缺氧誘導因子-1α及血管內皮生長因子的表達與胃癌血管生成的關系

曹輝瓊，蔡清紅

(惠州市第三人民醫院消化科，廣東 惠州 516001)

胃癌是臨床上最為常見的惡性腫瘤之一，也是威脅人類健康和生命安全的主要惡性腫瘤，具有較高的發病率，好發于中老年群體中，近年來其發病率有了一定的上升，并且呈現出年輕化趨勢。缺氧在惡性腫瘤中較為常見，解決這一問題的關鍵在于新生血管體系的形成，而形成新生血管又會對腫瘤的發生和進展造成一定的影響，對預后隨之造成相應的影響[1]。大量研究實踐證明，刺激腫瘤血管生成的生長因子比較多，其中較為常見的生長因子中，血管內皮生長因子(VEGF)比較關鍵[2]。研究表明，在腫瘤血管的生成中，缺氧誘導因子-1(HIF-1)具有調控作用，對于眾多靶基因的表達進行調控，其中便包括VEGF[3]。HIF-1α是唯一的氧分子調節亞單位，而其過度表達已被證明對血管生成具有促進作用。本研究為進一步探究HIF-1α、VEGF的表達與胃癌血管生成的關系，將我院消化內科2014年1月～2018年6月收治的60例胃癌患者納入樣本中展開探究。現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2014年1月～2018年6月在我院消化內科治療的胃癌患者60例進行研究，男34例，女26例；年齡43～76歲，平均(57.49±1.34)歲；病程7年，平均(4.15±0.37)年。臨床TNM分期方面，1期、2期、3期、4期各有9例、20例、23例、8例。組織學分級方面，高分化、中分化、低分化各有16例、30例、14例。轉移情況方面，轉移和未轉移各有31例、29例。另選取消化內科胃鏡室胃鏡下12例正常胃黏膜組織標本進行對照研究，男7例，女5例；年齡37～75歲，平均(56.12±2.48)歲。

1.2方法

1.2.1免疫組化染色：標本離體，使用4%甲醛用于固定，制作成蠟塊，切成4 μm厚片狀。脫蠟處理，置于水中，3%的雙氧水封閉處理，持續10 min左右。HIF-1α采用檸檬酸鈉-微波進行修復，工作濃度控制為1∶100。采用復合酶修復用于VEGF的修復，控制好工作濃度為1∶50。選擇即用型CD34。

1.2.2結果判定：參照文獻[4]中的方法，光鏡下觀察HIF-1α蛋白，若細胞內核表現為淺黃色、棕黃色細顆粒，則為陽性。高倍鏡下(*400)對全部切片隨機選擇5個視野，共計數1000個細胞，即每個切片200個細胞。對每張切片中的陽性細胞占比進行計算，標準：①陰性片：切片中陽性細胞占比在1%以下；②陽性(+)：切片中陽性細胞占比1%～10%；③陽性(++)：切片中陽性細胞占比11%～50%；④陽性(+++)：切片中陽性細胞占比50%以上。 光鏡下觀察VEGF蛋白，若腫瘤細胞胞質內表現為淺黃色、棕黃色細顆粒，則為陽性，將VEGF分為陰性(-)、陽性(+)、陽性(++)、陽性(+++)四個級別。

1.3統計學處理：數據分析使用SPSS 21.0統計軟件包，相關性采用Spearman分析，計數資料以率(%)表示，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1胃癌組織中HIF-1α、VEGF的表達：HIF-1α陽性信號表達欲細胞核、細胞質中，陽性表達例數29例，陽性表達率為48.33%(29/60)。VEGF陽性表達例數25例，陽性率為41.67%(25/60)。同正常胃黏膜組織相比，胃癌組織HIF-1α陽性表達率和VEGF陽性表達率比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。在不同分化程度胃癌中表達中，HIF-1α和VEGF陽性表達比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2胃癌組織HIF-1α、VEGF表達及血管生成的關系：針對HIF-1α、VEGF同血管生成的關系，行Spearman相關性分析發現，HIF-1α、VEGF表達有一致性，符合率為86.67%(52/60)，且二者表達呈顯著正相關(r=0.714，P<0.05)。見表2。VEGF與血管生成呈顯著正相關(r=0.687，P<0.05)。在血管生成方面，陽性腫瘤組織與其相應的陰性組織差異有統計學意義(P<0.05)，同時陽性者MVD值與陰性的血管生成值差異有統計學意義(P<0.05)，陽性明顯MVD值明顯高于陰性血管生成值。

表1 胃癌組織中HIF-1α、VEGF的表達

表2 胃癌組織HIF-1α、VEGF表達成的關系

3 討論

臨床消化內科中，胃癌是常見的惡性腫瘤，容易發生腫瘤轉移，預后性較差，一旦治療不及時或者治療效果不理想，患者將極有可能死亡。腫瘤的轉移機制近年來得到臨床的廣泛研究多數研究認為在腫瘤發生轉移、生長的過程中，新生血管的生成是其重要因子，參與到了腫瘤侵襲轉移。

研究表明，腫瘤新生血管在生成的過程，起到決定性的影響因素，周圍微環境中促進因子和抑制因子等正負調控因子的平衡是關鍵[5]。從當前臨床研究來看，血管內皮生長因子(VGEF)是已知的重要的血管生成促進因子，具有高度的特異性特點，屬于血管內皮細胞有絲分裂素[6]。HIF-1在基因水平上，對VRGF的表達形成直接性調控。其中HIF-1的亞單位主要有兩個，分別為HIF-1α和HIF-1β，而HIF-1α是唯一的低氧分子調節亞單位，對HIF-1的活性具有直接性作用。本研究結果顯示，胃癌組織中的HIF-1α表達和VEGF表達呈顯著正相關，并且二者在腫瘤表達中存在符合率比較高，具有高度相似性。有關HIF-1α和VEGF與胃癌血管生成的機制研究比較多，不過多數研究都認為在腫瘤的生長和發展中，腫瘤體積會不斷地增大，血供因為無法滿足其生長和發展要求出現不足的情況，導致發生缺氧壞死，誘導HIF-1α過度表達[7]。HIF-1α的過度表達，對于下游靶基因VEGF的表達也起到誘發作用，致使VEGF表達增強，活化的HIF-1α與靶基因上的HIF-1α結合位點結合，形成轉錄起始復合物，從而起動靶基因轉錄和相應的蛋白產物增加。而VEGF表達的增加，對血管內皮細胞表面的VEGFR1和VEGFR2形成作用，激活一系列缺氧轉導通路，造成新生血管生成[7]。在腫瘤的生長、轉移過程中，新血管生成是其充分且必要條件，VEGF以旁分泌方式作用于細胞上的兩種受體，誘導血管形成[8]。相關研究證實，在腫瘤的生長、浸潤和轉移過程中，VEGF的表達參與其中，使腫瘤細胞在適應缺氧、能量代謝、腫瘤血管生成和轉移中起重要作用[8]。因此，在對胃癌轉移潛能和預后的判斷過程中，加強對HIF-1α和VEGF的聯合檢測具有十分重要的臨床指導意義。

綜上所述，缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)及血管內皮生長因子(VEGF)的表達與胃癌血管生成關系密切，呈顯著正相關，二者的表達對血管生成以及腫瘤的轉移起到了促進作用。