不同干燥工藝對寒蘭花總黃酮及抗氧化能力的影響

李程勛，徐曉俞，李愛萍*，鄭開斌, *

1. 福建省農(nóng)業(yè)科學院作物研究所（福州 350013）；2. 福建省農(nóng)業(yè)科學院亞熱帶農(nóng)業(yè)研究所（漳州 363005）

寒蘭是蘭科蘭屬植物，是國蘭之一，廣泛分布于中國、日本南部、朝鮮半島南端，在中國寒蘭主要分布在福建、廣東、浙江、廣西、江西、湖南、湖北、四川等地[1-2]。蘭花性平、味辛，全草有養(yǎng)陰潤肺之療效，兼治咯血、頭暈目眩、神經(jīng)衰弱、尿道感染等病癥[3]。寒蘭具有很高的商業(yè)價值[4-5]，隨著技術發(fā)展進步，寒蘭花培育規(guī)模逐步增大，但是近期市場上盆栽寒蘭花的銷售量增長不快，甚至出現(xiàn)不增反減現(xiàn)象，寒蘭花過剩，腐敗丟棄現(xiàn)象大量發(fā)生，且寒蘭花花期短、保鮮要求高、長途運輸困難，在玫瑰花[6]、牡丹花[7]等早期發(fā)展時都有存在這些問題，相應干燥技術的開發(fā)研究使得這些花的資源優(yōu)勢得以充分發(fā)揮，因此研究寒蘭花功效成分并有針對性地研究寒蘭花干燥儲存技術，對于寒蘭花的市場應用前景和企業(yè)生產(chǎn)開發(fā)具有意義。黃酮類化合物是蘭花中主要功效成分[8]，可以抗菌、抗炎、抗輻射，降低血糖、膽固醇，改善血液循環(huán)，促進傷口愈合和止痛等[9-13]。試驗通過研究不同干燥工藝對寒蘭花總黃酮及其抗氧化能力的影響，以期為寒蘭花儲存、開發(fā)和應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

寒蘭鮮花（福建省連城蘭花股份有限公司）。

1.2 試劑和儀器

無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉（均為國產(chǎn)分析純）；蘆丁（含量大于98%，北京索萊寶科技有限公司）；1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，東京化成工業(yè)株式會社）。

電熱鼓風干燥箱（DHG-9240 A，上海一恒科學儀器有限公司）；手提式粉碎機（HK-04 A，廣州市旭朗機械設備有限公司）；電子天平（Denver TP-214，丹佛儀器有限公司）；超聲儀（SB-5200 DTDN，寧波新芝生物科技股份有限公司）；離心機（Centrifuge 5804 R，eppendorf 公司）；紫外-可見分光光度計（T6新世紀，北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 寒蘭花干燥方法

分別采用3種不同的殺青方法和3種不同的烘干溫度對寒蘭鮮花進行處理（見表1）。殺青方法采用較為傳統(tǒng)的蒸汽殺青[14]和高溫殺青[15]，烘干溫度根據(jù)前期試驗得出，低于45 ℃烘干時間過長，高于75 ℃時寒蘭花斷碎較多、顏色變黑且焦味明顯。

表1 寒蘭花干燥方法

1.3.2 樣品溶液制備

將烘干至恒重的寒蘭花，用手提式粉碎機打成粉末（80目），以1︰20（g/mL）料液比加入90%乙醇溶液，混合均勻，靜置10 min，靜置后樣品超聲提取（40 ℃）10 min，在10 000 r/min下離心5 min，取上清液即為樣品溶液。

1.3.3 不同處理寒蘭花總黃酮測定

標準品溶液制備。精密稱取14.4 mg標準品蘆丁于50 mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度線，制成質(zhì)量濃度0.288 mg/mL的標準品溶液。

顯色反應及測定方法。取適量測定溶液于5 mL試管中，加入0.3 mL的5%亞硝酸鈉溶液，混合均勻，靜置6 min；加入0.3 mL的10%硝酸鋁溶液，混合均勻，靜置6 min；加入2 mL的4%氫氧化鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度線，混合均勻，靜置10 min，于510 nm處測定其吸光度。

標準曲線的繪制。分別移取0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5和1.8 mL標準品溶液，按照顯色及測定方法進行測定，以吸光度為縱坐標，標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線。

樣品溶液測定。取樣品溶液，按照顯色及測定方法進行測定，得到樣品溶液的吸光度，每個樣品重復3次，并對其含量進行計算。

式中：W為樣品總黃酮得率，%；C為待測樣品總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；V為待測液體積，mL；n為稀釋倍數(shù)；m為寒蘭花質(zhì)量，g。

