蜂膠的抗病毒作用研究進(jìn)展

胡福良│文

浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，杭州 310058

蜂膠具有抗病原微生物、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血脂血糖、提高免疫力、促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)等十分廣泛而顯著的生物學(xué)活性，其中，抗病原微生物作用是蜂膠最重要的生物學(xué)活性之一[1]。蜂膠抗病原微生物活性的應(yīng)用最早可以追溯到古埃及時(shí)代。受蜜蜂使用蜂膠與蜂蠟包裹入侵者尸體防止腐爛的啟發(fā)，古埃及人很早便學(xué)會將蜂膠作為一種防腐材料加以應(yīng)用。而對于蜂膠抗菌活性的系統(tǒng)性研究最早開始于20世紀(jì)40年代[2]。近20年來，隨著人們對蜂膠關(guān)注度的逐漸升高，大量圍繞蜂膠抗病原微生物活性的相關(guān)研究也隨之展開，其中以蜂膠抗細(xì)菌活性的報(bào)道最多。國內(nèi)外大量研究表明，盡管蜂膠的植物來源和提取方法不同，但蜂膠的抗菌活性相似，且抗菌范圍非常廣泛，除了一些常見的革蘭氏陽性及陰性菌，蜂膠對牙周致病菌甚至某些抗生素耐藥菌都有良好的抗菌效果[3,4]。而且，初步探明了蜂膠抗菌的可能機(jī)制：（1）破壞菌體細(xì)胞膜及細(xì)胞壁的完整性，使細(xì)菌內(nèi)容物外流[5]；（2）抑制細(xì)菌生物膜形成，影響細(xì)菌的生長和黏附[6]；（3）抑制細(xì)菌毒力因子活性及其相關(guān)基因的表達(dá)，使其侵襲力和毒力下降[7]。但是，國內(nèi)外對蜂膠的抗病毒活性研究較少，這主要是受研究條件所限。下面就近20年來蜂膠抗病毒作用的相關(guān)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為蜂膠抗病毒活性的進(jìn)一步研究以及開發(fā)利用提供參考。

一、蜂膠的抗病毒作用

蜂膠具有良好的抗病毒效果，能有效控制病毒復(fù)制、激活宿主防御系統(tǒng)。近年來有關(guān)蜂膠抗病毒方面的研究也逐漸增多。

1.抗人類1型免疫缺陷病毒（HIV-1）

早在1997年，Harish等研究發(fā)現(xiàn)蜂膠具有抗人類1型免疫缺陷病毒（HIV-1）的作用，能夠顯著抑制HIV-1在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制[8]。Gekker等（2005）的研究進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)論。他們利用培養(yǎng)的CD4+淋巴細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞研究了不同地區(qū)蜂膠乙醇提取物抗HIV-1的活性。結(jié)果表明，蜂膠能有效抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，蜂膠作用濃度為66.6μg/ml時(shí)，對HIV-1在CD4+淋巴細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)抑制率最大，可分別達(dá)到85%和98%，并且這種作用具有濃度依賴性；不同來源的蜂膠表現(xiàn)出相似的抗病毒活性。此外，當(dāng)把蜂膠和抗艾滋藥物聯(lián)合使用時(shí)，結(jié)果顯示蜂膠與齊多夫定（zidovudine，反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑）具有明顯的協(xié)同作用，但對茚地那韋（indinavir，蛋白酶抑制劑）的協(xié)同作用表現(xiàn)不明顯[9]。

2.抗流感病毒

Shimizu等（2008）首次研究發(fā)現(xiàn)蜂膠具有體內(nèi)抗流感活性。他們對產(chǎn)自巴西南部13個(gè)蜂膠乙醇提取物的體內(nèi)和體外抗流感活性進(jìn)行了評估，經(jīng)過體外的空白形成減少實(shí)驗(yàn)，篩選出4種具有抗流感活性的提取物，并且通過鼠流感感染模型對這4種提取物的體內(nèi)抗流感活性進(jìn)行了進(jìn)一步評估。結(jié)果表明，其中只有一種提取物在10mg/kg口服劑量時(shí)，能顯著降低感染小鼠的體重?fù)p失；2mg/kg和10mg/kg的劑量還能有效延長感染鼠的壽命；10mg/kg劑量的蜂膠乙醇提取物能顯著減少感染鼠支氣管肺泡灌洗液中的病毒量。然而，通過對感染鼠免疫相關(guān)的一些細(xì)胞因子水平檢測發(fā)現(xiàn)，它們并沒有發(fā)生變化，表明這種蜂膠可能本身就含有一些抗流感成分，并非是通過激活宿主免疫來發(fā)揮其抗流感作用[10]。

