05的范圍，相關(guān)系數(shù)r＞0.975的要求。

3.4 準(zhǔn)確性 經(jīng)實驗數(shù)據(jù)得出，μTASWAKO i30準(zhǔn)確性良好。見表4。

3.5 樣本比對 使用5份血清樣本有陽性和陰性，在設(shè)備上檢測的結(jié)果與其他醫(yī)院檢測的結(jié)果進行比對。結(jié)果見表5。

表4 準(zhǔn)確性

表5 樣本比對

4 討論

一種新的儀器、設(shè)備的引進必須對其進行性能驗證，看是否能符合各項指標(biāo)，才能使其產(chǎn)生精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)，從而為臨床診斷和治療提供有幫助的信息。該儀器主要從精密度，準(zhǔn)確度，線性范圍等進行驗證。操作者必須熟悉性能評價的方法和儀器的工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項注意事項[2]。全自動電泳熒光免疫分析儀μTASWakoi30檢測試劑使用LBA法（Liquid-phase Binding Assay），在液相中進行抗原抗體反應(yīng)后，分離并檢測形成的免疫復(fù)合體。使熒光標(biāo)記的抗人AFP抗體與DNA標(biāo)記的抗人AFP抗體以及檢測樣本中的AFP在芯片內(nèi)的液相中發(fā)生免疫反應(yīng)，然后根據(jù)凝膠電泳分離形成的免疫復(fù)合體，通過激光誘導(dǎo)熒光法對免疫復(fù)合體進行熒光檢測。在芯片（17 mm＊47 mm面積大小）上完成了一系列的微流通路上完成了分注，混合，洗凈，分離和檢測的免疫檢測的一系列操作。

AFP是原發(fā)性肝癌的一種傳統(tǒng)的特異性血清指標(biāo)物，研究表明AFP對于原發(fā)性肝癌早期階段容易漏檢。目前，AFP-L3已經(jīng)是國際上公認的比單獨AFP檢測更優(yōu)秀的腫瘤標(biāo)記物，并且在2005年被美國FDA（食品和藥品管理局）批準(zhǔn)用于肝癌的臨床診斷[3]。PIVKA-II是維生素K缺乏或拮抗劑-II誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)（Protein Induced by Vitamin K Absence or Antagonist-II），又稱異常凝血酶原（Desgamma-carboxy prothrombin,DCP），正常肝臟在維生素K作用下會產(chǎn)生凝血酶原，但在維生素K缺乏或者肝細胞癌患者中產(chǎn)生異常凝血酶原，其血清水平在肝細胞肝癌（HCC）患者的血清中會升高，可用于HCC的診斷。目前PIVKA-II已在日本及西方國家作為肝細胞肝癌的主要標(biāo)記物[4]。PIVKA-II與AFP的產(chǎn)生及其在血清中的含量是相對獨立的，聯(lián)合檢測能提高HCC的靈敏度。

我院引進的μTASwako i30主要是測定AFP、AFP-L3%和PIVKAII，這三項是原發(fā)性肝細胞癌特異性較高的腫瘤標(biāo)志物檢測項目。AFP、AFP-L3%和PIVKAII三者的聯(lián)合檢測應(yīng)用于肝細胞癌（HCC）的早期診斷、療效觀察及預(yù)后評估有很高的臨床應(yīng)用價值。

通過驗證得知，μTASwako i30全自動免疫檢測儀的批內(nèi)精密度的CV＜5%，批間精密度CV＜10%以下（參照試劑說明書）。這表示該儀器的精密度良好。線性關(guān)系a滿足1±0.05的范圍，相關(guān)系數(shù)r＞0.975的要求，準(zhǔn)確性的回收率在80%-120%，滿足要求。與其他醫(yī)院樣本對比，結(jié)果顯示良好。以上評價結(jié)果顯示μTASwako i30全自動免疫檢測儀各項參數(shù)符合實驗室要求，適用于臨床。