蓮房化學(xué)成分的分離鑒定

宋 靜 陳亞南 饒高雄

云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 云南省民族特色養(yǎng)生理論與健康產(chǎn)品工程實(shí)驗(yàn)室，云南昆明 650500

蓮Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥花托即為蓮房Nelumbinis receptaculum，又稱蓮殼、蓮蓬殼、蓮蓬，于秋季果實(shí)成熟時(shí)采收，除去蓮子后以干燥品入藥[1-2]。蓮房在古籍中作為化瘀止血藥使用已早有記載，《儒門事親》中載蓮殼散（碳制蓮殼、棕皮與炒香附研粉）飯前服用可治療血崩；以干蓮房、荊芥均取一兩，再加入五錢枳殼、薄荷、樸硝，研粉后使用的蓮房枳殼湯可治療痔瘡[2-3]。此外，《本經(jīng)逢原》中也表明蓮房的主要作用是止血，可治療血崩、下血、溺血等癥。《本草拾遺》中記載蓮房酒煮服之可用于治療血脹腹痛及產(chǎn)后胎衣不下；水煮服之則可治療野菌之毒[4-5]。而在2020版《中華人民共和國藥典》中載“蓮房味苦澀、性溫，歸肝經(jīng)，具有化瘀止血的功效，主治崩漏、尿血、痔瘡出血、產(chǎn)后瘀阻、惡露不盡等癥”[1]。綜上可知，無論是古籍記載還是現(xiàn)代應(yīng)用，蓮房的主要功效都是止血，主要用于治療各種出血癥。

但查閱現(xiàn)有文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前人們對(duì)與蓮房藥理作用主要集中在原花青素的抗氧化活性上[6]，關(guān)于其止血化瘀的藥理作用研究幾乎沒有；其化學(xué)成分研究也較為缺乏，只有對(duì)蓮房總黃酮的提取工藝及HPLC（high performance liquid chromatography）法進(jìn)行含量測定的研究[7-10]。另外，在《中華人民共和國藥典》中對(duì)于蓮房的記載則比較簡單，只有基本的性味歸經(jīng)、功效主治及灰分、水分檢查等，鑒別上也僅僅只有性狀及粉末鑒別，并無明確的指標(biāo)性成分用于其含量測定及質(zhì)量控制[1]。本研究主要對(duì)蓮房的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，以期進(jìn)一步了解蓮房化瘀止血的物質(zhì)基礎(chǔ)，并為完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的指標(biāo)性成分。

1 器材

Bruker AvanceⅢ400 MHz型核磁共振儀[德國Bruker公司，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)]；柱色譜硅膠（200～300目，青島海洋化工廠）；GF 254薄色譜硅膠（青島海洋化工廠）；LH-20羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，美國Pharmacia公司）；CHP20P小孔樹脂凝膠（MCI Gel CHP-20/P120，日本三菱化成公司）；反相柱色譜材料ODS（Merck公司）；薄層色譜顯色劑（10%硫酸乙醇）；甲醇、乙醇、丙酮、三氯甲烷等試劑為工業(yè)（重蒸后使用）或化學(xué)純?nèi)軇?/p>

藥材購于云南省文山市，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院陳紹田研究員鑒定為植物蓮Nelumbo nuciferaGaertn.的干燥花托，植物標(biāo)本現(xiàn)存于云南中醫(yī)藥大學(xué)。

2 提取與分離

蓮房干品29kg，用錘敲擊蓮房底部至裂開，加12倍量的純化水，加熱回流提取2次，2h/次，合并濾液后減壓濃縮得到浸膏10.2kg（干膏：3.12kg），濾渣舍棄。向10.2kg浸膏中加入30L 95%乙醇，用手反復(fù)搓揉浸膏，靜置0.5h，過濾并濃縮得醇不溶部分（2.1kg）、醇溶部分（1kg）。醇不溶部分（2.1kg）經(jīng)TLC檢測后發(fā)現(xiàn)此部分主要為葡萄糖、蔗糖等成分，故丟棄；醇溶部分（1kg）用10L工業(yè)甲醇進(jìn)行溶解后再冷卻，過濾后得到醇溶液，濃縮醇溶液得干膏415g，其沉淀部分含有雜質(zhì)較多，且經(jīng)TLC檢測后發(fā)現(xiàn)該部分與醇溶液中成分基本一致，故丟棄。

