阿魏酸鈉對頸動脈易損斑塊患者TLR4/NF-κB 信號通路及MMP-7、MMP-9 的影響

胡曉飛 朱先華 金笑平

急性缺血性腦卒中是最常見的卒中類型，占我國腦卒中的69.6%～70.8%[1]，具有高復發(fā)率、高致殘率的特點。頸動脈易損斑塊的破裂和血栓的形成是引起缺血性腦卒中的主要原因之一[2-3]。影響斑塊易損性的因素主要包括免疫炎癥反應、細胞外基質降解、脂質代謝異常、氧化應激、細胞凋亡及血管新生等。研究提示Toll樣受體4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信號轉導途徑可導致一系列與易損斑塊相關的炎性因子的大量合成與釋放，在易損斑塊的發(fā)展中起重要作用[4]。基質金屬蛋白酶（MMPs）是一種鋅離子依賴的蛋白水解酶，主要的功能是降解和重塑細胞外基質，其參與了動脈粥樣硬化、易損斑塊的形成和破裂的過程[5]。阿魏酸鈉是中藥當歸和川芎的有效單體成分，先前的研究表明阿魏酸鈉可能從不同環(huán)節(jié)、多靶點發(fā)揮協同作用，通過調節(jié)血脂、抗氧化損傷、抑制炎癥細胞因子進而干預動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[6]。目前阿魏酸鈉對頸動脈易損斑塊TLR4/NF-κB 信號通路的調節(jié)及對血清基質金屬蛋白酶7（MMP-7）、基質金屬蛋白酶9（MMP-9）的影響尚不明確，本研究就此展開探討。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2017 年1 月至2018 年6 月本院神經內科收治的輕型缺血性腦卒中且頸動脈超聲檢查提示存在易損斑塊的患者174 例，其中男100 例，女74 例；年齡45～78（68.36±8.15）歲。納入標準：（1）CT 或MRI檢查證實為急性缺血性腦卒中，且診斷符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中關于急性缺血性腦卒中的標準[7]；（2）首次發(fā)病，且發(fā)病至入院時間＜48h；（3）臨床有經驗的超聲科醫(yī)師檢查發(fā)現存在頸動脈易損斑塊，即斑塊呈等回聲、低回聲、混合回聲和潰瘍[8]。排除標準：（1）合并冠心病者；（2）有嚴重心、肝、腎功能障礙者；（3）有急、慢性炎癥性疾病者；（4）有腫瘤性疾病者；（5）有自身免疫性疾病者；（6）有血液系統疾病者；（7）2 周內有創(chuàng)傷史或行外科手術者；（8）入院前1 個月內服用過免疫抑制劑、激素類藥物者。采用隨機數字表法將患者分為實驗組和對照組，每組87 例。兩組患者性別、年齡、高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙史、飲酒史比較差異均無統計學意義（均P＞0.05），見表1。本研究經醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準通過，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 治療方法對照組患者入院后給予抗血小板聚集，降脂，控制血壓、血糖等常規(guī)基礎治療。實驗組患者在常規(guī)基礎治療的同時口服阿魏酸鈉片（批準文號：國藥準字H51023608，規(guī)格：50mg/片，成都第一制藥有限公司），100mg/次，3 次/d。兩組均治療8 周。

1.3 標本收集 所有患者均于入院當天及治療結束后當天同一時間點采血5ml，于ST40R 離心機（賽默飛爾科技有限公司）內以2000r/min 離心10min，分離血清，分裝于EP 管內，血清標本保存于-80℃冰箱中備用。

1.4 血清學檢測 采用ELISA 法檢測所有患者血清超

敏-C 反應蛋白（hs-CRP）、白細胞介素6（IL-6）、TLR4、NF-κB、MMP-7、MMP-9 水平，實驗步驟嚴格參照試劑盒說明書操作，相關的試劑盒均購自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.5 統計學處理 采用SPSS 22.0 統計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者治療前后炎癥指標比較 治療前兩組患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。治療后實驗組患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平均較對照組下降，且兩組患者治療后血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB水平均較治療前下降，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表2。

2.2 兩組患者治療前后血清MMPs 水平比較 治療前兩組患者血清MMP-7 和MMP-9 水平比較差異均無統計學意義（均P＞0.05）。治療后實驗組患者血清MMP-7 和MMP-9 水平均較對照組下降，且兩組患者治療后血清MMP-7 和MMP-9 水平均較治療前下降，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表3。

