非瘟背景下復養場消毒清洗及檢測評估技術

顏運秋，迂 斌，徐少勇,劉云鵬

（1.長沙道勤生物科技有限公司，湖南 長沙 410000；2.湖南農業大學動物醫學院）

1 復養豬場洗消前的各項準備工作

清洗前準備：防護服、防護手套、眼鏡、面罩等；生石灰、燒堿、拳力巴斯德、凹凸巴斯德、過硫酸氫鉀、戊二醛類等消毒藥。

檢查豬場外部圍欄、圍墻，排水、糞污管線管道等，保證封閉運行；洗消期間所有進出豬場的人員務必通過檢查，執行洗澡、消毒、更衣等程序；所有進出豬場車輛務必徹底清洗、消毒，包括司機在內的所有進場人員更換場內衣服、鞋，消毒液洗手，車內腳墊、腳踏板等徹底洗消；所有的工作服當天在場內清洗，并在洗衣機內加入消毒液。

2 復養場的消毒及清洗

對于復養場來說，豬舍及設施攜帶的病毒很多，如按正常洗消程序“清洗—消毒—干燥”的流程，很容易造成欄舍中檢不到病毒，復養很難成功的事實。因為在清洗過程中，病毒就隨水流進入并殘存于排污管道，而排污管道不可能做到全管道高濃度消毒水浸泡。所以對復養場必須進行消洗而不是洗消。

實踐證明，3 次消洗法（消毒—清洗—干燥—再消毒—再清洗-再干燥—第3 次消毒—第3 次清洗—第3 次干燥）非常實用，可有效避免欄舍環境中病毒進入污道等造成再次污染。

在消洗順序方面應遵循水往低處流的原則，先消洗料線，水線，再欄舍，最后污道。最大程度避免了欄舍環境被病毒二次污染的風險。

2.1 料線、水線

拆卸所有料線，清潔后放置于2%燒堿中浸泡消毒24 h。拆卸所有飲水器和接頭等，放置于2%燒堿中浸泡消毒24 h。蓄水池或水塔維修、清洗、消毒。水線組裝好后，在蓄水池中添加敏感消毒劑，進行在管道中浸泡，用水循環沖24 h。清空所有飼料庫存，用于喂魚、家禽，嚴禁復產再用。深度清洗料倉、料塔，之后用煙霧熏蒸產品進行第一次處理，再拆除能拆卸的絞龍、管線等零件進行消毒清理。間隔2周進行第二次消毒處理。

2.2 水道

用敏感消毒劑如如意酸（1∶100倍稀釋），對所有水線、飲水器消毒24 h，然后放清水清洗。

2.3 通風系統

風機、水簾、控制器、傳感器等進行消毒、洗刷干燥。

2.4 豬場全場消毒及清洗

豬場無害化清理完，必須對豬場內外、豬舍內外的殘留垃圾及剩余物資清理、清場。徹底清理、清場后，對整個豬場進行全面、系統、不留死角的多種方式的清洗、消毒處理。場內剩余原料、飼料、藥品、木制品、橡膠墊、工具、垃圾等進行深埋或焚燒處理。然后再進行豬舍內外的消毒清洗。

