毛梗豨薟草乙酸乙酯部位化合物分離與結構解析

陳冠宜 朱伶俐 靳永亮 張璐 熊文嬌 劉華*

(1.江西中醫藥大學科技學院，江西 南昌 330004；2.江西中醫藥大學，江西 南昌 330000)

0 引言

中藥豨薟草是菊科植物豨薟、腺梗豨薟和毛梗豨薟的干燥地上部分，為我國傳統中草藥，用藥歷史悠久，其化學成分復雜，廣泛應用于臨床，性寒，味辛、苦，歸肝、腎經，具有利關節、抗血栓、解毒、祛風濕等臨床療效。目前，對豨薟草的研究多集中在原植物豨薟與腺梗豨薟上，對毛梗豨薟的研究較少，藥理實驗表明，豨簽草中的二萜類、黃酮類、倍半萜類成分能夠能有效地祛除風濕、抑制腫瘤、保護心血管系統。

1 化合物結構解析

運用不同柱色譜法，從毛梗豨薟草乙酸乙酯萃取部位分離得到6 種黃酮及酚酸類化合物，分別為槲皮素(化合物1)，水楊醇(化合物2)，對羥基苯乙酮(化合物3)，4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮(化合物4)，3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛(化合物5)，對羥基苯甲醛(化合物6)。其中化合物2-5 為首次從毛梗豨薟草植物中分離得到。

化合物1：槲皮素

黃色針晶(甲醇)，ESI-MSm/z：303 [M+H]+，分子式為C15H10O7。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 譜 中，δ7.51(1H，s，H-2’)，6.72(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5’)，7.37(1H，d，J= 8.5 Hz，H-6’)為黃酮B 環上的ABX 系統。6.02(1H，s，H-6)與6.24(1H，s，H-8)為黃酮A環上位于間位的兩個氫信號。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)譜中，δ175.8 是明顯的羰基碳信號。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為槲皮素。

化合物2：水楊醇

淡黃色粉末(水)，ESI-MSm/z：126 [M-H]-，分子式為C7H8O2。

1H-NMR(600 MHz，D2O) 中，δ 7.24(1H，dd，J=7.5Hz，J=1.7Hz， H-3)，6.84(1H，d，J= 8.1 Hz，H-6)推知該化合物為苯環的鄰位取代。且該化合物含有1 個羥甲基[δH：4.57(2H，s，H-7)，δC：59.6]。13C-NMR(150 MHz，D2O) 中，δ126.5，129.6，120.5，129.5，115.5為典型的苯環碳信號。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為水楊醇。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物3：對羥基苯乙酮

無色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：134 [M-H]-，分子式為C8H8O2。

1H-NMR(600 MHz，CD3OD)中，δ7.87，6.80，2.53 氫信號的積分比值為2:2:3，推知該化合物為苯環的對位取代。且該化合物含1 個 乙 酰 基[δH：2.53(3H，s，8-CH3)；δC：199.4(C-7)，26.2(C-8)]。13C-NMR(150 MHz，CD3OD) 中，δ129.2，132.2，116.3，165.9為典型的苯環碳信號，且132.2，116.3 的碳信號強度明顯是其他碳信號的2 倍。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為對羥基苯乙酮。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物4：4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮

無色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：163 [M-H]-，分子式為C10H12O2。

1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 譜 中，δ7.02(2H，d，J= 8.5 Hz，H-2’/6’)，6.70(2H，d，J= 8.5 Hz，H-3’/5’)推 知 該 化 合 物 為 苯環 的 對 位 取 代，且 含1 個 乙 酰 基[δH：2.14(3H，s，1-CH3)；δC：28.6(C-1)；210.0(C-2)]。13C-NMR(150 MHz，CD3OD) 中，δ131.8，128.8，114.7，155.2 為典型的苯環碳信號。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為4-(4-羥基-苯基)-2-丁酮。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物5：3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛

淡黃色固體(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：183.0645 [M+H]+，分子式為C9H10O4。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 中，δ9.74(1H，s，-CHO) 是明顯的苯環上醛基氫取代信號，3.93(6H，s，-OCH3)提示有2 個連氧甲基。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)中，δ191.4 是一個醛基碳；55.4 是與氧相連的飽和碳，且其碳信號強度比旁邊的明顯多出一倍，推測55.4 是兩個碳。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為3,5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛。該化合物為首次從毛梗豨薟草中分離得到。

化合物6：對羥基苯甲醛

淡黃色粉末(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：123.0441 [M+H]+，分子式為C7H6O2。