3 討論

目前易損斑塊被譽為心腦血管病領域的“罪犯斑塊”。研究表明易損斑塊不可預測的破裂導致了60%～65%的冠脈栓塞[9]及將近90%的缺血性腦卒中[10]。因此尋找能夠穩(wěn)定易損斑塊的藥物，對延緩、遏制我國心腦血管病發(fā)病率有著重要的意義。

影響動脈粥樣斑塊易損性的內在機制包括免疫炎癥、細胞外基質的降解、氧化應激反應、脂質代謝異常、巨噬單核細胞浸潤和泡沫細胞形成、內皮功能損傷、新生血管形成等。其中炎癥及免疫防御是引起斑塊易損性的關鍵因素。TLR4 是炎癥及天然免疫系統的一種跨膜信號傳遞受體蛋白，在炎癥與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程架起了一座橋梁。在多種內源性配體的作用下，TLR4 可通過髓樣分化因子88（MYD88）依賴或非依賴的信號轉導通路，激活NF-κB，促使炎性因子的合成和釋放，活化巨噬細胞，促進平滑肌細胞凋亡，使斑塊內基質合成減少、降解增多，脂質池擴大、纖維帽變薄，最終導致斑塊易于破裂及血栓形成[11]。hs-CRP 是炎癥的敏感指標之一。IL-6 是炎性反應中起核心作用的重要介質，可致血清hs-CRP 濃度升高，纖維蛋白原合成增加，誘導血管活性物質釋放、促進凝血及血栓形成，并通過多種機制促使易損斑塊破裂[12-13]。

表1 兩組患者一般資料比較

表2 兩組患者治療前后炎癥指標比較

表3 兩組患者治療前后血清MMPs 水平比較（μg/L）

阿魏酸鈉是中藥當歸和川芎的主要活性成分。現代藥理研究表明，阿魏酸鈉具有調節(jié)血脂、抗氧化、抗血小板聚集、抑制血管平滑肌細胞、保護內皮細胞等作用，同時也具有強大的抗炎作用。姚君等[14]研究發(fā)現阿魏酸鈉可以通過降低結腸NF-κB 表達及活性從而減輕腸道的炎癥反應。龔婉等[15]研究表明阿魏酸鈉可通過抑制NFκB p65 核轉位從而減輕缺血/再灌注大鼠腦神經細胞炎癥反應。胡瀟等[16]研究提示阿魏酸可降低TLRs 信號通路相關蛋白（TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB p65）的表達從而抑制PM2.5 誘導的小鼠主動脈炎癥。本研究發(fā)現在常規(guī)用藥的基礎上聯合阿魏酸鈉片治療頸動脈易損斑塊患者，治療后其血清TLR4、NF-κB、CRP、IL-6 水平均較常規(guī)治療明顯降低。結合以往研究，筆者推測阿魏酸鈉可能通過抑制TLR4/NF-κB 信號通路從而減輕炎癥反應。

MMPs 是鋅離子、鈣離子依賴性蛋白水解酶，其在細胞外基質降解與重構過程中發(fā)揮至關重要的作用。MMP-7 是一種活性最強的蛋白多糖降解酶。研究表明MMP-7 可降解血管平滑肌細胞間起連接作用的粘連蛋白，促進平滑肌細胞凋亡，破壞粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性[17]。MMP-9 是由巨噬細胞、中性粒細胞、平滑肌細胞分泌的MMPs，能對血管壁基底膜、細胞外基質發(fā)揮降解作用，可促進血管中膜平滑肌細胞向內膜遷移，使覆蓋在斑塊表面的纖維帽遭到破壞，從而降低斑塊的穩(wěn)定性[18]。本研究發(fā)現阿魏酸鈉可明顯降低易損斑塊患者血清MMP-7、MMP-9 水平，從而可能增加斑塊的穩(wěn)定性。

綜上所述，本研究結果表明阿魏酸鈉可能通過抑制頸動脈易損斑塊TLR4/NF-κB 的信號通路，降低炎癥因子hs-CRP、IL-6 水平和血清MMP-7、MMP-9 的表達，從而可能增加頸動脈易損斑塊的穩(wěn)定性。