415g蓮房樣品用MCI進(jìn)行初步處理，分別用純化水、甲醇、丙酮做洗脫劑沖柱。純化水洗脫部分TLC薄層對(duì)照主要為大極性鹽糖，故舍棄；甲醇洗脫部分TLC薄層對(duì)照為主要部分，則保留（命名為Fr.A）；丙酮洗脫部分TLC薄層對(duì)照主要為小極性油脂等，故舍棄。Fr.A（98.07g）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜甲醇洗脫后得到四個(gè)流份：A1、A2、A3、A4。Fr.A.1是以紫點(diǎn)為主的樣品；Fr.A.2點(diǎn)較雜且含有部分背景為主；Fr.A.3主要為三個(gè)黃點(diǎn)；Fr.A.4主要為黃點(diǎn)。

Fr.A.1經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇系統(tǒng)按不同配比進(jìn)行梯度洗脫后，再結(jié)合Sephadex LH-20凝膠柱色譜、反相柱Rp-18洗脫純化，得到化合物7（118mg）、8（232mg）、9（187mg）。

Fr.A.2經(jīng)MCI柱層析后，舍棄水、丙酮洗脫部分，回收甲醇部分浸膏后，再結(jié)合MCI柱、反相柱C18、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、硅膠反復(fù)洗脫純化，得到化合物5（78mg）、6（57mg）。

Fr.A.3經(jīng)MCI柱層析后，舍棄水、丙酮洗脫部分，回收甲醇部分浸膏，再經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇系統(tǒng)按不同配比進(jìn)行梯度洗脫純化，得到化合物1（8.7g）、3（236mg）。

Fr.A.4經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇系統(tǒng)按不同配比進(jìn)行梯度洗脫后，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜洗脫純化，得到化合物2（263.4mg）、4（23mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，CD3COCD3）：δ：7.81（1H，d，J=2.1Hz，H-2"）、7.68（1H，dd，J=2.2，8.5Hz，H-6"）、6.98（1H，d，J=8.5Hz，H-5"）、6.50（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.25（1H，d，J=2.1Hz，H-6）；13C-NMR（100MHz，CD3COCD3）：δ：175.7（C-4）、164.1（C-7）、161.4（C-5）、156.9（C-9）、147.5（C-2）、146.1（C-3"）、145.0（C-4"）、135.8（C-3）、122.8（C-1"）、120.6（C-6"）、115.3（C-2"）、114.8（C-5"）、103.2（C-10）、98.3（C-6）、93.5（C-8）。以 上 數(shù) 據(jù) 與 文 獻(xiàn)[11]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物1為槲皮素（Quercetin）。

化合物2：黃色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.52（1H，s，J=2.2Hz，H-2"）、7.68（1H，d，J=2.2Hz、8.5Hz，H-6"）、6.80（1H，d，J=8.5Hz，H-5"）、6.40（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.20（1H，d，J=2.1Hz，H-6），5.38（1H，d，J=7.6Hz，H-1"）；13C-NMR（100MHz，DMSO-d6）δ：178.0（C-4）、164.6（C-7）、161.7（C-5）、156.8（C-9）、156.7（C-2）、149.0（C-3"）、145.3（C-4"）、134.0（C-3）、122.5（C-6"）、121.6（C-1"）、116.4（C-5"）、115.6（C-2"）、102.3（C-1"）、104.4（C-10）、99.1（C-6）、93.9（C-8）、76.3（C-5"）、73.7（C-3"）、71.7（C-2"）、68.4（C-4"）、60.6（C-6"）。以 上 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物2為異槲皮苷（Isoquercitrin）。

化合物3：黃色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.59（1H，dd，J=8.4，2.2Hz，H-6"）、7.54（1H，d，J=1.9Hz，H-2"）、6.83（1H，d，J=8.4Hz，H-5"）、6.41（1H，d，J=2.0Hz，H-8）、6.21（1H，d，J=2.0Hz，H-6）、5.49（1H，d，J=7.4Hz，H-1"）、3.57～3.33（4H，m，H-2"～5"）。13CNMR（100MHz，DMSO-d6）δ：177.6（s，C-4）、170.2（s，C-6"）、164.8（s，C-7）、161.6（s，C-5）、156.7（s，C-9）、156.6（s，C-2）、149.1（s，C-4"）、145.4（s，C-3"）、133.6（s，C-3）、122.1（s，C-1"）、121.3（d，C-6"）、116.5（d，C-5"）、115.7（d，C-2"）、104.3（s，C-10）、101.6（d，C-1"）、99.2（d，C-6）、94.0（d，C-8）、76.4（d，C-3"）、76.3（d，C-5"）、74.3（d，C-2"）、71.8（d，C-4"）。以 上 數(shù) 據(jù) 與 文獻(xiàn)[13]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物3為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（quercetin-3-O-β-D-glucuronide）。