2.5 豬欄：三消洗熏法

①拳力巴斯德泡洗（1∶200稀釋）→沖洗→拳力巴斯德泡洗（1∶200稀釋）→沖洗→ATP檢測（合格）→干燥（凹凸巴斯德干粉消毒（20 g/m2））→空置→熏蒸（高錳酸鉀32 g+福爾馬林64 ml/m3）→qPCR 檢測；②拳力巴斯德泡洗（1∶200稀釋）→沖洗→拳力巴斯德泡洗（1∶200 稀釋）→沖洗→ATP檢測（不合格）→泡洗→沖洗→ATP檢測→干燥（凹凸巴斯德干粉消毒（20 g/m2））→空置→熏蒸（高錳酸鉀32 g+福爾馬林64 ml/m3）→qPCR 檢測；③沖洗時建議按照1：5 000倍稀釋比例添加如意酸，以達到更徹底的清洗消毒效果；④熏蒸消毒：高錳酸鉀+福爾馬林，環境溫度應保持20 ℃以上、相對濕度達到80%～90%，消毒作用才得以發揮。使用方法：比例為1∶2，先放入高錳酸鉀，高錳酸鉀16 g+福爾馬林32 ml/m3，放入瓷鍋中加熱煮沸24h直至將水蒸發耗干→密封72 h→然后開窗+風機通風48h；⑤路面白化配比：通常用其20%乳劑。具體配制方法是：取1 kg 石灰加1L 水生成熟石灰，將所得的熟石灰再加8L 水即成20%石灰乳。每平方米用1L石灰乳刷1～3次；具體推薦按照：2.5 kg火堿+10 kg生石灰+50 kg溫水，就可以配成20%生石灰乳+5%燒堿的成品，每平方米用1L 石灰乳刷1～3次；周圍50 m和道路全部噴白。每7 d噴白一次；⑥糞溝：用2.5 kg 火堿+50 kg 水,配成5%比例的溶液,進行浸泡,每天添加1次，連用3 d。

2.6 豬舍內設備、器具

清潔和消毒所有設備。豬欄等鐵制品進行火焰消毒。對可浸泡的器具采用戊二醛等浸泡24 h消毒。將所有能拆卸的設備，如：豬欄、漏縫地板、產床隔離板、保溫箱、手推車、柜子、架子、門窗、燈具移至室外消毒清洗后置于室外晾曬。

2.7 豬舍內外墻及通道、地面

先噴灑復合戊二醛，之后大掃除，之后涂抹上石灰漿，復產前重復兩次。干燥后將所有小設備、門窗、地板、擋板、漏縫板移走，在地面噴撒300 g/m2的生石灰（可用專門的粉末噴撒設備提高噴撒均勻度），也可以換成燒堿。

2.8 糞污及其管道也是重中之重

豬舍內外糞溝和舍內漏糞板下的糞尿都要進行消毒處理后清理，清空糞水池后進行消毒清洗，并對糞便等進行無害化處理。對所有糞污痕跡或糞污堆積物，都必須噴撒生石灰，并攪拌（每平方米500 g，混合均勻）。清理所有排糞管道及蓄糞池，然后消洗。所有漏縫地板、糞池、糞溝，徹底先用3%燒堿浸泡消毒后再清洗。

2.9 藥房庫房

燒掉或無害化處理所有沒有用完的獸藥、物品外包裝。庫房密閉臭氧消毒，庫房內所有備用器材、設備、工具等，消毒液浸泡或高壓噴洗消毒。

2.10 辦公室、食堂和宿舍、生產線洗澡間更衣室

消毒干燥后進行粉刷。使用過硫酸氫鉀溶液進行消毒，后使用高錳酸鉀和甲醛熏蒸48 h。無害化銷毀剩余所有衣服和鞋子、雜物。對豬舍外、生活區、宿舍、食堂、辦公區域消毒。

2.11 防鳥、防鼠、驅蠅、驅蟲

對場內蚊、蠅、蜱、老鼠、鳥類等進行殺滅，處理場內貓、狗等其他動物。給飼料塔裝上驅鳥器。在豬場圍墻四周建立“生石灰+碎石”的隔離帶，阻止老鼠進入豬場。將室內風機開至最大功率檢測，對所有通道及角落清洗、消毒、驅蠅、驅蟲。入口處安裝防蚊網，室內安裝電子滅蚊蠅燈，除主水管道外，其他管道系統使用酸化劑（pH值＜2.0）沖洗后拆除封頭以將存水徹底放空，該區域也不能有任何明水存在，撒布滅鼠藥并封閉該區域，避免人員物資進入。

2.12 樹木雜草垃圾

清除豬場內及圍墻外10 m內樹木、雜草及垃圾。帶根除草、帶根除樹，不便砍伐的樹木使用落葉劑清除枯葉落葉。燒掉所有的草、樹和所有廢棄的雜物、垃圾等。在豬場內外草叢中，噴灑環境生態修復劑，清除蜱蟲卵，控制非洲豬瘟傳播媒介，控制蚊蠅卵。每周噴灑一次環境生態修復劑，除臭、降氨、控制蟲卵和創造不利于病原菌生存的環境。

