草果化學(xué)成分的研究

柳 航 王 敏 許 耶 張海霞 葛衛(wèi)紅?

（1.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院藥學(xué)部， 江蘇 南京210008； 2.南京鼓樓大藥店有限公司， 江蘇 南京210008）

草果為姜科豆蔻屬植物草果Amomum tsao?koCrevost et Lemarie 的干燥成熟果實(shí)，別名草果仁、草果子，主產(chǎn)于廣西、云南、貴州等省，其功效燥濕溫中、截瘧除痰，用于寒濕中阻、脘腹脹痛、痞滿嘔吐、瘧疾寒熱、瘟疫發(fā)熱。前期研究表明，草果主要含有萜類（二萜、單萜）、黃酮類、酚類、二芳基庚烷類成分［1?4］，其提取物具有顯著的抗炎、抗氧化作用［5?6］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)草果95%乙醇提取物進(jìn)行初步研究，從中分離得到10 個(gè)化合物，化合物2、4～8 為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

Waters ACQUITY UPLC I?Class ／XEVO TQD 超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters 公司）；Varian Mercury?400 核磁共振儀（美 國(guó)Varian 公 司）；INOVA?600 核磁共振儀（美國(guó)Inova 公司）；薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜硅膠（100～200、200～300 目）（青島海洋化工廠）；安捷倫1200 高效液相色譜儀帶二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；QuikSep 50 I 型中壓液相、QuikSep?50Ⅱ型高壓制備液相色譜儀（北京慧德易科技有限公司）。YMC?Park ODS?A C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、YMC?Pack Ph（20 mm×250 mm，5 μm）分析柱，YMC?Pack Ph（4.6 mm×150 mm，5 μm）、YMC?Park ODS?A C18（20 mm×250 mm，5 μm）制備柱（日本YMC 公司）。聚酰胺填料（河北滄州寶恩吸附材料科技有限公司）；C18反相ODS 填料（日本YMC 公司）。所用試劑均為分析純或色譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

草果2017 年6 月購(gòu)自安徽亳州（產(chǎn)地云南曲靖），經(jīng)南京鼓樓醫(yī)院張海霞副主任中藥師鑒定為姜科豆蔻屬植物草果Amomum tsao?koCrevost et Lemarie 的干燥成熟果實(shí)，樣本保存于南京鼓樓醫(yī)院臨床藥學(xué)研究室（GL20170001）。

2 提取與分離

20 kg 藥材用95% 乙醇煎煮提取3 次，每次2 h，合并提取液，60 ℃減壓回收溶劑得到10 L 濃縮液，等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3 次，萃取液減壓濃縮，得到石油醚萃取物102.4 g、乙酸乙酯萃取物280.6 g、正丁醇萃取物117.3 g。乙酸乙酯萃取物（280.6 g）經(jīng)聚酰胺經(jīng)柱色 譜，乙 醇?水（0 ∶ 100、30 ∶ 70、60 ∶ 40、95 ∶5）洗脫，得到4 個(gè)流分A～D，流分B 經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（100 ∶0～1 ∶2）梯度洗脫，得到15 個(gè)流分B1～B15，B4經(jīng)高壓制備HPLC 分離純化，得化合物5（11 mg）、6（16 mg）、8（9 mg）；B13經(jīng)高壓制備HPLC 分離純化，得化合物9（16 mg）、10（26 mg）。流分C 經(jīng)硅膠柱，石油醚?乙酸乙酯（100 ∶8～1 ∶2）梯度洗脫，得21 個(gè)流分C1～C21，C17經(jīng)高壓制備HPLC 分離純化，得化合物4（15 mg）、7（13 mg）。流分D 通過中壓制備HPLC，甲醇?水（20 ∶80～45 ∶55）梯度洗脫3 h，每約350 mL 收集1 份，得到24 個(gè)流分D1～D24，D3通過高壓制備HPLC 得化合物1（7 mg），D5得化合物2（8 mg），D12得化合物3（24 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：111 ［M＋H］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C6H6O2。1H?NMR（400 MHz，DMSO?d6）δ：8.85（2H，s，1，6?OH），6.61（2H，m，H?2，5），6.76（2H，m，H?3，4）；13C?NMR（100 MHz，DMSO?d6）δ：145.6（C?1，6），116.1（C?2，5），119.8（C?3，4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為鄰苯二酚。