1.3.4 不同處理寒蘭花DPPH自由基的清除能力測定

待測樣品溶液的稀釋。取樣品溶液，分別稀釋成10%（5 mg/mL），1%（0.5 mg/mL）和0.1%（0.05 mg/mL）的溶液進行測定。

測定方法。配制質(zhì)量濃度39.40 μg/mL的DPPH自由基無水乙醇溶液，存放冰箱，30 d內(nèi)有效；取2 mL DPPH溶液和2 mL樣品混合，靜置30 min后，于517 nm波長檢測吸光度，并對其DPPH自由基清除率進行計算。

式中：A0為DPPH自由基乙醇溶液與純水混合液吸光度；Ai為DPPH自由基乙醇溶液加等體積樣品測得吸光度；每個樣品重復3次，取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同干燥工藝對寒蘭花總黃酮的影響

對不同干燥工藝下制成的寒蘭花總黃酮含量進行測定，結(jié)果見表2和圖1。

結(jié)果表明，90 ℃殺青的寒蘭花總黃酮顯著高于水蒸氣殺青和不殺青寒蘭花，不同殺青方法下的寒蘭花總黃酮整體呈現(xiàn)為：90 ℃殺青＞不殺青＞水蒸氣殺青，其中在45 ℃烘干條件下，90 ℃殺青寒蘭花總黃酮含量是水蒸氣殺青的2.29倍；在60 ℃烘干條件下，90 ℃殺青寒蘭花總黃酮含量是水蒸氣殺青的2.12倍；在75 ℃烘干條件下，90 ℃殺青寒蘭花總黃酮含量是水蒸氣殺青的1.96倍，因此得出不同殺青方法對于寒蘭花總黃酮的影響很大。不同烘干溫度下寒蘭花總黃酮得率差異不大，因此得出45，60和75 ℃這3個烘干溫度對于寒蘭花總黃酮的影響不大。

表2 不同干燥工藝下寒蘭花總黃酮含量

2.2 不同干燥工藝對寒蘭花抗氧化能力的影響

對不同干燥工藝下制成的寒蘭花進行提取，對其提取液的DPPH自由基清除能力進行測定，結(jié)果見表3和圖2。

結(jié)果表明，在較高濃度（10%）和較低濃度（0.1%）的寒蘭花提取液中，所有處理的寒蘭花提取液DPPH自由基清除能力沒有顯著性差異；在中等濃度（1%）寒蘭花提取液中，90 ℃殺青寒蘭花DPPH自由基的清除能力顯著強于其他兩種殺青方式。

圖2 10%寒蘭花提取液的DPPH自由基清除能力

圖3 1%寒蘭花提取液的DPPH自由基清除能力

圖4 0.1%寒蘭花提取液的DPPH自由基清除能力

3 討論

不同干燥工藝對于寒蘭花的總黃酮影響很大，其中，水蒸氣殺青顯著降低寒蘭花總黃酮含量，可能因為溫度過高造成部分黃酮類物質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)化或熱降解，而90℃殺青寒蘭花總黃酮會比不殺青高，這可能是因為90℃殺青后，寒蘭花中含有的黃酮類物質(zhì)降解酶失活，因此對于寒蘭花中存在的黃酮物質(zhì)降解速度減慢。

干燥工藝對于寒蘭花提取液的DPPH自由基清除能力也有一定影響，在中等濃度（1%）時，90 ℃殺青寒蘭花提取液的DPPH自由基清除能力顯著高于另外2種殺青方法。黃酮類物質(zhì)是一種抗氧化物，是天然抗氧化劑，研究中寒蘭花提取物的DPPH自由基清除能力也和寒蘭花中的總黃酮含量呈現(xiàn)一定相關關系，90 ℃殺青的寒蘭花總黃酮含量較高，DPPH自由基清除能力也較強。

4 結(jié)論

干燥工藝對于寒蘭花總黃酮的影響很大，不同殺青條件下寒蘭花總黃酮含量為：90 ℃殺青＞不殺青＞水蒸氣殺青。寒蘭花提取液的DPPH清除能力排序為：90 ℃殺青＞不殺青≈水蒸氣殺青。不同烘干溫度下寒蘭花總黃酮的含量差別不大。因此，對于寒蘭花的干燥儲存需要采用合適的殺青方法，有利于寒蘭花中功效物質(zhì)保存，保留寒蘭花的利用價值。