化 合 物4：1H-NMR（400MHz，CD3COCD3）δ：7.99（1H，d，J=9.8Hz，H-4）、6.34（1H，d，J=2.1Hz，H-8）、6.26（1H，d，J=2.1Hz，H-6）、6.02（1H，d，J=9.8Hz，H-3）；13C-NMR（100MHz，CD3COCD3）δ：161.9 （s，C-7）、160.5（s，C-2）、157.1（s，C-5）、155.7（s，C-9）、138.8（d，C-4）、109.5（d，C-3）、102.2（s，C-10）、98.2（d，C-6）、94.6（d，C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物4為5，7-二羥基香豆素（5，7-Dihydroxycoumarin）。

化合物5：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：7.32（1H，s，H-8）、6.92（1H，s，H-5）、3.57～3.33（m，H-2"～5"）、2.22（3H，s，H-11"）、2.19（3H，s，H-12"）；13CNMR（100MHz，DMSO-d6）δ：156.2（s，C-2）、154.3（s，C-3）、131.7（s，C-6）、131.4（s，C-7）、125.4（s，C-9）、123.8（s，C-10）、117.1（d，C-8）、116.5（d，C-5）、74.1（d，C-3"）、73.2（d，C-4"）、68.7（d，C-2"）、63.9（t，C-5"）、45.1（t，C-1"）、19.8（q，C-11"）、19.2（q，C-12"）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物5為1-核糖醇基-2，3-二酮-1，2，3，4-四氫-6，7-二甲基-喹喔啉（1-ribityl-2，3-dike to-1，2，3，4-tetrahydro-6，7-dimethyl- quinoxaline）。

化合物6：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR（400MHz，MeOD）δ：6.75～6.78（2H，m，H-4，5）、6.65～6.68（2H，m，H-3，6）；13C-NMR（100MHz，MeOD）δ：146.3（s，C-1，2）、120.9（d，C-4，6）、116.4（d，C-3，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物6為兒茶酚（catechol）。

化合物7：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：2.35（2H，t，J=7.4Hz，H-2）、1.63（2H，m，H-3）、1.30（24H，m，H-4～15）、0.88（3H，t，J=6.5Hz，H-16）；13C-NMR（CDCl3，400MHz）δ：179.7（C-1）、34.0（C-2）、24.7（C-3）、29.7～29.1（C-4～13）、31.9（C-14）、22.7（C-15）、14.1（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物7為棕櫚酸（palmitic acid）。

化合物8：白色粉末，溶于氯仿。10%硫酸-乙醇溶液顯紫紅色。通過與胡蘿卜苷對(duì)照品的TLC對(duì)照，用多種溶劑系統(tǒng)展開后其Rf值及顯色行為均相同，故鑒定化合物17為胡蘿卜苷（daucosterol）。

化合物9：白色粉末，溶于氯仿。10%硫酸-乙醇溶液顯紫色。通過與β-谷甾醇對(duì)照品的TLC對(duì)照，用多種溶劑系統(tǒng)展開后其Rf值及顯色行為均相同，故鑒定化合物16為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

4 討論

本課題從蓮房中分離鑒定出9個(gè)化合物，化合物1～9是初次從蓮房中分離得到，化合物4、5則為蓮中首分。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，蓮房醇提物中主要成分為黃酮類成分，根據(jù)《本草拾遺》中記載的蓮房酒煮服之可用于治療血脹腹痛，可知蓮房醇提物可用于止血，但目前其具體活性成分不明。而現(xiàn)代研究表明，槲皮素可通過增加毛細(xì)血管抵抗力和降低血管滲透性，從而縮短凝血時(shí)間，起到止血作用[18]；故槲皮素有很大可能是止血作用的活性成分。此次實(shí)驗(yàn)分離到的成分中槲皮素的含量較高，純品量有8.7g；為后期蓮房化瘀止血活性成分的篩選提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也為完善《中華人民共和國藥典》中蓮房的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及含量測定的研究提供了一定的依據(jù)。