采用多種消毒方式消毒：清洗消毒、粉刷消毒、噴霧消毒、熏蒸消毒、火焰消毒。只要允許，如豬欄、豬舍地面盡量采用一次火焰消毒。

3 復產前消洗后的空欄檢測評估

第二輪消洗后可采用ATP 生物熒光檢測儀（檢測儀10～15 s 出結果）或簡易熒光PCR 法對不同區域進行采樣檢測，不合格立即進行再次清洗。當豬場最后一個合格區域自然干燥封閉2周后，正常進入生產區的作業流程時再次分段以實時熒光定量PCR 檢測（3～4 h），要求對重點部位進行采樣檢測，整場內外合格為終極目標。樣品的采集應根據每個豬場的實際情況而定，豬場大，采集的樣品自然多，基本原則是采樣所覆蓋的環節要夠多、夠細，但所采集的樣本并不代表100%對應豬場的實際情況。統計學上講，樣本量越多，檢測后的效果越能夠反映豬場的實際情況。

3.1 采樣點的描述

道路或通道采樣：路面表層（土壤）取6個；車輛：分別在后車輪里側2 個；每層廂板5個；前臉1個；后門1個；駕駛室腳踏板1個，方向盤1個；人員衣物（司機、入場人員）：上衣衣袖2個，背部1個，褲子膝蓋2個；鞋子前幫圍2個，中底2個，幫面2個；工具：鐵鍬和掃帚兩端各采2個；病死豬處理區：1 m以內地表6個；場區大門口：道路6個，門把手2個；門衛室：地面均勻分散（4個角，中心）采5個點；內、外門把手各1；豬舍內（床位）設施：產房10個點（隨機5個產床，每個床采縫條中間及橫欄2 個點）；妊娠舍10 個點（隨機5個欄位，每欄位后欄、橫欄2個點）；保育舍10個點（隨機5個床，每個床采縫條中間及地面2個點）；育肥舍10個點（隨機5個欄，每個欄2個點）；廚房：冷凍肉1個；餐廳：門口地面內外各3 個，門把手2 個；污水：蓄水池表面水1個；飲用水：發病畜舍遠端出水口3個（不足3個隨機選擇母豬舍和妊娠舍）；場區大門口：地表6個，門把手2個；豬區或售豬中轉站：地磅5個點（地磅欄條2個，地面3個）；地磅下地面4個點；附近地面上選5個點；員工進入生產區通道：地面和附屬設施衣服存放區各取6個點；風機和風道：出風口內側壁和扇葉各取3個點，風道隨機取3個點；發病舍（任選2棟）糞溝或出糞口：糞溝3 2個，出糞口3 2個。

3.2 樣品采集工具和保存運輸

物體表面取樣時用蘸取適量滅菌生理鹽水或PBS 緩沖液的棉拭子在采樣點5 DN 5 cm的區域內涂擦表面（一個采樣點使用一個棉試子），手持部分丟棄，剩余部分無菌操作放入裝有5 mL 含適宜中和劑的滅菌生理鹽水EP 管中，塞緊試管，標記并記錄。運輸過程中，請在冷藏條件下運輸，可在泡沫箱中放置冰袋或干冰。

3.3 結果評估

所有待檢樣品必須檢測全部為陰性，否則從頭再來。因為樣品只具有代表性，并不具備代表所有環節的全部細節，而非洲豬瘟病毒恰恰是存在于每個細節之處。因此，我們要求空欄檢測的所有樣品檢測結果必須為陰性方可進入下一階段——哨兵豬的引入。

復產前最后一次消毒工作由里向外即生產線、附屬生產區、生活區、辦公區的順序進行。所有上述場地的門口、室外噴撒生石灰，最后設置警戒標志，不允許任何人員再進入，直至復產。□