化合物2：白色針晶（甲醇）。ESI?MSm／z：189 ［M ＋Na］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分 子式為 C9H10O3。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.08（1H，d，J＝7.8 Hz，H?2，6），6.74（1H，d，J＝7.8 Hz，H?3，5），2.82（1H，t，J＝7.2 Hz，H?1′），2.61（1H，t，J＝7.2 Hz，H?2′）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：132.9（C?1），131.5（C?2，6），115.9（C?3，5），159.3（C?4），36.9（C?1′），30.7（C?2′），178.5（C?3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［8］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯丙酸。

化合物3：白色固體（甲醇）。ESI?MSm／z：181 ［M ＋H］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C9H8O4。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.11（1H，d，J＝1.8 Hz，H?2），6.82（1H，d，J＝8.4 Hz，H?5），6.99（1H，dd，J＝8.4，1.8 Hz，H?6），7.45（1H，d，J＝15.6 Hz，H?7），6.33（1H，d，J＝15.6 Hz，H?8）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：128.5（C?1），114.9（C?2），147.1（C?3），149.2（C?4），115.3（C?5），121.6（C?6），146.7（C?7），115.3（C?8），172.6（C?9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物4：棕色無定形粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：335 ［M＋Na］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C15H20O7。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.06（1H，d，J＝1.8 Hz，H?3），6.76（1H，dd，J＝7.8，1.8 Hz，H?5），6.78（1H，d，J＝7.8 Hz，H?6），3.29（2H，d，J＝6.0 Hz，H?7），5.95（1H，ddt，J＝16.8，10.2，6.0 Hz，H?8），5.02（1H，m，H?9a），5.06（1H，m，H?9b），4.74（1H，d，J＝7.2 Hz，H?1′）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：140.1（C?1），147.5（C?2），120.1（C?3），131.7（C?4），125.6（C?5），117.8（C?6），41.4（C?7），134.0（C?8），116.5（C?9），103.5（C?1′），75.0（C?2′），78.0（C?3′），71.5（C?4′），78.5（C?5′），62.6（C?6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為1?O?β?D?吡喃葡萄糖?2?羥基?4?烯丙基苯。

化合物5：淡黃色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：279 ［M＋H］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C15H18O5。1H?NMR（400 MHz，DMSO?d6）δ：6.24（1H，d，J＝9.2 Hz，H?2），7.96（1H，d，J＝9.2 Hz，H?3），7.53（1H，d，J＝8.8 Hz，H?5），7.03（1H，d，J＝8.8 Hz，H?6），3.86（3H，s，7?OCH3），2.87（1H，m，H?1′a），2.80（1H，m，H?1′b），3.52（1H，m，H?2′），1.13（3H，s，H?4′），1.13（3H，s，H?5′）；13C?NMR（100 M Hz，DMSO?d6）δ：160.6（C?2），112.6（C?3），144.8（C?4），116.1（C?4a），126.9（C?5），107.9（C?6），160.5（C?7），56.2（7?OCH3），112.1（C?8），153.1（C?8a），25.0（C?1′），72.0（C?2′），76.2（C?3′），25.6（C?4′），25.5（C?5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為2′，3′?dihydroxyl?osthole。

化合物6：無色針狀結(jié)晶（甲醇）。ESI?MSm／z：197 ［M＋H］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C11H16O3。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.79（1H，s，H?3），2.02（1H，m，H?5a），1.56（1H，dd，J＝14.4，3.6 Hz，H?5b），4.24（1H，m，H?6），2.45（1H，dt，J＝13.8，3.6 Hz H?7a），1.77（1H，overlapped，H?7b），1.79（3H，s，H?8），1.31（3H，s，H?9），1.50（3H，s，H?10）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：175.3（C?2），114.2（C?3），186.5（C?3a），38.0（C?4），48.8（C?5），68.1（C?6），47.3（C?7），89.8（C?7a），28.3（C?8），31.9（C?9），27.8（C?10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為（＋）?loliolide。

化合物7：白色無定形粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：257 ［M ＋ H］＋，結(jié) 合1H?NMR 和13C?NMR譜，推測(cè)其分子式為C15H28O3。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.20（1H，dd，J＝11.4，4.2 Hz，H?1），1.92（1H，m，H?2a），1.54（1H，m，H?2b），1.67（1H，m，H?3a），1.50（1H，m，H?3b），1.55（1H，m，H?5），1.63（1H，m，H?6a），1.51（1H，m，H?6b），1.51（1H，m，H?8a），1.35（1H，m，H?8b），1.66（1H，m，H?9a），1.38（1H，m，H?9b），1.64（1H，m，H?11），0.93（3H，d，J＝6.6 Hz，H?12），0.91（3H，s，J＝6.6 Hz，H?13），0.99（3H，s，H?14），1.06（3H，s，H?15）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：78.2（C?1），27.2（C?2），39.4（C?3），70.0（C?4），44.5（C?5），28.4（C?6），72.0（C?7），30.0（C?8），34.6（C?9），38.8（C?10），39.0（C?11），17.2（C?12），17.4（C?13），11.8（C?14），29.5（C?15）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為1β，4β，7α?trihydroxy?eudesmane.