3.抗單純皰疹病毒（HSV）

單純皰疹病毒（HSV）能引起人類多種疾病，如齦口炎、角膜結(jié)膜炎、腦炎等。Yildirim等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，土耳其蜂膠提取物能有效阻止HSV-1和HSV-2在人喉癌上皮細(xì)胞HEp-2細(xì)胞上的復(fù)制[12]。Mazia等（2016）進(jìn)一步開發(fā)了一種含巴西綠蜂膠的粘附熱響應(yīng)系統(tǒng)，輔助治療由HSV-1感染引起的口腔黏膜損傷，利用該系統(tǒng)也能更好地提升蜂膠的生物利用度和延長作用時(shí)間[13]。

4.抗偽狂犬病病毒（PRV）

Búrquez等（2015）研究了墨西哥蜂膠乙醇提取物對感染了偽狂犬病病毒的馬-達(dá)氏牛腎細(xì)胞（MDBK）的影響，結(jié)果表明在感染之前用0.5 mg/ml蜂膠乙醇提取物孵育MDBK細(xì)胞2小時(shí)能顯著降低空斑形成單位的數(shù)目；其作用機(jī)制可能與蜂膠損傷病毒包膜蛋白，影響病毒擴(kuò)散和復(fù)制周期有關(guān)[11]。

5.抗畜禽傳染性病毒

郭振環(huán)等（2016）研究了蜂膠黃酮對宿主細(xì)胞抗病毒能力的影響。他們首先采用MTT法測定蜂膠黃酮對宿主雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）和PK-15細(xì)胞的安全濃度，再將蜂膠黃酮分別與新城疫病毒（NDV）、雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）及豬細(xì)小病毒（PPV）感染宿主細(xì)胞，在感染后測定宿主細(xì)胞的存活率。結(jié)果顯示，蜂膠黃酮可顯著提高宿主細(xì)胞抗病毒能力，這種活性與其劑量呈正相關(guān)。蜂膠黃酮提高宿主細(xì)胞抗有囊膜病毒NDV和TGEV作用主要體現(xiàn)在病毒感染的前期，而提高宿主細(xì)胞抗無囊膜病毒IBDV和PPV作用主要體現(xiàn)在病毒感染的后期，提示蜂膠黃酮可用于NDV和TGEV的預(yù)防及IBDV和PPV的治療[14]。

二、蜂膠中抗病毒的活性物質(zhì)

Amoros等（1992）通過實(shí)驗(yàn)確定了蜂膠中抗1型單純皰疹病毒的主要黃酮性成分，并發(fā)現(xiàn)黃酮醇的活性要強(qiáng)于黃酮的活性，活性順序?yàn)楦吡冀兀旧侥畏樱鹃纹に?，且表明這些抗病毒成分之間還存在協(xié)同作用[15]。后來，Lyu等（2005）的實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)了Amoros等的結(jié)論，并發(fā)現(xiàn)受試的黃酮類成分對1型單純皰疹病毒的作用強(qiáng)于對2型單純皰疹病毒的作用[16]。

Takemura等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，巴西蜂膠水提物中的二咖啡酰奎寧酸能通過增強(qiáng)感染甲型流感病毒小鼠體內(nèi)的腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡，誘導(dǎo)配體（TRAIL）的表達(dá)，促進(jìn)被感染細(xì)胞的凋亡和病毒的清除，從而發(fā)揮體內(nèi)抗流感病毒活性[17]。

Ma等（2015）研究了納米蜂膠黃酮（NPF）和蜂膠黃酮對豬細(xì)小病毒（PPV）在體外和體內(nèi)抑制效果。結(jié)果表明，NPF可以顯著抑制PPV感染豬腎PK-15細(xì)胞，并且納米蜂膠黃酮比蜂膠黃酮效果更好。NPF在高、中劑量時(shí)能夠顯著地抑制PPV在肺癌、性腺、血液、脾的復(fù)制，降低PPV對豚鼠的體重的影響，并改善血清中PPV的血凝抑制作用。此外，它還可以增加血清中IL-2和IL-6 含量，促進(jìn)機(jī)體對病毒的抵抗[18]。

蜂膠抗病毒活性除了表現(xiàn)在其本身對病毒直接的抑制和殺滅作用外，還可以作為佐劑結(jié)合特定抗原注入體內(nèi)，以增強(qiáng)機(jī)體特異性免疫應(yīng)答的方式幫助宿主抵抗和清除病毒[19]。

三、研究展望

隨著抗生素及抗病毒藥物的廣泛應(yīng)用，耐藥性問題也日益突出，因此尋找具有抗病原微生物活性的天然藥物也變得越來越重要和緊迫。蜂膠這一經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)具有廣泛而顯著的抗病原微生物活性的天然產(chǎn)物，其應(yīng)用前景十分廣闊。由于蜂膠成分復(fù)雜，作用效果往往是各種活性成分通過各種作用機(jī)制交互協(xié)同作用的結(jié)果，從而加大了對其作用機(jī)制研究的難度，加上蜂膠的臨床研究缺乏，因此，要想將蜂膠最終開發(fā)為臨床用藥還需要開展大量艱巨的基礎(chǔ)和臨床研究工作，可謂任重道遠(yuǎn)。