在1H-NMR(600 MHz，CD3OD) 中，δ9.72(1H，s，-CHO) 是明顯的苯環上醛基氫取代信號。6.87(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2/6)，7.76(2H，d，J= 8.7 Hz，H-3/5)為苯環的鄰位氫，提示該苯環為對位取代。在13C-NMR(150 MHz，CD3OD)中，δ191.2 是一個醛基碳信號。綜上，并1H-NMR 與13C-NMR 數據與文獻對比一致，進而可以鑒定該化合物為對羥基苯甲醛。

2 分離制備過程

2.1 儀器試劑

石油醚AR(60-90℃)、甲醇、甲醇AR、乙酸乙酯AR、飲用純凈水、二氯甲烷AR、無水乙醇AR、濃硫酸AR、正丁醇AR、HPLC液相色譜(梯度)。

2.2 實驗材料

分析型反向色譜柱：Welehrom⑧高效液相色譜(4.6mm× 250mm,5μm)

羧甲基纖維素鈉(化學純)

制備型反相色譜柱：YMC-Pack 0DS-AC18 制備柱，20× 250mm，5μm

硅膠(100-200 目)

硅膠(300-400 目)

薄層色譜用硅膠板GF254

ODS

2.3 實驗儀器

數顯鼓風干燥箱GZX-9140MBF、旋轉蒸發儀(RE-52)、Waters 2695 型分析液相Waters2489 型制備液相、循環水真空泵SHE-DC、超聲波清洗器KQ-25ODB 、Buchi 中壓制備純化系統、數顯恒溫水浴鍋(HH-2)

2.4 提取

將10kg 干燥毛梗豨薟草粉碎，過20 目篩，以95%乙醇室溫回流提取3 次，每次3h，合并提取液。后經過旋轉蒸發儀回收溶劑，獲得總浸膏約800g，后以5 倍量水混懸，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每種極性溶劑萃取4 次，每次2L，得各萃取部位，經篩選發現乙酸乙酯萃取部位活性較為顯著。

2.5 分離

具有活性的乙酸乙酯萃取部位(100g)，析出結晶，用乙醇重結晶，得到化合物1(2g)。其他母液再用95%乙醇溶解，與100g 100-200 目硅膠干法拌樣，水浴鍋干燥蒸干溶劑得干粉待用。取300-400 目硅膠1kg,石油醚浸潤裝柱，測得柱體積約2.5L。將拌樣后的干粉于色譜柱中上樣，依次以石油醚:乙酸乙酯15:1- 0:1 梯度洗脫，后用甲醇洗脫，每個梯度洗脫3～5 個柱體積。洗脫后的流分經薄層色譜點樣展開合并相同Rf值，得到A～D 組分。

A (3g),運用開放型ODS 柱色譜法進行分離，以30%～ 100%甲醇 梯度洗脫，每個梯度下沖5 個柱體積。洗脫后的餾分經薄層色譜點樣展開合并相同Rf值，得到a-1～4。a-1(1.12g)出現白色粉末，用甲醇進行重結晶，得到化合物2(50mg)。

B (6g)與a 一樣以開放型ODS 柱色譜法進行分離，得到b-1～3. b-2(0.51g)運用制備型高壓柱色譜進行分離，以30%甲醇等度洗脫，得到化合物3(10mg)。

C (4g)與a 一樣以開放型ODS 柱色譜法進行分離，得到c-1～5. C-2(1.24g)運用制備型高壓柱色譜進行分離，以50%甲醇等度洗脫，得到化合物4(50mg)。

D (4g)與a-樣以開放型ODS 柱色譜法進行分離，得到d-1～5.d-2(0.82 g)以適量甲醇溶解，經凝膠柱色譜分離，所得餾分經薄層色譜點樣展開合并相 同Rf值，得到d-2-1～4. d-2-1(0.13g)、 d-2-3(0.2 2g)均經制備型高壓柱色譜分離，均以30%甲醇等度洗脫，分別得到d-3(0.52g)、d-4(0.72g)分別經制備型高壓柱色譜分離，分別以50%甲醇、40%甲醇 等度洗脫，分別得到化合物5(7mg)與6(6mg)。

3 結語

豨薟草用藥歷史悠久，常用于風濕痹痛的治療，但也發現了一些新的藥理活性，如光抗老化性和多發性硬化癥等，這些藥理活性研究大多缺乏精確跟蹤，活性成分的作用機制也相對模糊，如果我們能進一步討論具體的活性成分與已知活性化合物的構效關系，可以在一定程度上促進藥物靶向治療的發展，為新藥研發提供新思路。