化合物8：白色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：297 ［M＋H］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C15H20O6。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.13（1H，s，H?2），7.86（1H，d，J＝15.6 Hz，H?4），6.45（1H，d，J＝15.6 Hz，H?5），2.14（3H，brs，H?6），2.29（1H，dd，J＝13.8，7.2 Hz，H?3′a），1.91（1H，dd，J＝13.8，10.2 Hz，H?3′b），3.87（1H，m，H?4′），1.88（1H，dd，J＝13.2，11.4 Hz，H?5′a），1.75（1H，dd，J＝13.2，7.2 Hz，H?5′b），1.35（3H，s，H?7′），1.11（3H，s，H?9′）；13C?NMR（150 MHz，CD3OD）δ：166.4（C?1），118.8（C?2），149.9（C?3），132.1（C?4），131.5（C?5），20.4（C?6），81.9（C?1′），87.6（C?2′），42.0（C?3′），64.2（C?4′），40.6（C?5′），52.2（C?6′），17.9（C?7′），177.9（C?8′），14.0（C?9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為R?5?（1R，5S?dimethyl?3R，4R，8S?trihydroxy?7?oxabicyclo ［3，2，1］?oct?8?yl）?3?methyl?2Z，4E?pentadienoic acid。

化合物9：黃色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：347 ［M＋Na］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C20H20O4。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.92（2H，t，J＝7.2 Hz，H?1），2.86（2H，t，J＝7.2 Hz，H?2），6.29（1H，d，J＝15.6 Hz，H?4），7.42（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H?5），6.89（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H?6），6.99（1H，d，J＝15.6 Hz，H?7），7.06（2H，d，J＝8.4 Hz，H?2′，6′），6.72（2H，d，J＝8.4 Hz，H?3′，5′），7.16（1H，brs，H?2″），6.81（1H，d，J＝8.4 Hz，H?5″），7.03（1H，d，J＝8.4 Hz，H?6″），3.91（3H，s，3″?OCH3）；13C?NMR（125 MHz，CD3OD）δ：31.1（C?1），43.4（C?2），202.7（C?3），128.9（C?4），146.0（C?5），125.2（C?6），143.8（C?7），133.2（C?1′），130.3（C?2′，6′），116.2（C?3′，5′），156.6（C?4′），129.7（C?1″），111.1（C?2″），149.2（C?3″），149.4（C?4″），116.5（C?5″），122.9（C?6″），56.5（3″?OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為tsaokoarylone。

化合物10：黃色粉末（甲醇）。ESI?MSm／z：317 ［M＋Na］＋，結(jié)合1H?NMR 和13C?NMR 譜，推測(cè)其分子式為C19H18O3。1H?NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.93（2H，t，J＝7.2 Hz，H?1），2.86（2H，t，J＝7.2 Hz，H?2），6.28（1H，d，J＝15.6 Hz，H?4），7.40（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H?5），6.86（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H?6），7.00（1H，d，J＝15.6 Hz，H?7），7.06（2H，d，J＝8.4 Hz，H?2′，6′），6.72（2H，d，J＝8.4 Hz，H?3′，5′），7.38（2H，d，J＝8.4 Hz，H?2″，6″），6.80（2H，d，J＝8.4 Hz，H?3″，5″）；13C?NMR（125 MHz，CD3OD）δ：30.9（C?1），43.2（C?2），202.9（C?3），128.8（C?4），146.2（C?5），124.9（C?6），143.7（C?7），133.3（C?1′），130.3（C?2′，6′），116.1（C?3′，5′），156.1（C?4′），129.2（C?1″），130.2（C?2″，6″），116.7（C?3″，5″），160.2（C?4″）。以上數(shù)據(jù)與文 獻(xiàn) ［16］基本一 致，故鑒定 為7?bis?（4?hydroxyphenyl）?4E，6E?heptadien?3?one。